凝血酶原(PT)SOP文件.doc

ZYYY/LJXM-B10-2015 SOP文件 附 录 B B10：血浆凝血酶原时间（PT）测定 第一页页首内容： 血浆凝血酶原时间（PT）测定（凝固法) 科左中旗中医医院检验科 操作规程文件号： ZYYY/LJXM-B10-2015 第 4 版 共 6 页 2015年9月13日起实施。 该SOP变动程序 本操作程序的改变可由使用SOP文件工作人员提出， 并报告专业负责人，科主任批准签字。 本规程每2年复审一次 复审日期: 年 月 日 复审人： 规程编写者：李凤兰 审批者：李凤兰 批准日期：2015年9月13日 医务科保管者：包金泉 检验科保管者：李凤兰 临检实验室保管者：于庆芝 ZYYY/LJXM-B10-2015 SOP文件 B10.1:测定原理:待测血浆加入过量的钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子X成为Xa，后者是凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶原时间。B10.2:标本采集与处理： B10.2.1:受检者准备：空腹静脉取血 B10.2.2：受检者体位：坐位、静脉取血、使用止血带时间不超过1分钟。 B10.2.3:标本种类:采用血浆检测，用枸橼酸钠抗凝。 B10.2.4:使用器材：取血器材包括注射器、针头与试管，必须干燥、清洁，要使用一次性塑料注射器与塑料试管，使用真空采血管后应及时去除真空。 B10.2.5:离心条件与测定时间：必须以3000rpm的离心速度离心15分钟，血浆分离后应在2小时内完成测定。 B10.2.6：抗凝剂：必须用109mmol/L(32g/L)枸橼酸钠抗凝，抗凝液应防止霉变。 B10.2.7：抗凝比例：枸橼酸钠抗凝液1份+全血9份收集标本，及时轻轻颠倒摇匀，红细胞比积大于0.50或小于0.20时,请改变抗凝剂比例: 抗凝剂用量 = 0.00185血量(ml)(100-病人红细胞压积) B10.2.8:拒收标本的标准:不明身份的标本;不按要求试管收集的标本;量不足的标本;运输不当标本.B10.3：试剂：本科所用试剂由上海太阳生物技术有限公司提供全自动血凝仪仪器配套产品，许可证号: 沪食药监械生产许20120575号；产品注册号：沪食药监械（准）字2013第2400797号；产品执行标准：YZB/沪 0556-40-2013。 B10.3.1：试剂盒组成：。 B10.3.1.1：包装规格：干粉剂型1 R1 1.0ml 10 R2 20ml1B10.3.1.2：主要组成成分：R1：检测试剂1PT试剂：10瓶（含组织因子、缓冲液、0.5%BSA、防腐剂）R2：检测试剂2PT缓冲液：1瓶（含缓冲液、稳定剂、防腐剂）试剂ISI值: 见瓶签标示，不同批号试剂组分不能互换。 B10.3.2：试剂的有效期及稳定性： 原装试剂2-8密闭保存可稳定至有效期。 ZYYY/LJXM-B10-2015 SOP文件 试剂复溶后密闭2-8密闭保存,稳定7天;室温20-25稳定24小时；37稳定1小时。试剂保存应防止冷冻。 B10.3.3：抗凝剂：0.109 mol/L(32g/L)枸橼酸钠溶液： 取含二分子结晶水的枸橼酸钠（分子量294.12)3.2g,用蒸馏水溶解,稀释至100ml。 B10.3.4：抗凝剂的稳定性：此试剂在室温保存不得超过2周。 B10.4:仪器 ：CA-510全自动凝血因子分析仪，由日本东亚公司提供。 B10.5：操作步骤： B10.5.1:样品及试剂的准备 ： B10.5.1.1:制备待测血浆样品：静脉采血，0.109 mol/L(32g/L)枸橼酸钠与全血按1：9的比例混合均匀。以2 700g（离心半径为18cm时约3500转/分）离心10分钟分离血浆，2小时内完成检测；如不能及时检测，密闭置2-8保存，最长不超过4小时；或-20以下保存，最长不超过30天，检测时37快速融化。转移血浆时必须用塑料移液管取出。B10.5.1.2:PT试剂：在每瓶R1加入瓶签标示量的R2,充分溶解，颠倒混匀，即为PT应用试剂。B10.5.2：测定：CA-510全自动凝血因子分析仪，输入患者标本序号和输入测试项目，将患者标本按批次号-管位号放入对应位置内，进行测试。操作步骤如下：B10.5.2.1：取PT应用试剂预温3分钟，至37。B10.5.2.2：取待检血浆50ul，37预温3分钟。B10.5.2.3：加入100ul已预温PT应用试剂，混匀，立即计时，记录凝固时间，即为凝血酶原时间（PT）B10.6：计算：CA-510全自动凝血因子分析仪，自动分析计算并打印结果。 B10.7：结果报告：B10.7.1：时间（秒）：直接报告测定时间（秒）。B10.7.2：凝血酶原时间比值（PTR）： 被检血浆凝血酶原时间均值PTR =- 正常对照血浆凝血酶原时间均值【MNPT】B10.7.3：国际标准化比值（INR）: INR=PTRISIISI为国际敏感指数，是厂家生产的试剂和国际参考品（INP）之间的校正 ZYYY/LJXM-B10-2015 SOP文件 指数。