维生素类药物的分析

第九章,维生素类药物的分析,维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物质。 人体不能合成维生素。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,VitM,VitPP,-H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R :,第一节 维生素 A的分析,为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯,（一）,具有UV吸收,存在多种立体异构化合物,维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素Aa 323 21% 异维生素Ab 324 24%,相对生物效价,VitA2,VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,聚合反应 鲸醇,1 溶解性 不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等,2 不稳定性 共轭多烯侧链易被氧化,或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,紫外吸收特性 325-328的范围有最大吸收,条件：无水，无醇。,CHCl3,蓝色,逐渐变紫红,方法 取维生素A油溶液1d， 加氯仿10 ml，振摇溶解，取出两滴，加氯仿2 ml，与25%三氯化梯氯仿液0.5 ml反应，成兰色，渐成紫红。,（BP（2000）,max为326nm 一个吸收峰,max为350390nm 三个吸收峰,去水VitA（VitA3）,VitA,讨论 维生素 A有五个共扼双键，无水乙醇溶液在 326 nm处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成5个双键，故，波长红移，同时在350-390之间出现3个吸收峰。,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑,立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）,UV法,（一）,三 含量测定,三、点校正法（P208） 1. 条件： （1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。,2. 波长的选择： （1） 1 VitA的max（328nm） （2） 2 3 分别在1的两侧各选一点,对吸收有影响的杂质见书209液,测定对象：VitA醋酸酯,第一法 等波长差法,第二法 等吸收度法(皂化法),测定对象： VitA醇,测定法 （1）基本步骤: 第一步 A选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除,注意： C 为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,（二）,(二) 三氯化锑比色法 标准曲线法,优点 简便 快速,max 618nm620nm,注意事项 1 颜色不稳，动作要快。 2 用无水氯仿作溶剂测定,要求无水。 3 温度恒定。 4 非专属性，结果偏高。 5 有腐蚀性。,HPLC,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),第二节 维生素B1,HCl,Cl-,（二） 性质 1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性 2 硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。,3 盐酸液的246nm波长处测定吸收度，吸收系数为421。 UV 共轭双键 max = 246nm 4 碱性 嘧啶环 伯氨 噻唑环 季铵 1、可与酸成盐 2、与生物碱沉淀剂沉淀。 3、含量测定 非水碱量法,二、鉴别试验 （一） 硫色素反应，ChP,硫色素,2H,方法 取本品约5 mg，加氢氧化钠与正丁醇2.5ml，强烈振摇。放置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸消失，再加碱又重现。 专属性反应。,VitB1,H+,H+,H+,H+,（二）沉淀反应,S元素反应,Cl-反应,（三）其他反应,含量测定 （一） 非水滴定法 1 原理 两个碱性的，已成盐的伯胺与季胺的基团，在非水溶液中，醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用，根据消耗高氯酸的量进行计算。,喹那啶红亚甲蓝 （紫红天蓝）,2 方法 取本品0.15g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中加冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红亚甲蓝2d，高氯酸滴定。由紫红天蓝，1ml相当于16.86mg。,二 紫外光谱法 维生素B1片的测定，取20片称定。严细。称取细粉适量，相当于25 mg，置100ml量瓶中，取5ml，在定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数421。注意所使用的溶剂。,= 421,（每片）相当于标示量的%=,A = ECL,规格 g/片,g/100ml,g,ChP片剂,维生素B1注射液的测定 取本品相当于B1 50mg，置200ml量瓶中，加水置刻度，取5ml，用盐酸定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数421。,注射剂（每ml）相当于标示量的%=,规格 g/ml,ml,NaOH,激发波长365nm 发射波长435nm,+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇,+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇,S,d,A,b,对照液,供试液,（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析,第三节 维生素C,L抗坏血酸,（一）结构 为L-抗坏血酸，在化学结构上和醣类似。有4种光学异构体，L右旋活性最强。具有二稀醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（C4，C5），性质活泼。,（二）性质,溶解性 易溶于水 水溶液呈酸性,2 酸性 C3OH的酸性较强。pKa = 4.17，C2OH的酸性较弱pKa = 11.57。故表现为一元酸的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。,二烯醇结构,二酮基结构,强还原性 二烯醇结构的还原性极强。,有活性,有活性,无活性,光学活性 L(+)抗坏血酸 活性最强手性C（C4、C5）,*,*,5 水解反应与碱反应,50,6 具糖的性质 结构与糖类相似 有糖类的显色反应,7 紫外特征,二、鉴别反应 （一）与AgNO3反应 (ChP2000),具有强还原性： 取本品0.2 g, 加水10 ml溶解，取5 ml，加硝酸银0.5ml，成-,（二）、与2，6 - 二氯靛酚反应,氧化型,玫瑰红色,(ChP2000),（玫瑰色）,（无色）,取本品0.2 g, 加水10 ml溶解，取5 ml，加2，6 - 二氯靛酚2d，成-,（三）与其他氧化剂的反应,与碱性酒石酸铜反应,USP,与KMnO4反应,（四）糖类的反应 USP,或盐酸,50,吡咯,（蓝色）,(糠醛),戊糖,（四） UV,0.01mol/L HCl,杂质检查 （一） 溶液的澄清度与颜色检查 注射液 取本品适量，加水成50mg/ml的溶液，420nm 测，吸收度不得超过0.06。,片剂 取片粉适量（相当于1.0g），加水20ml溶解，滤过。成50mg/ml的溶液，440nm 测，吸收度不得超过0.07。 在加工过程中有色杂质略有不同，故波长不同。,（二） 铁，铜离子的检查,指示剂 淀粉指示液,四、含量测定 （一）碘量法 1 原理,H+,取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,2、方法,（1）酸性环境 d . HCl,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,4、讨论,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,一缩二亚硫酸,（二）2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法,1、原理,自身指示终点法,2、方法,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较