临床常用免疫学检查.ppt

1,第八章 临床常用免疫学检查,免疫学检查是实验诊断学中的重要组成部分，常用于一些疾病的诊断与疗效监测，这些疾病主要有： 1.感染性疾病，如肝炎、伤寒等； 2.自身免疫性疾病，如SLE、类风关、自免溶、ITP等； 3.变态反应性疾病（超敏），分为四型： 4.免疫缺陷病：如AIDS。 5.肿瘤 免疫功能包括体液免疫和细胞免疫。,2,第一节 血清免疫球蛋白检测 免疫球蛋白(Ig)是指一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌，存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。Ig因其功能和理化性质分IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五大类。 一、免疫球蛋白G检测 免疫球蛋白G(IgG)为人体含量最多和最主要的Ig，占总免疫球蛋白的70-80。它对病毒、细菌和寄生虫等都有抗体活性，也是唯一能够通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。 参考值 7.016.6gL,3,临床意义 1IgG增高 多克隆性增高：即IgG、IgA、IgM均增高。常见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎等； 单克隆性增高：仅有某一种Ig增高而其他种类不增高。主要见于免疫增殖性疾病，如分泌型多发性骨髓瘤(MM)，可见到IgG、IgA、IgD或IgE增高，据此可将MM分为IgG型、IgA型、IgD型和IgE型。其中多为IgG型，其次为IgA型、IgD型，少见IgE型。,4,2. IgG降低 见于各种先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合征、病毒感染和免疫抑制剂患者。儿童较成年人低，女性稍高于男性。 需按年龄组参考值来进行分析和判断。,5,二、免疫球蛋白A检测 免疫球蛋白A(IgA)分为血清型IgA与分泌型IgA(SIgA)两种。 参考值 血清IgA为0.73.58L；SIgA：唾液平均为0.3gL，泪液为3080gL，初乳平均为5.06gL，粪便平均为1.3gL。 临床意义 1IgA增高 见于IgA型MM，SLE、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹和肾脏疾病等。 2IgA降低 见于反复呼吸道感染、非IgA型MM、重链病、轻链病、原发性和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病等。,6,三、免疫球蛋白M检测 免疫球蛋白M(IgM)是分子质量最大的Ig，约占血清总Ig的5-10, IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子，天然同族凝聚素(抗A、抗B)、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体均属此类。 参考值 0.52.6gL 临床意义 1IgM增高：见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等。此外，在原发性巨球蛋白血症时，IgM呈单克隆性明显增高； 2IgM降低：见于IgG型重链病、IgA型MM、先天性免疫缺陷症、免疫抑制疗法后、淋巴系统肿瘤和肾病综合征等。,7,四、免疫球蛋白E检测 免疫球蛋白E(IgE)为血清中最少的一种Ig，约占血清总Ig的0.002；它是一种亲细胞性抗体，与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏等有关。 参考值 ELISA法为0.10.9mgL。 临床意义 1IgE增高 见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿关节炎，以及各种过敏性疾病,寄生虫感染等； 2IgE降低 见于先天性或获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩张症等。