紫薇杯自科科研答辩.ppt

紫薇杯科研答辩,-中草药联合医用乳酸菌对痢疾致病菌的体外抑菌试验,答辩人：刘洋 指导老师：谢永生老师,成员：肖雨欣 焦亚雨 周小会 王苗苗,目录,CONTENTS,01,02,03,04,研究背景及意义,研究目标及综述,拟解决问题结果预测,实验方法与可行性分析,05,总结与参考文献,01,研究背景及意义,痢疾杆菌 ，又称志贺氏菌属，是一类具有高度传染性和危害严重的革兰氏阴性杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌。 近年来，由于抗生素的广泛使用，痢疾杆菌对常用抗生素的耐药性明显增高，给该病的防治工作带来困难。 由于中草药具有副作用小、不易残留和较少出现耐药性等优点，使得从中草药中筛选抗菌药物越来越受到国内外学者的广泛重视。单一中草药或者复方联合中草药制药日渐完善，对于新的联合方法的研究有待发展。,常规治疗,抗生素 减毒突变株 用不同载体菌构建的杂交株 营养缺陷减毒株,中草药治疗,山楂 五味子 连翘 金银花 黄连,益生菌,乳酸菌,研究背景及意义,研究背景及意义,利用医用乳酸杆菌分别联合山楂，五味子，连翘，金银花，黄连五种中草药，以研究肠道益生菌群对中草药提取物的代谢影响及中草药提取物对肠道益生菌的影响，最重要的目的是研究中草药提取物联合肠道益生菌群（乳酸杆菌）对痢疾杆菌的抑菌作用，相互拮抗还是相互促进，为给痢疾病人更有效的治疗提供作用方向。,意义:,02,研究目标和综述,研究目标,研究五种中草药提取物联合乳酸菌的抑菌效果 研究两者联合的最适浓度比,主要构成部分,中草药提取物体外抑菌,乳酸体外抑菌,中草药联合最适浓度乳酸菌的体外抑菌,中国自古以来就利用多种中草药治疗痢疾，通过现代化的试验研究，已经了解了大多中草药的抑菌作用，中草药具有作用靶位多，不易产生耐药的优点，因此，研究中药对痢疾杆菌的抑菌作用，合理开发中药抑制剂具有重要意义和广阔的前景。 笔者等就此探讨了中草药提取物对痢疾杆菌的体外抑菌效果的效益。由于口服中药是经典给药方式，所以进入消化道的药物不可避免与肠道微生物接触，对肠菌产生调节作用或其他影响。 比如，某些补益类中药会促进肠道内某些益生菌的生长繁殖，抑制一些有害菌的生长繁殖等。同时肠道细菌也会通过还原反应，水解反应等方式对中药进行转化，再被人体吸收从而达到治疗效果，因此肠道细菌群与中药的药效关系存在着密切的联系。,综述,03 拟解决问题和结果预测,拟解决的关键问题： 1，中草药提取液的制取（如何方便有效？） 2，培养基的制备（如何配制条件适宜的培养基？） 3，一定浓度梯度乳酸菌菌悬液的培养（如何对浓度配制） 4，医用乳酸菌的获得和中草药联合乳酸菌药液配制（按照一定浓度梯度配制） 5，痢疾杆菌的培养及菌悬液的制备（如何培养和测定） 6，抑菌效力的测定 7，不同中草药的MIC和MBC测定 8，不同中草药联合医用乳酸菌的MIC和MBC的测定 9，各物质的用量和时间要求,-结果预测-,预期结果： 1,五种中草药对痢疾杆菌具有抑制作用，不同中草药的抑菌作用效果不一样 2,乳酸菌对痢疾杆菌具有抑制作用 3,相同条件下添加医用乳酸菌的中草药提取液MIC和MBC均小于未添加的中草药提取液,04,实验方法与可行性分析,研究过程及方法,1，查阅大量相关文献，了解可行程度 以及实用前景 2，寻求并请教指导老师注意事项 3，制定实验物品需求及用量计划 4，安排小组成员各司其职，团结合作,前期准备工作：,研究过程及方法,实验流程图：,注： 图中体积不是实验数值，将在实验时校准,研究过程及方法,01,02,提取液制备： 50g中草药材干粉，加500ml蒸馏水，煮沸30min，4层纱布过滤，药渣反复过滤，滤液合并蒸发浓缩至50ml，于4冰箱保存备用 培养基的制备 牛肉膏蛋白胨液体培养基: 牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化钠5 g，蒸馏水1000 ml，pH 7.4 牛肉膏蛋白胨固体培养基: 牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化钠5g，琼脂18 g，蒸馏水1000 ml，pH 7.4,研究过程及方法,03,痢疾杆菌菌悬液的制备和乳酸菌的浓度配制 把痢疾杆菌菌种置于 37 条件下，在24 h内反复活化3代，以血球计数板计数，用液体培养基稀释，制成含菌量为 106 cfu /ml 的菌悬液，于 4 冰箱保存，备用 a,活菌计数法 取 1mL 乳酸菌发酵液加入到 9ml 灭菌的生理盐水中，依次做 10 倍系列稀释，吸取1ml稀释液注入无菌培养皿中，倾注法加入 15ml 左右的计数培养基混匀，得到10个稀释度。