生物化学实验.ppt

动物生物化学实验,（共21学时）,1、系统练习和掌握生物化学的基本实验技能；,一、实验教学的目标和要求,4、培养理论联系实际的学风和动手能力。,2、熟悉常用生化仪器的原理和使用方法；,分光光度计、离心机、电泳仪等,二、实验室的规则,1、实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验的原理。,2、实验过程要听从教师的指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。,3、如实进行实验记录，实验完毕及时整理数据，按时上交实验报告。,4、使用各类的仪器应严格遵守操作规程。,5、实验完毕必须及时清洗并放好各种的玻璃仪器，做好值日生。,三、实验室的管理,正确清洗玻璃器皿,各组玻璃仪器的管理,每次实验认真清点保管好玻璃器皿,损坏丢失赔偿 问题,1、用规范的实验报告纸书写；,四、实验报告书写要求,5、 真实准确描述实验结果，并对结果进行分析,2、报告包括实验目的、实验原理、试剂与器材、实验步骤、实验结果和结果分析；,3、简明扼要的概括实验原理和实验步骤；,4、列出主要的试剂与器材；,包括分析结果与预期实验现象差异的原因、注意事项、实验课改进的意见等。,学时分配表,实验一 乳酪蛋白的制备及 部分性质检测,1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。掌握蛋白质等电点沉淀蛋白质的原理和方法。,二、实验目的,一、实验内容,2、对酪蛋白、乳清蛋白的部分性质进行检测。,1、采用等电点沉淀、低速离心等方法从牛乳中制备酪蛋白粗品;,2、通过鉴定加深对蛋白质理化性质的认识。,三、原理,牛乳中主要的蛋白质为酪蛋白，人乳中的蛋白质主要是白蛋白。,乳蛋白的分离纯化是研究其组成、结构、性质和生物学功能的基础。,根据这个原理，将牛乳的pH调整到4.6，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白便会沉淀出来。,牛乳中主要的蛋白质为酪蛋白，约占总蛋白量的80%。,蛋白质是两性电解质。蛋白质在等电点时，溶解度最小，容易沉淀析出。,用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，便可得到纯度较高的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴定。,1、醋酸钠缓冲液（0.2mol/L，pH4.6） 2、 95%（v/v）乙醇 3、 乙醚 4、 0.1mol/LNaOH 5、 0.2% HCl 6、 5 %醋酸铅 7、 pH试纸（或pH计） 8、 表面皿，电炉，离心机，水浴锅, 循环水真空泵。,四、试剂及器材,1、酪蛋白等电点沉淀,（一）酪蛋白的制备,取新鲜牛乳50mL,放入250mL烧杯中加热至40。加入50mL加热至同样温度的醋酸钠缓冲液，一边加一边摇动，调整混合液的pH为4.6。冷却至室温，继续放置5min，然后离心15分钟，上清液为乳清（保留）。过滤所得沉淀即酪蛋白。,五、实验步骤,2、除脂类杂质,将上述沉淀物转入烧杯中，加约30mL乙醇混匀，用布氏漏斗抽滤。该沉淀继续用乙醇和乙醚等量混合液（ 30mL ）洗涤1次，抽干。取出粉状物，摊开在表面皿上，使乙醚完全挥发。,（二）酪蛋白的性质鉴定,2、含硫（胱氨酸和蛋氨酸）测定 取少量酪蛋白溶于1mL 0.1mol/L NaOH溶液中，再加入13滴醋酸铅，加热煮沸，观察溶液的颜色。,1、溶解度 取试管4支，分别加入蒸馏水、0.2% 盐酸、0.1mol/L氢氧化钠、2mol/L尿素溶液各2mL。于每管中加入少量酪蛋白。不断摇荡，观察并记录各管中的酪蛋白溶解性。,（三）乳清中可凝固蛋白质的鉴定,将制备酪蛋白时所得滤液移入烧杯中，徐徐加热。即出现蛋白质沉淀。此为乳清中的球蛋白和清蛋白。,注意事项,3、离心机使用时注意平衡,加热溶液小心烫伤。,1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋 白质，故调节牛乳液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。,2、乙醚是