,8,五、血清M蛋白检测 M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，它是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。 参考值 蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法 临床意义 检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。 正常人为阴性。 见于：多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道；巨球蛋白血症(Waldenstrom症)：存在大量单克隆IgM；重链病：出现Ig重链(、重链)；轻链病：出现单克隆游离轻链；半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段；7S IgG病：为恶性M蛋白病等。,9,第二节 血清补体检测 补体(complement，C)是一组具有酶原活性的不耐热的糖蛋白。 有三组分子组成： 第一组：它由传统途径的九种成分C1(C1q、C1r、C1s)C9； 第二组：B因子、D因子、P因子、H因子等； 第三组：补体调节蛋白，如C1抑制物等。 血清总补体活性或其单一补体成分的变化对某些疾病的诊断和疗效观察有极其重要的意义。,10,一、总补体溶血活性检测 总补体溶血活性(CH50)以溶血素(抗体)致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)激活待测血清中的Cl，进而引起补体活化的连锁反应，（在绵羊红细胞上形成多分子的聚合物，影响其膜表面的结构与功能，）最终导致绵羊红细胞溶解。 溶血程度在一定范围内（2080溶血率）与补体的活性呈正相关，为S形曲线关系。故一般以50溶血作为检测终点(CH50)，较为灵敏、准确。 参考值 试管法为50100kUL,11,临床意义 主要反映补体传统途径9种补体成分(ClC9)的综合水平。 CH50增高：见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤； CH50减低：更有意义：见于各种免疫复合物性疾病，如肾小球肾炎、自身免疫性疾病(如SLE)、感染性心内膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病，重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等。,12,二、补体C3检测 补体C3(C3)是一种由肝脏合成的2-球蛋白，由和两条多肽链组成。 C3 在补体系统各成分中含量最多，是传统途径和旁路途径被激活的关键物质。 参考值 0.81.5gL 临床意义 增高：见于急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等； 减低：见于大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、 狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿关节炎等。因此检测C3对这些疾病诊断有价值。,13,第三节 细胞免疫检测 人体的淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，可分为T、B、K和NK等细胞群，它们又分别有若干亚群，各有其特异的表面标志和功能。 这些淋巴细胞群和亚群在免疫应答过程中相互协作、相互制约，共同完成对抗原物质的识别、应答和清除，从而维持机体内环境的稳定。 临床上各种免疫病均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的变化。对它们进行检测可用以判断细胞免疫功能。,14,T淋巴细胞 T淋巴细胞执行特异性细胞免疫应答，在机体细胞免疫和体液免疫中均有重要作用。 T淋巴细胞作为免疫效应细胞主要行使TDTH介导的DTH反应和TC细胞直接杀伤靶细胞。 