分散式固相萃取结合高效液相色谱法快速测定油脂制品中苯并（a）芘.pdf

第 4 2卷 2 0 1 4年 9月 分析化学 ( F E NX I HU A X UE ) 来稿摘登 Chi ne s e J o ur n a l o f Ana l yt i c Che mi s t r y 第 9期 1 38 71 3 8 8 ) l 来 稿 摘 登 l (苎 ； DOI ：1 0 1 1 8 9 5 j is s n 0 2 5 3 3 8 2 0 1 4 0 1 2 9 分散式 固相萃取结合高效液相色谱法快速测定 油脂制品中苯并 ( a ) 芘 杨悠悠 王 浩 刘 佟 ， 杨永坛 州， ( 中粮营养健康研究院 ， 食品安全与营养健康北京市重点实验室 ， 北京 1 0 0 0 2 0 ) 1 引 言 苯并( a ) 芘( B a P ) 具有强致癌和致突变作用。油脂制品中的苯并( a ) 芘主要源 自不合理的加工方式： 如温度过高 的油料焙炒、 高温压榨等工艺过程均可导致油脂受热分解 ， 环化聚合生成苯并( a ) 芘 2 。目前， 关于食品中苯并( a ) 芘较 为普遍的检测方法主要有薄层色谱法 3 、 高效液相色谱法 ( H P L C ) 、 气相色谱 质谱法 5 等。提取净化方法主要有凝 胶渗透色谱法 6 、 液液萃取法 7 、 固相萃取法 、 层析柱法等 9 。本研究采用高效液相色谱荧光检测法 应用分散式固 相萃取技术对油脂制品进行提取净化， 极大简化了处理步骤， 降低了实验成本和有机试剂排放， 实现了油脂制品中苯并 ( a ) 芘的快速精确定量。 2实验部分 2 1 仪器与材料U l t i M e 3 0 0 0 H P L C ( 配荧光检测器， 美国 T h e r m o 公司) ； S T I 6 R型高速离心机( 美国 T h e r mo公司) ； Q L 9 0 2型涡旋混合器( 其林贝尔仪器制造有限公司) ； D c 型氮吹仪( 北京同泰联科技发展有限公司) 。正己烷 、 乙腈 、 四氢呋喃( 色谱纯， 美国F i s h e r 公司) ； 苯并 ( a ) 芘标准品( 纯度 9 9 6 0 5 ， 美国 S i g m a 公司) ； 中性氧化铝( 分析纯 ， 1 0 0 3 0 0目， 4 0 0 o C灼烧 8 h ， 天津光复科技发展有限公司) ； 植物油、 动物油、 辣椒酱样品均购于本地超市。 2 2 样品处理方法取0 2 g 油脂样品 于5 0 m L离心管中加入吸附剂中性氧化铝9 g ， 加人4 5 0 去离子水， 2 0 mL正 己烷 ， 涡旋振荡 l m i n 。取提取液 1 0 m L于4 5 水浴中氮吹至干， 用乙腈一 四氢呋喃( 9 ： 1 ，V V ) 混合溶剂0 5 m L复溶。 再经 0 4 5 m滤膜过滤后， 进样 2 0 ， 用荧光检测器( F L D) 进行色谱分析。 2 3 液相色谱条件E c l i p s e X D B c 。 反相色谱柱( 1 5 0 m mx 4 6 mmx 5 b m， 美国 A g i l e n t 公司) ； X D B C l 8预柱( 1 2 5 mm x 4 6 mm X 5 m， 美国 A g i n t 公司) ； 流速为 1 0 m L mi n ； 柱温 2 5 ； 荧光检测器激发波长 3 8 4 n m、 发射波长4 0 6 n m； 流 动相 ： 乙腈 水 ( 8 8 ： 1 2， ) 。 3 结果与讨论 3 1 中性氧化铝、 水分及萃取剂用量的选择影响回收率和净化效果的3个主要因素为： 吸附剂中性氧化铝的用量、 影 响中性氧化铝活度的加水量、 萃取剂正己烷使用体积。首先对三因素的使用水平进行了初步筛选 ， 对4个水平的中性氧 化铝的用量( 7 、 8 、 9和 1 0 g ) 、 4个水平的加水量( 5 ， 6 ， 7 和 8 ) 、 4个水平的萃取剂用量( 1 6 ， 1 8 ， 2 0和2 2 m L ) 进 行正交设计实验， 得到回收率最佳的优选条件： 中性氧化铝9 g ， 去离子水 4 5 0 ， 正己烷 2 o m L 。 3 2 标准曲线的绘制和检出限标准品用甲苯溶解后， 用乙腈 四氢呋喃( 9 ： 1 ，V V ) 配成 1 0 mg L储备液， 分取储备液 再稀释成 0 2， 1 0 ， 2 0 ， 5 0和 1 0 0 g L ， 各进 样 2 0 测定其峰面积 ， 以峰 面积 为纵 坐标 ( y ) ， 质量浓度为横坐标 ( ) ， 绘制标准曲线， 采用外标法定量。苯并( a ) 芘在0 21 0 0 g L范围内符合线性关系， 回归方程为 y =1 2 1 7 7 0 X 一 6 4 9 9 ， 相 关系数 尺 = O 9 9 9 7 。进空白样品， 以信噪比S N= 3计， 测得方法的最低检出浓度为 1 0 g k g 。 3 3 方法 的加标 回收 率和精密度按照 2 2节 的方法 对阴性油脂样品的三水平加标样 ( 5 0 ， 2 5 0和 5 0 0 g k g )各 进行 6次分析 ， 加标回收率为 8 1 5 9 7 5 ， 精密度为 2 6 4 9 ( n = 6 ) 。在 9 m i n内可分离植物油加标样品( 加 标量 2 5 g k g ) 。 3 4实际样 品测定采用本方法对购于市场的 4 2个油脂样 品进行测定 。