乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨1分析.ppt

,乙型肝炎两对半检测结果影响因素及在什么时候检查最好,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎（下称乙肝）免疫学标志物问世以来，由于其简便、灵敏、特异性高的优点，成为基层医院对乙肝诊断分型疗效观察的主要手段，但由于其自身方法学上的限制，不同血清物质变化及实验室因素易造成各种错误结果。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,1、样本采集与处理的影响 1.1 标本严重溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。,对乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,1.2 塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。最好使用一次性玻璃试管或真空采血管。并使用非抗凝标本。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,1.3 标本凝固不全，正常血液采集后30 min-2 h开始凝固，18-24 h血块完全收缩。在工作中，有时为了快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉，易造成假阳（阴）性结果。因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,2、试剂的影响 2.1 乙肝两对半试剂厂家较多，不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别。资料显示，不同厂家试剂的特异性和敏感性也不尽相同，有的厂家酶标板孔间A值差15%，标记酶的活性及显色液的稳定比较差。使用劣质试剂必然导致结果的假阳性或假阴性，选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,2.2不同方法学的检测试剂会使两对半结果出现一些不同。例如：在实际工作中常用ELISA法检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）结果为阴性，而化学发光检测为阳性。除方法学的灵敏度外，还存在使用单抗或多克隆抗体试剂的差别。单抗对变异抗原或亚型乙肝标志物检测存在差异，建议选择试剂厂家对试剂的制备应该考虑亚型及浓度的问题。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,3、操作技术的影响 3.1加样吸嘴的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊， 加大了交叉污染的机会，建议用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗，定期校准。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,3.2温浴影响。96孔酶标板结构特别，易产生边缘效应，抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异。干浴与水浴存在明显的差异，尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。,ELISA法对乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,3.3洗涤是ELISA操作的重要环节，手洗条件一致性较差，对结果影响较大，半自动与全自动洗板机使用不当也会影响结果。血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出结晶易使洗板机针孔全阻塞或半阻塞，造成未结合标记酶洗脱不彻底，导致“花板”造成假阳性或假阴性。所以操作洗板机过程中要不时观察洗板机针孔内洗液的通畅状况，及时纠正，洗板机不用时应用去离子水清洗几遍。 。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,3.4肉眼判断结果时，显色浅不易观察，影响结果的准确性，必须使用酶标仪检测结果，以保证结果一致性,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,4、HOOK效应影响 随着ELISA一步法的应用，一些标本中抗原含量过高，产生HOOK效应，影响检测结果。采用同步稀释测定或使用线性范围高的两对半定量法可以减少HOOK反应的发生。,ELISA法对乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,5、干扰物质的影响 有学者认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子（RF）、甲胎蛋白（AFP）因子。某些自身抗体都会影响结果造成假阳性4。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,6、药物的影响 高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAg形成复合物，影响HBsAg的检出，所以一些HBsAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现。,乙型肝炎两对半检测结果影响因素的探讨,为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗后的1-2周内，血清中可检出HBsAg成分，形成一过性HBsAg阳性。这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。有方法能够把它检出，如电化学发光法，建议接种乙肝疫苗后1个月内不应作HBsAg检测。 总之，乙肝两对半检测必须排除各种影响因素的干扰，其能为临床提供正确可靠的检测结果。,由于乙肝病毒有一定的潜伏期，一般为6周到6个月，在这个时间段内一般是检查不出来的，因此，乙肝五项检查时间至少应该在接触乙肝病毒后的6周后，另外，乙肝五项检查不宜过于频繁，而不同人群对乙肝五项在什么时候检查最好也是不一样的：,1.对于没有感染乙肝病毒者，一般是三到五年检查一次乙肝五项，最主要的就是看看体内有没有抗体，没有抗体的话要及时注射乙肝疫苗。,2.对于无症状乙肝携带者来说，一般是每隔半年检查一次，或者是在肝功能检测有异常时进行乙肝五项检查。,3.对于正在接受治疗的乙肝病人，乙肝五项检查在医生的指导建议下进行检查，如果肝功能异常或乙肝病毒DNA阳性的患者最好3个月检查一次乙肝五项。,4.婴儿检查乙肝五项时间，第一针注射后2周只有18%的人产生抗体，一个月后可达41%;注射第二针后80-90%的受种者可产生抗体，六个月后注射第三针，96%的人抗体阳转，并保持几年不变，专家建议宝宝可以在全程注射完乙肝疫苗后的20天之后去检查两对半。,乙肝五项检查结果及临床意义,乙肝五项临床意义,一、1，3，5：俗称乙肝大三阳说明患者是慢性乙肝，有传染性。 二、1.5：急性乙肝感染阶段或者是慢性乙肝表面抗原携带者，传染性弱些。 三、1，4，5：乙肝已趋向恢复，属于慢性携带者，传染性弱，长时间持续此 种态可转变为肝癌。 四、2，5：既往感染过乙肝，现在仍有免疫力，属于不典型恢复期，也可能 为急性乙肝感染期。 五、4，5;既往有乙肝感染，属于急性感染恢复期，也少数人仍有传染性。 六、5:过去有乙肝感染或现在正处于急性感染。 七、2；以前打过乙肝疫苗或以前感染过乙肝。 八、2，4，5：急性乙肝恢复期，以前感染过乙肝。 九、1：急性感染早期或者慢性乙肝表面抗原携带者传染性弱。 十、1，4：慢性乙肝表面抗原携带者易转阴或者是急性感染趋向恢复。 十一、1，3;早期乙肝惑染或者慢性携带者，传染性强。,一、乙肝五项常见结果,感染模式 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 1 + - + - + 2 + - - - + 3 + - - + + 4 - + - - + 5 - - - + + 6