T淋巴细胞作为免疫调节细胞，具有辅助其他免疫细胞分化和调节免疫应答（促进和抑制）的功能。,15,一、T淋巴细胞的检测 T淋巴细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，在形态学上难以区分，但是可借助于其细胞膜表面标志加以区别，此检测方法众多，现主要介绍下面几种： (一)T细胞花结形成试验 T细胞表面有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花结样细胞，称为红细胞玫瑰花结形成试验或E玫瑰花结形成试验(ERFT)。 本试验用于检测T细胞的数量。 显微镜下计数花结形成细胞（以每个淋巴细胞粘附3个或3个以上绵羊红细胞者为花结形成细胞）占淋巴细胞的比例，T淋巴细胞的百分率（EtRFC）,16,参考值 EtRFC为64.46.7 临床意义 降低： 见于免疫缺陷性疾病如恶性肿瘤、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖性疾病； 升高： 见于甲状腺功能亢进症、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动性肝炎、SLE活动期及器官移植排斥反应等。,17,T细胞花结形成试验,18,(二)T细胞转化试验 体外培养时，T淋巴细胞被丝裂原，如植物血凝素(PHA)或刀豆蛋白A(ConA)刺激，代谢活跃，增加蛋白质、RNA和DNA的合成，从而转化为母细胞，部分细胞发生有丝分裂。 计数淋巴细胞及转化的母细胞数，求出转化的百分率。 其检测方法有： 1.形态学法：母细胞特点 体积增大，浆深染，核增大，染色质疏松，核仁明显。,19,2. 3H-TdR掺入法: T淋巴细胞中加入PHA等发生有丝分裂，且伴有新的DNA合成，此时若加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），则3H-TdR可被淋巴细胞作为合成DNA的原料摄入，根据3H-TdR的摄入量，可判断细胞的增殖程度。 采用液体闪烁仪测定淋巴细胞的脉冲数分(cpm)值，计算出刺激指数（SI）。 从而反映T细胞的免疫功能。,20,参考值 形态学法：转化百分率为60.17.6。 3H-TdR掺入法：刺激指数(S1)测定组cpm均值对照组cpm均值；正常SI2。 临床意义 同T淋巴细胞花结形成试验。 1.判断机体的细胞免疫功能水平。 淋转率下降：细胞免疫缺陷或细胞免疫低下者，如恶性肿瘤、重症结核、慢性肝病、肝硬化、放疗、免疫治疗等； 但Down综合征时明显增高。 2. 估计疾病的疗效和预后。 恶性肿瘤治疗后，转化率上升后恢复正常，表示有效，反之疗效差，预后不良。,21,（三)、T细胞分化抗原测定 T细胞膜表面有多种特异性抗原。WHO(1986)统称为白细胞分化抗原(cluster differentiation，CD)。 如CD3代表总T细胞，CD4代表T辅助细胞(TH)，CD8代表T抑制细胞(TS)等。 应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应，荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。,22,参考值 免疫荧光法(IFA)： CD3为 63.1土10.8； CD4(TH )为 42.8土9.5； CD8(TS )为 19.6土5.9； CD4CD8(TH /TS )为(2.2土0.7)l 流式细胞术： CD3为 6185； CD4为 1858； CD8为 1948； CD4CD8为 0.92.01。,23,临床意义 CD3降低：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。 CD4降低：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者。 CD8减低：见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。 