样 品种类 包括 ： 菜籽 油 、 葵 花籽油 、 玉米油 、 花 生油、 大豆油、 芝麻油、 橄榄油、 动物油、 辣椒酱油等， 部分阳性结果见表 1 。 与液液萃取 、 固相萃取、 凝胶渗透色谱等传统的前处理方法相比， 本方法更为简便快速， 高效环保 ， 成本低廉。“ 一步 式” 的样品前处理过程集成 了传统的吸附剂活化、 样 品提取 和样 品净化 等样品处理步骤 ， 整个样 品处理 过程仅 2 0 1 4 0 2 1 4收稿 ； 2 0 1 4 0 7 0 8接受 E ma i l ：y a n g y o n ga n a O f O a o m 1 3 8 8 分 析 化 学 第 4 2卷 需 l 01 5 mi n ， 尤其适合批量油脂样品中苯并( a ) 芘的检测。 表 1 实际样 品中苯并 ( a ) 芘 的含量测定 ( n =3 ) T a b l e 1 C o n t e n t o f B e n z o ( a ) p y r e n e i n r e al o il s a m p l e s( n =3 ) 名称 含量 名称 含量 Oi l s a mp l e C o n t e n t( s k s ) Oi l s a mp l e C o n t e n t( g k g ) 葵花籽油 S u n fl o w e r o i l 4 3 6 O 1 9 芝麻油 A S e s am e o i l A 4 2 0 0 2 2 玉米油 C o m o i l 2 9 1 O 2 8 芝麻 油 B S e s am e o i l B 5 5 5 0 1 6 花生油 P e a n u t o i l 2 4 1 0 3 3 辣椒酱油 A C h i l i s a u c e A 5 1 4 0 1 9 大豆油 B e a n o i l 1 4 1 0 1 8 辣椒酱 油 B C h i l i s a u c e B 2 0 3 0 1 2 Re f e r e nc e s 1 $ i m k o P C h r o m a t o g r B， 2 0 0 2， 7 7 0( 1 ) ： 3 1 8 2 L U Hang Me i ， Z H A N G Ha i F e n g C u l i n a r y S c i e n c e J o u r n a l o fY a n g z h o u U n i v e r s i t y ， 2 0 0 8 ， 2 5 ( 2 ) ： 4 0 4 2 陆红梅 ， 章海风扬 州大学烹饪学报 ， 2 0 0 8 ， 2 5 ( 2 ) ： 4 0 4 2 3 D e t e r mi n a t i o n ofB e n z o ( a ) p y r e n e i n F o o d s N a t i o n a l S t a n d a r d s o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o f C h i n a G B T 5 0 0 9 2 7 2 0 0 3 食品 中苯并( a ) 芘的测定中华人 民共和国国家标 准G B T 5 0 0 9 2 7 2 0 0 3 4 K i s h i k a w a N， Wa d a M， K u r o d a N， A k i y ama S ， Na k a s h i ma K C h r o ma t o g r B， 2 0 0 3， 7 8 9 ( 2 ) ： 2 5 7 2 6 4 5 Ve y r an d B， B r o s s e a u d A， S a r c h e r L， Va r l e t V， Mo n t e a u F， Ma r c h an d P， An d r e F， B i z e c B L C h r o ma t o gr A， 2 0 0 7， 1 1 4 9 ( 2) ： 3 3 3 3 4 4 6 WAN G J i an H u a ，G U O C u i ， P A N G G u o F a n g ， Z HA N G Y i - B i n g J o u r n a l ofI n s t r u me n t a l A n a l y s is ， 2 0 0 9， 2 8 ( 3) ： 2 6 7 - 2 7 1 王建华 ， 郭 翠 ， 庞 国芳 ，张艺兵分析测试 学报 ， 2 0 0 9， 2 8 ( 3 ) ： 2 6 7 2 7 1 7 D e t e rmi n a t io n of B e n z o a p y r e n e i n Me a t P r o d u c t s H i g h P e rf o rma nce L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y Me t h o d N a t i o n a l S t and a r d s o f t h e P e o p l e s Re p u b l i c o f C h i n a NY T 1 6 6 6 2 0 0 8 肉制品 中苯并 a 芘的测定高效液相 色谱 法，中华人 民共 和国国家标准N Y T 1 6 6 6 2 0 0 8 8 T A NG H u a ，C H E