待培养基凝固后，倒置放入 37恒温培养箱中，培养24h。 b,分光光度法测定菌体浓度 采用 UV-8500 型紫外分光光度计测定，波长 600 nm,05,04,中草药提取液联合乳酸菌的药液配制取相同体积的中草药提取液和乳酸菌液混匀，置于37条件下备用,抑菌作用的测定（研究五种中草药提取物联合乳酸菌的抑菌效果） 杯碟法 在灭菌培养皿中倒入牛肉膏蛋白胨固体培养基，待凝固后，用移液器吸取 0.1ml 痢疾杆菌培养液，滴在平皿底层培养基上，用无菌棒将菌液涂匀，在其上等距离放3个无菌牛津杯，在杯内分别注入0.1 ml不同中草药提取液0.1ml蒸馏水，于37恒温箱中培养24h，用游标卡尺测量药液的抑菌圈直径，取其平均值。,05,在灭菌培养皿中倒入牛肉膏蛋白胨固体培养基，待凝固后，用移液器吸取 0.1ml 痢疾杆菌培养液，滴在平皿底层培养基上，用无菌棒将菌液涂匀，在其上等距离放3个无菌牛津杯，在杯内分别注入0.1ml乳酸菌药液0.1ml蒸馏水，于 37恒温箱中培养24h，用游标卡尺测量药液的抑菌圈直径，取其平均值。 在灭菌培养皿中倒入牛肉膏蛋白胨固体培养基，待凝固后，用移液器吸取 0.1ml 痢疾杆菌培养液，滴在平皿底层培养基上，用无菌棒将菌液涂匀，在其上等距离放3个无菌牛津杯，在杯内分别注入0.2ml不同中草药提取液联合医用乳酸菌的药液，按照稀释后的浓度梯度，于 37恒温箱中培养24h，用游标卡尺测量药液的抑菌圈直径，取其平均值。,06,预测两者联合效果较好，再研究两者联合的最适浓度比（不变量：中草药提取液浓度 变量：乳酸菌的浓度）,固体培养基,0.1ml痢疾杆菌菌悬液,放置牛津杯,涂匀,移液,按照稀释过的浓度梯度的乳酸菌等体积与中草药混匀,抑菌圈直径的测定,37,24h,药物最小抑菌浓度的测定 药物最低杀菌浓度的测定,可行性分析,1，通过专业课的学习，对痢疾致病菌有了一定的认知。通过相关文献综述，了解到由于抗生素的大量使用，大多数的细菌已经有一定的耐药性 。 2，作为有科研意识的医学生，联想到中国传统的中药治疗的方法，为更近一步的专业了解，提出五种中草药可能对痢疾致病菌的有抑菌作用。 3，现有的中草药提纯方法已经发展的很成熟，联合医用乳酸菌进行探究，肠道菌群会在特定的环境通过物质转化等作用产生能够有效抑菌的的物质。 4.人工实验能够帮助我们更加客观的认识到，中药治病的魅力所在。,05,总结与参考文献,总结,1,早期对每种中草药的提取，3个小时左右 2,培养基制备半个小时 3,菌悬液痢疾杆菌24h,乳酸菌 4,联合药液的制备半个小时 5,抑菌作用24h 6,最小抑菌浓度的测定243h 7,最低杀菌浓度测定123h,（一）,进度安排:,（二）,应用前景,(1)肠道益生菌与中草药联合制剂的研发 (2)降低细菌产生耐药性的概率 (3)提高中草药的利用效率 (4)成本低，效用高,优势和不足,（三）,参考文献,1汤齐,高霞,耿婷,黄文哲,刘丽芳,王振中.肠道菌群与中药相互作用的研究进展J.中草药,2017,48(17):3629-3635 2管仲莹,赵金明,林巧智.金银花提取物抑菌作用的实验研究J.中国现代医生,2009,47(15):150-151+153 3崔祥,陶金华,江曙,魏晓燕,徐君,钱大玮,段金廒.黄连提取物与肠道菌群的相互作用研究J.中草药,2018,49(09):2103-2107. 4林玲,陈玉杰,李俐,曹原,孙庆祥.山楂液杀灭微生物作用及其影响因素的试验观察J.中国消毒学杂志,2000(02):23-26. 5边才苗,杨云斌,费杰,何伟平,钟浩.五味子提取物体外抑菌