CD4CD8比值增高：见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、变态反应等； CD4CD8 比值减低：见于艾滋病(常05)。 监测器官移植排斥反应时CD4CD8比值增高预示可能发生排斥反应。 CD3、CD4、CD8较高且有CDl、CD2、CD5、CD7增高，则可能为T细胞型急性淋巴细胞白血病。,24,B淋巴细胞,B淋巴细胞功能 产生抗体 提呈抗原 分泌细胞因子参与免疫调节,25,二、B细胞分化抗原检测 应用CDl9、CD20和CD22等单克隆抗体，分别与B细胞表面抗原结合。 通过免疫荧光法、免疫酶标法或流式细胞技术进行检测，分别求出CDl9、CD20、CD22等阳性细胞百分率和B淋巴细胞数。 参考值 流式细胞术：CDl9 11.74土3.37,26,临床意义 升高：见于急性淋巴细胞白血病(B细胞型， 且有SmIg、HLA-D表达)、慢性淋巴细胞白 血病和Burkitt淋巴瘤等； 降低：见于无丙种球蛋白血症、使用化疗 或免疫抑制剂后。,27,三、自然杀伤细胞活性测定 自然杀伤细胞(NK)介导天然免疫应答，它不依赖抗体和补体，即能直接杀伤靶细胞；此外，尚有免疫调节功能，也参与移植排斥反应和某些自身免疫疾病的发生发展。 临床意义 1. NK细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一。 2.在血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染患者，NK活性减低。 3.宿主抗移植物反应者，NK活性升高。,28,29,四、细胞因子检测 细胞因子(cytokine，CK)是活化的免疫细胞为主分泌产生的免疫调节性小分子多肽。 检测细胞因子及其相应受体可了解免疫活性细胞及其他细胞的免疫功能。 目前临床上常见有IL-2，4，6，8、肿瘤坏死因子、干扰素、集落刺激因子、红细胞生成素等。 除了酶免疫测定法，目前利用PCR技术建立了定量测定IL-1，2，TNF，TGF等细胞因子的方法。,30,(一) IL-2活性和IL-2R测定 白介素-2(interleukin-2，IL-2)是白细胞介素中的一种（118）。 主要由活化T细胞（CD4）产生，作用细胞本身或邻近的CD4 和CD8 细胞 ，是机体免疫网络中最重要的调节因子(主要促进淋巴细胞生长、增殖、分化)。 它对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。 因此，IL-2活性检测已成为评价机体免疫功能的重要指标之一。,31,临床意义 IL-2： 增高：见于自身免疫性疾病(SLE、类风湿性关节炎等)、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤、排斥反应等。 降低：见于免疫缺陷病(艾滋病、联合免疫缺陷病等)、恶性肿瘤、I型糖尿病、某些病毒感染等； IL-2R： 对急性排斥反应和免疫性疾病有诊断意义，可作为病情观察和药效监测的一项指标。,32,(二)肿瘤坏死因子测定 肿瘤坏死因子(TNF)分为即两型： TNF：来源于单核细胞、吞噬细胞； TNF：来源于活化T淋巴细胞。 两型的结构虽然不同，但生物活性类似。两型都 有引起肿瘤组织出血、坏死和杀伤作用，都可 引起抗感染的炎症反应效应，以及对免疫细胞 的调节、诱生作用。,33,参考值 ELISA法为4.3土2.8gL 临床意义 TNF有炎症介质作用，能阻止内毒素休克、DIC的发生； 有抗感染效应，抑制病毒复制和杀伤病毒感染细胞； 有抗肿瘤作用，杀伤和破坏肿瘤细胞。 血中TNF水平增高，特别对某些感染性疾病(如脑膜炎球菌感染)的病情观察有价值。,34,(三)干扰素测定 干扰素(interferon，IFN)是宿主细胞受病毒感染后产生的一种非特异性防御因子，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、控制细胞增殖的作用。 是最早发现的细胞因子，因有干扰病毒感染和复制能力故称干扰素。 分为三种： 白细胞、成纤维细胞和病毒感染的组织细胞产生，为型。活化T淋巴细胞和NK淋巴细胞产生，为型。 参考值 ELISA法为14kuL 临床意义 增高：见于SLE、非活动性类风湿性关节炎、恶性肿瘤早期、急性病毒感染、再生障碍性贫血等； 减低：见于乙肝及携带者、哮喘、活动性类风湿关节炎等。