N D a Z h o u， wu X u e ， X U R u i - F e n g ， Z HO N G S h i I Ji n， S H A O Mi n g - Wu ， WA N G T a n J o u r n a l o f C h i n e s e Ma s s S p e c t r o me - t ry S o c i e t y ， 2 0 1 0， 3 1 ( 4) ： 2 0 8 2 1 3 汤 桦，陈大舟 ， 吴 雪 ，徐锐锋 ， 钟石林 ， 邵 明武 ，王 覃 质谱学报 ， 2 0 1 0， 3 1 ( 4) ： 2 0 8 2 1 3 9 A n i m a l a n d V e g e t a b l e F a t s a n d O i l s D e t e rmi n a t ion of B e n z o ( a ) p y r e ne- R e v e r s e H i g h P e o C o r m a n c e L iqu id C h r o m a t o g r a p h y Me t h o d N a t i o n a l S t an d a r d s o f t h e P e o p l e s Re pu b l i c o f Ch i n a GB T 2 2 5 0 9 2 0 0 8 动植物油脂苯并( a ) 芘的测定反相 高效液相 色谱法 ，中华人 民共和 国国家标准G B T 2 2 5 0 9 2 0 0 8 D e t e r mi n a t i o n o f B e n z o ( a ) p y r e n e R e s i d u e s i n Ed i bl e Oi l a nd Oi l Pr o d uc t s b y Hi g h Pe r f o r ma n c e Li qu i d Ch r o ma t o g r a p hy、 t h Di s pe r s i v e S o l i d Pha s e Ex t r a c t i o n YANG Yo u Yo u ，W ANG Ha o - 一，L I U T o n g -一，YANG Yo n g T an 1 , 2 ( C O F C O Nu t r i t i o n a nd H e a l t h R e s e a r c h I n s t i t u t e ， B e ij in g K e y L a b o r a t o r y ofN u t r i t io n H e a l t h a n d F o o d S a f e 矿 ， B e ij i n g 1 0 0 0 2 0 ， C h i n a ) Ab s t r a c t A d i s p e r s i v e s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n me t h o d c o mb i n e d wi t h r e v e r s e d p h a s e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h v wa s i n v e s t i g a t e d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f b e n z o( a )p y r e n e( B a P)r e s i d u e s i n e d i b l e 0 i l a n d o i l p r o d u c t s T h e d e v e l o p e d “ o n e s t e p ”s a mp l e p r e p a r a t i o n me t h o d i n t e g r a t e d w i t h t h e a d s o r b e n t a c t i v a t i o n， s a mp l e e x t r a c t i o n a n d s am p l e c l e a n i n g Us i n g A1 umi a N a s t he a ds o r b e n t ，g o o d c l e a n i ng e f f e c t a nd h i g h r e c o v e r y r a n g i ng f r o m 81 5 一9 7 5 w a s a c h i e v e d I n a d d i t i o nc o u p l e d w i t h fl u o r e s c e n c e d e t e c t o r( F L D ) ， h i g h s e n s i t i v i t y w a s o b t a i n e d with L O D o f 1 0 g k g( S N= 3 ) F u r t h e rmo r e ， S P S S w a s u s e d t o d e s i g n o nh o g o n al o p t i mi z a t i o n e x p e r i me n t s a n d e s t a b l i s h t