蛋白酶抑制剂筛选模型.ppt

微生物来源HIV抑制剂,HIV 是AIDS的病原体 自1981年第1例AIDS病例发现至今已有30余年，AIDS迅速在人类世界蔓延，严重威胁着人类的健康。 根据2009年艾滋病流行报告, 全球大约已有6000万人感染了HIV, 2500 万人死于艾滋病相关疾病。2008年, 全球大约有3340万HIV感染者, 270万新发感染者, 200万人死于艾滋病,抗HIV药物：自1987年第一个抗HIV药物齐多夫定用于临床以来,目前已有六大类、30余种药物通过美国FDA认证 核苷类逆转录酶抑制剂（ NRTIs 14种） 非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs 3种） 蛋白酶抑制剂（ PIs 11种） 融合抑制剂（Fusion Inhibitors） 进入抑制剂（EIs） 整合酶抑制剂（Integrase Inhibitors）,1995年，Ho D.D.和George M. Shaw关于HIV病毒动力学的研究成果给抗病毒治疗带来了突破，高效联合抗逆转录病毒治疗（highly active anti-retrovival therapy，HAART）的临床疗效得到了肯定 联合方案： NRTIs为主干，一般2种NRTIs联合1种NNRTIs或1种PIs制剂,辉瑞公司研制的第一个CCR5抑制剂-马拉维若（maraviroc）于2007年下半年在美国上市，2010十大令人惋惜的期失败新药：默沙东的CCR5抑制剂Vicriviroc 默克公司的整合酶抑制剂raltegravir于2007年10月获准上市，另一整合酶抑制剂Gilead生物科学公司的Elvitegravir 期临床试验显示： 与raltegravir疗效相当 新一代NNRTI类新药：Etravirine（依曲韦林片 、 TMC-278 ）已于2008年初FDA批准上市、对现有NNRTI耐药的病人中具有显著的抗病毒效力,1、HIV吸附或融合抑制剂： HIV侵入T淋巴细胞的起始阶段是HIV吸附于细胞膜表面，是由于HIV膜蛋白gp120与T细胞表面受体CD4的高度特异性结合。,霉酚酸(MPA) 从Penicillium sp. FO28017培养液中分离得到的小分子物质, 是一种次黄嘌呤核苷酸脱氢酶( IMPDH ) 抑制剂和抗H IV抑制剂 蛋白印迹分析MPA能减少H IV的gp120表达从而抑制H IV的感染，其作用机制主要是通过减少H IV表面膜蛋白gp 120的表达来抑制合胞体形成。,Boyd等发现从蓝藻菌中提取的蛋白质蓝藻菌病毒素一N(CV-N)具有强效广谱的抗HIV病毒活性：与病毒表面外壳糖蛋白gpl20发生不可逆的结合作用，形成CV-N-gpl20复合物 Siamycin类化合物： Siamycin（BMY229304)、 SiamycinII（RP71955, BMY229303)和NP206(FR901724) Actinohivin ：放射菌株K97-003产生，114个AA的蛋白，为融合抑制剂,吸附或融合抑制剂筛选模型,将纯化的CD4或HIV一1 gpl20包被至ELISA板上，在不同浓度药物存在的情况下，检测另一种蛋白的结合量 特异识别HIVgp41六股a一螺旋束核心结构空间构型的单克隆抗体，以该抗体建立夹心ELISA方法,2 、抑制辅受体相互作用 趋化因子CCR5，为G蛋白偶联因子超家族（GPCR）成员的细胞膜蛋白，是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一,7个微生物代谢产物类CCR5 抑制剂,3、蛋白酶抑制剂： HIV蛋白酶由pol基因编码，功能为切割聚合蛋白 gag基因编码聚合蛋白基质蛋白（p17）、核衣壳蛋白（p7、p9）、衣壳蛋白（p24）,(1) cytochalasin A和L-696,474 L-696,474从真菌Hypoxylon fragiforme中分离到的一种松胞菌素 是HIV-1蛋白酶的竞争性抑制剂，其活性与时间，底物浓度，酶浓度呈线性关系，其抑制作用是快速型且具选择性 该化合物的结构与已发现的cytochalasin A很相似，cytochalasin A也能抑制HIV-1蛋白酶，两者可能通过与HIV-1蛋白酶二聚体结合发挥作用,（2）resistomycin和tetronic acid 同系物 Roggo等从Actinomycete sp.DSM7357中分离出具有抗HIV活性的6种tetronic acid同系物和resistomycin。 （3）Mer-N5075 本品的产生菌是Streptomyce chromofuscus Mer-N5075，它也是一种HIV-1蛋白酶抑制 （4）RPI-856 A,B,C和D 是由Streptomyce sp.AL-322产生。 对其蛋白酶的抑制具有选择性：能抑制HIV-1和HTLV-1蛋白酶，而对其它蛋白酶无或仅有较弱的抑制作用,蛋白酶抑制剂筛选模型,HIV-1蛋白酶与短肽链（含Tyr-Pro键）反应 通过对肽键的测定推算出HIV-1蛋白酶的活力 以此为对照，在系统中加入待测样品,4、逆转录酶抑制剂： 逆转录酶由pol基因编码，功能为转录和复制病毒基因组 逆转录酶是艾滋病选择性化疗的首选靶位之一 quinoxapatin A和quinoxapatin B 由放线菌产生,为非竟争性酶抑制剂,具有可逆性,逆转录酶酶抑制剂筛选模型,HIV-1 RT 与dATP 、dGTP、 dCTP 及H3标记dTTP发生反应 以液闪记