,35,第四节 肿瘤标志物检测 肿瘤标志物(TM)是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。 这类物质可反映肿瘤存在和生长。 主要包括蛋白质类、激素、某些癌基因糖脂类物质和酶类。 存在于血液、细胞、组织或体液中。 TM检测对肿瘤的诊断、鉴别诊断、疗效观察及预后评价具有一定的价值。 TM含量甚微，常用非常灵敏的化学发光免疫分析法（CLIA）、RIA、ELISA测定。,36,1肿瘤普查、筛选项目的应用； 2肿瘤诊断与鉴别诊断； 3疗效与预后判断； 4生物特点和疾病阶段的判定； 5手术、化疗、放疗的监测； 6确定不知来源的转移肿瘤的原发肿瘤； 7多项肿瘤标志物的联合应用，提高检测效率；,37,理想的肿瘤标志物的特点 敏感性高，能早期检测出肿瘤患者； 特异性好，能准确鉴别肿瘤/非肿瘤患者； 有器官特异性，方便对肿瘤的定位； 与肿瘤体积大小、临床分期相关，用以判断预后； 半衰期短，可反映肿瘤的动态变化，监测治疗效果、 复发和转移； 测定方法精密度、准确性高，操作方便。,38,肿瘤抗原,肿瘤抗原分类: 根据肿瘤抗原的特异性分类法 肿瘤特异性抗原（tumor specific antigen,TSA) 肿瘤相关抗原（tumor associated antigen,TAA),39,一、蛋白质肿瘤标志物的检测 (一)甲种胎儿球蛋白测定 简称AFP是在胎儿早期由肝脏合成的一种糖蛋白。 胎儿出生后不久，AFP的合成很快受到抑制。 当肝细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新被激活，使原来已丧失合成AFP能力的细胞又重新开始合成，以致血中AFP含量明显升高。 因此血中AFP浓度检测对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。 参考价值 RIA或ELISA法为低于25gL。,40,临床意义 1. 原发性肝细胞性肝癌患者血清AFP增高，诊断阈值为超过300gL ，增高率约为7580；约有10的原发性肝癌患者其AFP为阴性。 2. 生殖腺胚胎癌(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时，血中AFP含量也可升高。 3. 病毒性肝炎、肝硬化时AFP也有不同程度的升高(20200gL)。 4. 妊娠34个月后AFP开始升高；78个月达高峰，分娩后3周正常；但多低于300gL，若孕妇血清中AFP异常升高，提示胎儿神经管缺损畸形可能。,41,(二)癌胚抗原测定 癌胚抗原(CEA)是一种富含多糖的蛋白复合物。胎儿早期的消化管及某些组织均有合成CEA的能力，但孕六个月以后含量逐渐减少，出生后含量极低。 最初发现于成人结肠癌组织中。 胃肠道恶性肿瘤时，血清CEA增加，但在乳腺癌、肺癌及其它恶性肿瘤也有增加。 故它是一种广谱肿瘤标志物，不能作为诊断某种恶性肿瘤的特异性指标。 但在恶性肿瘤的鉴别诊断、病情监测、疗效评估仍有重要临床价值。,42,参考值 ELISA法和RIA法为15gL 临床意义 1CEA明显增高见于90的胰腺癌、74的结肠癌、60的乳腺癌患者，常超过60gL。 2动态观察一般病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高。 3结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘等也常 见CEA轻度升高。 4最近发现，胃液和唾液中CEA检测对胃癌诊断有一定价值。,43,(三)组织多肽抗原测定 组织多肽抗原(TPA)是存在于胎盘和大部分肿瘤组 织细胞膜和细胞质中的一种单链多肽。 在恶性肿瘤患者血清中的检出率高达70以上， 但它的增高与肿瘤发生部位和组织类型无相关性。 而在观察疗效上则有较高的敏感性。 参考值 ELISA法为130UL,44,临床意义 1.恶性肿瘤患者血清TPA水平可显著升高。 2.经治疗好转后，TPA水平降低；若TPA再次升高提示 有肿瘤复发。 3.TPA和CEA同时检测可有利于恶性与非恶性乳腺病的 鉴别诊断。 