细菌感染的防治原则灭菌.ppt

医学微生物学 （细菌感染的实验室诊断及消毒灭菌）,严杰，教授医学博士 Department of Medical Microbiology and Parasitology Zhejiang University School of Medicine Hangzhou, P.R. China,标本的采集与送检： （1）采集标本应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。 （2）根据患者病程、细菌在体内分布及从人体排出途径的不同，采集相应的标本。一般情况下，应在病变最明显部位采集标本。 （3）使用抗生素之前采集标本，否则应在分离培养时加入药物拮抗剂。采集标本时不可用消毒剂，必要时可用生理盐水冲洗，擦干后取材。 （4） 标本必须新鲜，采集后及早送检。在送检过程中，除少数不耐寒的脑膜炎球菌等细菌需保温外，多数菌的标本均需冷藏送运。 （5）检测特异性抗体时尽量采取急性期与恢复期双份血清。第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后23周采取。血清标本放4或-20保存，试验前血清标本56处理30分钟以灭活补体。,细菌感染的实验室诊断,标本染料、荧光染色后直接显微镜检查。 细菌的分离培养与鉴定： 菌落 (colony)：采用分离划线接种法将细菌临床标本接种于固体培养基上，经过培养后出现肉眼可见、单个细菌分裂繁殖形成的细菌集落 (纯种细菌)。 不同细菌大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐或不整齐、溶血情况等均可能有所不同，有助于鉴定细菌。 染色镜检、 生化试验、血清学试验(已知抗体测抗原) 药物敏感试验：选择敏感抗生素。,细菌标本常规病原学检查,多聚酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR)：提取细菌临床标本总DNA或RNA，采用16 S RNA编码基因或其他靶基因特异性引物对进行PCR或RT-PCR扩增，反应产物用溴乙锭染色的琼脂糖凝胶电泳观察，目前多采用封闭式实时荧光定量PCR或RT-PCR检测。 PCR优点与缺点：优点是快速、敏感、特异，缺点是不能获得活菌。,细菌标本分子生物学检查：PCR/RT-PCR,血清学检查 (serological examination)：病原菌侵入人体可刺激机体免疫系统产生特异性血清抗体，抗体水平可随细菌感染过程逐渐升高价升高。用已知的抗原检测病人体液（主要为血清）中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某些感染性疾病的诊断或辅助诊断。 多数血清学诊断通常采取患者双份血清，一份在疾病的急性期，另一份在恢复期（一般为26周后），当第二份抗体效价较第一份升高4倍及以上才有诊断价值。 单份血清检查结果根据该病效价判断标准进行判定。 IgM出现早、消失快，可用于血清学早期诊断。 方法：ELISA、直接或间接凝集试验、中和试验等。,血清学检查或诊断,人工主动免疫：接种疫苗，是预防传染病常用方法，免疫力出现慢但维持时间长。 疫苗种类：目前使用的有全菌死疫苗、减毒活疫苗 、基因工程疫苗、类毒素疫苗。 人工被动免疫：主要是抗毒素 (外毒素中和抗体)。免疫力出现快但维持时间短。抗毒素是动物血清，使用前做皮试防止发生过敏反应。 抗生素治疗：青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类。细菌对抗生素可产生耐药性，临床使用抗生素时应遵守如下原则：选择敏感抗生素；剂量合适；长期使用时交替用药；联合用药。,细菌感染的防治原则,灭菌 (sterilization)：杀灭所有微生物的方法，包括病原微生物、非病原微生物及芽胞。 消毒 (disinfection)：杀灭病原微生物的方法，但不一定能杀死非病原微生物，一般不能杀灭芽胞。消毒剂。 抑菌 (bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌生长繁殖的方法。如抗生素。 防腐 (antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。防腐剂。 无菌 (asepsis) ：不存在活的微生物。 无菌操作：防止微生物进入人体或物品的操作技术。,消毒与灭菌,干烤：用干烤箱160加热2 h可达到灭菌效果，适用于耐高温的玻璃器皿等物品。 高压蒸汽灭菌法：使用高压蒸汽灭菌器121加热1520 min可达到灭菌效果。 煮沸法：细菌繁殖体在沸水中5 min可被杀死。 巴氏消毒法：61.1-62.8加热30 min和72加热15 s，目前主要用于酒类、疫苗的消毒。,常用消毒与灭菌法,紫外线消毒法：以265266 nm紫外线能使DNA一条链中相邻的两个胸腺嘧啶形成二聚体，干扰了DNA复制与转录而导致细菌死亡。 紫外线穿透力弱，仅用于空气和物体表面消毒。,常用消毒与灭菌法,电离辐射 ：常用60Co对一次性医用塑料制品进行灭菌，也可用于食品、药品和生物制品的灭菌（工业用）。 滤过除菌法 ：0.22 m孔径滤器可除去细菌，0.10 m孔径可除去支原体。 低温抑菌法：抑菌不杀菌。 真空冷冻干燥法 ：细菌悬液冻结，负压使水分升华后干燥，可长期保存菌种。 化学消毒剂：75%乙醇，其他浓度高、时间长、效果好。,常用消毒与灭菌法,生物安全：病原微生物危害等级标准及其适用实验室,细菌感染临床标本的采集与送检注意事项。 血清学检查或诊断原