4.急性肝炎、胰腺炎、肺炎、妊娠后3个月都可升高。,45,(四)前列腺特异抗原测定 前列腺特异抗原(PSA)是一种由前列腺分泌的单链 糖蛋白，它存在于前列腺管道的上皮细胞中，在 前列腺癌时可见PSA血清水平明显升高。 今年发现血清总PSA(T-PSA)中有80以结合形式存 在，称复合PSA(c-PSA)；20的以游离形式存在(F-PSA)；其比值对诊断更有特异性和准确性。,46,参考值 RIA法和CLIA法： T-PSA0.25。 临床意义 1前列腺癌时6090患者血清PSA水平明显升高； 当行外科切除术后，90患者血清PSA水平明显降低。 2若见PSA水平升高，即有转移或复发的可能。 3良性前列腺瘤、前列腺肥大或急性前列腺炎时，约 有14的患者血清PSA水平升高，此时应注意鉴别。,47,二、糖脂肿瘤标志物检测 (一)癌抗原-50测定 癌抗原-50(CA-50)是一种肿瘤糖类相关抗原，主要由唾液酸糖脂和唾液酸糖蛋白所组成。它对肿瘤的诊断有广泛性。 临床意义 1增高见于87的胰腺癌，80的胆(道)囊癌，73的原发性肝癌，50的卵巢癌，20的结肠癌、乳腺癌、子宫癌等。 2动态观察其水平变化对癌肿瘤疗效及预后判断、复发监测。 3对鉴别良性和恶性胸、腹水有价值。 4在慢性肝病时，CA-50也升高。,48,(三)糖链抗原19-9测定 糖链抗原19-9(CAl9-9)是一种糖蛋白。胚胎期分布于胎儿的胰腺、胆和肠等组织；在成人的胰、胆等部位也有少量存在。 临床意义 胰腺癌、肝胆和胃肠道疾病时血中CAl9-9的水平可明显升高。但无早期诊断价值，对早期病人的敏感度仅为30。 2连续检测对病情进展、手术疗效、预后估计及复发诊断有重要价值。 3急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化等，血清CAl9-9也可出现不同程度的升高。 4若结合CEA检测，对胃癌诊断符合率达85。,49,(四)癌抗原125测定 癌抗原125（CA125)是一种糖蛋白。存在于上皮性 卵巢癌组织及患者血清中 参考值： 血清CA125 3.5万uL。 临床意义 1. 卵巢上皮癌病人的CA125的水平可明显升高；对观察 疗效和判断复发较为敏感。 2盆腔肿瘤的鉴别。 3其他肿瘤可出现不同程度的升高。 4早孕等。,50,三、酶类肿瘤标志物检测 （一）异常凝血酶原测定： 在缺乏维生素K的情况下，肝细胞不能合成正常的 依赖维生素K的凝血因子(、X)，只能合 成无凝血功能的异常凝血酶原(APT)。 肝细胞癌时，由于癌细胞对凝血酶原前体的合成 发生异常，凝血酶原前体羧化不足，从而生成大 量的APT。APT测定是反映肝细胞癌的一种标志 物。 参考值 20 g/L 。,51,临床意义 1异常凝血酶原增高，见90以上的肝细胞癌均值 可高达900g/L。40-50转移性肝癌也见APT 升高，但其均值较低。 2甲胎蛋白(AFP)水平较低的肝细胞癌，APT往往升 高。有人报道，AFP低于400 g/L 的肝癌，有 57 的病例APT高于300 g/L 。因此，同时检测AFP 和APT能将低AFP型肝癌的诊断率由48提高到68。 3. AFP轻度升高还见于慢性肝炎和维生素K缺乏症等，此时补充维生素K后可得以纠正。,52,（二）前列腺酸性磷酸酶测定 PAP是一种前列腺外分泌物中能水解磷酸酯的糖蛋白。 临床意义： 前列腺癌时，PAP浓度明显升高，呈平行关系。 前列腺肥大，前列腺炎等PAP浓度也升高。,53,（三）NSE检测 临床意义 小细胞肺癌的NSE水平显著升高。 NSE是神经母细胞瘤的标志物。 红细胞中存在NSE，标本不能溶血。,54,四、肿瘤标志物的选用 同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现 在多种肿瘤当中。 选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的 阳性率。 动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别诊断，也有 利于肿瘤疾病复发、转移和预后判断。,55,第五节 自身抗体检测 免疫耐受：正常情况下机体对自身抗原表现为免疫不 应答现象。 某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受，免疫系 统对自身组织或成分产生免疫应答，称为自身免疫。 由于自身免疫而产生的自身抗体或致敏淋巴细胞损伤 自身器官组织，导致器官功能障碍，这种疾病称为自 身免疫病(AID)。 按自身抗原分布的范围可分器官特异性和非器官特异 性。 诊断自身免疫病的重要方法是作自身抗体免疫检测。,56,自身抗原分为两种： 1.某一器官的特定成分，病变也严格局限在该器官， 如桥本甲状腺炎、自免溶、ITP等； 2.细胞核或浆成分，病变可遍及全身各组织器官，如 SLE、类风关等。,57,一、类风湿因子 类风湿因子(RF)是变性IgG（Fc部分）刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。 它有IgM型，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。 用乳胶凝集法测出的主要是IgM型；速率法敏感但不能分类型。 参考值 乳胶凝集法、血清稀释度低于1:10 速率比值法 30uL。,58,临床意义 类风湿性疾病时，RF的阳性率可高达7090， 类风湿关节炎的阳性率为70。 IgG型是与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关。 IgM型与IgA型的效价与病情有关，与骨质破坏有关。 其他自身免疫性疾病，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综 合征、SLE、自身免疫性溶血、慢性活动性肝炎等也见 RF阳性。 某些感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、结节病、 感染性心内膜炎等也多呈现阳性反应。 故本试验的特异性不高，应予鉴别。,59,二、抗核抗体检测 (一)抗核抗体检测（总ANA） 抗核抗体(ANA)是一种泛指抗各种细胞核成分： 脱氧核糖核蛋白(DNP)、 DNA、 可提取的核抗原(ENA) RNA等 的自身抗体，它是血清中存在的一类和自身组织 细胞的细胞核发生反应的自身抗体的总称。,60,ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA。 这种抗体无器官和种族的特异性。 免疫荧光法以鼠肝细胞核作抗原时，该抗体(待 测血清)可与之结合，再加入荧光标记抗人Ig后， 胞核区发出黄绿色荧光而胞浆区不发荧光。 根据细胞核染荧光的图像可分析为均质型、边缘型、 颗粒型和核仁型等四型。,61,参考值 间接免疫荧光法（IFA）为阴性， 血清滴度1：40为阳性。 临床意义 1ANA阳性 最多见于未治疗的SLE，阳性率达80-100； 活动期SLE几乎100阳性。经皮质激素治疗后，阳性率 可降低。 也可见于药物性狼疮(100)、混合性结缔组织病(100)、全身性硬皮病(85-95)、多发性肌炎(30-90)、狼疮性肝炎(95-100)、原发性胆汁性肝硬化(95-100)。 其他还见于干燥综合征、类风湿关节炎、桥本甲状腺炎等。,62,2荧光核型 细胞核荧光有四种核型,63,(二)抗DNA抗体测定 抗DNA抗体(抗-DNA)分为： 抗双链DNA(ds-DNA)抗体 抗单链DNA(ss-DNA) 抗Z-DNA抗体 其中抗ds-DNA抗体的靶抗原是细胞核中DNA 的双螺旋结构，它的检测有临床重要性。 正常结果 免疫荧光法间接酶标抗体染色法和 滴金免疫试验均为阴性。,64,临床意义 抗ds-DNA抗体阳性 见于活动期SLE，阳性率70-90。本试验特异性较高，但敏感性较低。目前认为，能结合补体的抗ds-DNA，在SLE特别是并发狼疮性肾炎患者的发病机制中起重要作用。 其他风湿病中抗ds-DNA也可阳性。 抗ss-DNA抗体阳性 见于SLE(阳性率70-95)，尤其是合并有狼疮性肾炎。 还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动行肝炎等；但不具特异性。,65,(三)可提取性核抗原性多肽抗体谱测定 可提取的核抗原(ENA)由多种相对分子质量不同的多肽构成，即Sm、核糖体、Scl70、Jo-1、SS-B、SS-A和RNP等。 利用免疫印迹试验可以对这些抗原的自身(抗ENA)抗体进行检测，用来反映某些自身免疫病的状况。 参考值 免疫印迹试验(IBT)为阴性。,66,67,三、组织和细胞抗体检测 (一)抗线粒体抗体测定 抗线粒体抗体(AMA)是一种针对细胞质中线粒体内膜脂蛋白成分的自身抗体，无器官和种族特异性，该抗体主要是IgG。 常用大白鼠胃或肾皮质Hep-2作抗原基质进行免疫荧光法测定。 已发现9种AMA(M1-M9)。非抗核抗体属于此类，包括组织细胞抗体。,68,参考值 IFA法为阴性(血清滴度低于1：10)。正常人群阳性率低于10。 临床意义 许多肝脏疾病时可检出AMA。其阳性率，在原发性胆汁性肝硬化无症状状者为90.5，有症状患者为92.5；慢性活动性肝炎可高达90以上；但是，胆总管阻塞和肝外胆管阻塞为阴性。此外，慢性活动性肝炎和门脉性肝硬化阳性率为25。,69,(二)抗甲状腺球蛋白抗体测定 甲状腺球蛋白(TG)是由甲状腺滤泡细胞合成的一种糖蛋白，抗甲状腺球蛋白主要是IgG。 临床意义 抗TG阳性见于90-95的桥本甲状腺、52-58的甲亢和35的甲状腺癌。 重症肌无力、肝脏病、风湿性血管病、糖尿病也可出现阳性。 此外，有些正常人，特别是妇女，抗TG阳性率随年龄而增加，40岁以上妇女检出率可达18。,70,(三)抗甲状腺微粒体抗体测定 抗甲状腺微粒抗体是针对甲状腺微粒的一种抗体。 临床意义 抗TM阳性检出率：桥本甲状腺炎为50100；甲状腺功能减低症为88.9； 甲状腺肿瘤为13.1；单纯性甲状腺肿为8.6；亚急性甲状腺炎为17.2-25；SLE为15.444.7；其他风湿病为30。正常人也有8.4的阳性率。 抗TG与抗TM应同时检测，以提高检出的阳性率。,71,第六节 流式细胞术检测 流式细胞术(FCM)是应用激光技术、计算机技术、流体力学、细胞生物化学单克隆抗体技术、分子生物学、临床医学等综合技术，对流动细胞群体以大小、内部结构、DNARNA、蛋白质、细胞抗体等进行快速测量，并在必要时进行分类收集的多参数检测细胞分析技术，使用的是流式细胞仪。 流式细胞术在临床中的应用 最多用的是血液学诊断与研究。 白血病的分型，急性白血病微小残留病灶的监测(MRD)，白血病细胞的DNA分析，细胞凋亡及相关蛋白的研究等，还有急性白血病多耐药的检测，造血干、祖细胞的研究，通过血小板的血栓疾病的研究，网织红细胞的检测等。,72,73,74,第七节 器官与骨髓移植的检测 人类白细胞抗原(HLA)是由HLA基因复合体编码所产生的一个十分复杂的系统。位于人第6对染色体的短臂上，共有6个座位，HLA-A、HLA-B、HLA-C、HAL-DR、HLA-DQ和HLA-DP。 目前已确定HLA复合体共有327个等位基因，每个基因编码一种特异性抗原，主要表达在细胞膜上，或以游离状态存在于血液和体液中。,75,分为I类抗原HLA-A、B、C座位基础上的基因编码的抗原和类抗原HLA-DR、DQ和DP座位基因多编码的抗原。 I类抗原是一种膜糖蛋白，存在于所有有核细胞的膜上，以淋巴细胞上的密度最大，是组织排斥反应的最大抗原。 类抗原是由两条糖激化的跨膜多态链构成，分别称为链和链，其抗原特异性主要与链有关。类抗原主要表达在B细胞、巨噬细胞和其他抗原递呈细胞上，与免疫应答及免疫调节有关。 HLA I类抗原、DR和DQ抗原可用血清学方法分析，DP抗原亦可用细胞学分型方法。目前已能用基因水平对HLA类抗原的等位基因进行更精细的分型。,76,四、器官和骨髓移植检查项目的 选择 和应用 器官移植前，除了ABO血型配型外，还必须作快速、准确的HLA配型检查，如血清和细胞学配型，有条件时，还应作DNA分型。对于高致敏的患者，移植前一定要做交叉配型，并寻找HLA配型相近者，以避免移植后的排斥。 不同的器官移植，对HLA相容性的要求也不同。骨髓、肾移植时要求最严，心、肝移植时则不然。,77,第八节 其他免疫检测 （一）循环免疫复合物检测 体内游离抗原与相应的抗体形成抗原抗体复合物，即免疫复合物(IC)，可分为三种： 血循环中的IC(CIC)为相对分子质量小的复合物(19S)。,78,临床意义 1增高 见于自身免疫病(自身抗原与抗体)、感染(感染因子与抗体)、