B10.8：质控品：由通辽临检中心提供.每日一次质控品,并严格按质控规则对超过允许线的值,查找原因重新测定,直至在控为止,并记录其详细过程. B10.8.1：质控血浆的试剂组成： 质控血浆（微黄色冻干粉) 101.0ml B10.8.2：质控品的使用： B10.8.2.1：每瓶加入1.0ml蒸馏水或去离子水，轻轻混匀，在室温下静置15分钟以保证完全溶解。 B10.8.2.2：根据不同检测实验，其余步骤同待测样品。 B10.8.2.3：该试剂仅用于体外诊断,避免摄入。操作时应按照病人血浆对待,谨慎小心。 B10.8.2.4：此血浆系来源于人的物质，已经过HTLV- /HIV抗体，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和HCV检验为阴性，但没有哪一种方法可以得到百分之百的保证，故仍应将其视为生物危险物品，象人的血液标本一样，都应严格按照实验室操作规程办事，尽量减少对人的危险性。 B10.8.2.5：保存条件：原装质控品试剂2-6保存,稳定至有效期。溶解后4小时内稳定，加盖保存。 B10.9: 参考范围：B10.9.1: PT正常人群参考范围(s)：10.0-14.0s；待测者的测定值较正常对照值延长超过3秒以上才有临床意义。B10.9.2: 凝血酶原时间比值（PTR）： 0.95-1.24(PTR =受检者PT/正常对照PT）； B10.9.3：国际标准化比值（INR）：0.80-1.24（正常参考范围因ISI而异）。在对于某些特殊人群(例如:新生儿、婴幼儿），及使用其它全自动或半自动仪器时，应重新建立正常参考范围，正常参考范围应建立在该组群正常人实验室测试值的 2SD或3SD范围内。B10.10：操作性能：B10.10.1：精密度：批内CV5%、批间相对极差10%B10.10.2：不确定度15%。B10.10.3：注意事项： B10.10.3.1:采血应避免溶血，防止组织液混入。抽血时要顺利，抗凝要充分，不可有凝块；分离血浆时务必去除血小板。B10.10.3.2: 样品血浆不可使用EDTA和肝素抗凝，应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。血液和抗凝剂+的比例应准确，采血量偏差大于10%的标本不宜使用。B10.10.3.3：如果血球压积20%或55%，需按下列公式调整血样与抗凝 ZYYY/LJXM-B10-2015 SOP文件 剂的比例：抗凝剂用量=0.00185血量(ml)(100-病人红细胞压积) B10.10.3.4：使用经校准后的刻度吸管和加样器。B10.10.3.5：使用清洁无污染的塑料或硅化的玻璃器皿。B10.10.3.6：为防止在测定过程中、因子的损失，孵育时间要准确为180秒，孵育温度需保持36.5-37.5 。B10.10.3.7：试剂与样品量可根据需要按比例改变。B10.10.3.8：试剂用后应置于2-6中冷藏，以延长试剂的使用期。B10.10.3.9：试剂及缓冲液严禁冰冻，不同批号的试剂盒各组分不能混合使用。 B10.10.3.10：溶血标本不可使用,必须重新采样。 B10.10.3.11：每个实验室必须有一套质量控制程序,这包括采用正常和异常对照来评估仪器、试剂及技术操作。如果对照血浆所得资料不在参照范围内，那么病人的测定结果将被认为是无效的，不能报告。B10.10.3.12：试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中后交当地废物处理站处理。B10.10.3.13：不慎直接接触本品用自来水冲洗即可。B10.11: 危急值：报告:大于20秒.经复查、审核后10分钟内向临床主治医生报告，并予以登记。 B10.12:方法学评价：B10.12.1:全自动血液凝固测定仪的特点：测定运转速度快，单位时间内检测的标本数多，使离体血标本在最短时间内测定完毕；检测方法多样，具有生物（凝固）法、生物化学（呈色）法和免疫法；检测项目的任意组合和检测随机性；先进的软件系统有利于检测数据的处理和检测参数的设置；检测成本低（使用微小量试剂）和取血量；全自动血液凝固测定仪对部分常规检测项目的试剂已提前预先制定标准曲线，一旦启用这类试剂后，预定标的标准曲线立即生效；全部标准曲线均具有最优化的直线稳定性。针对不同浓度的血样本，全自动血液凝固测定仪可进行自动稀释；采用多参数鉴定质控和多次质量控制能力。B10.12.2：试剂方面:由于不同厂家试剂成分不同，试剂敏感性存在差异。B10.13：临床意义: 检测结果仅反映采样当时状态，需临床医生结合其他检 ZYYY/LJXM-B10-2015 SOP文件 测指标进行相关判断。 B10.13.1：PT延长：: 外源凝血系统的因子、 和纤维蛋白原减低，如先天性某因子缺乏症和低（无）纤维蛋白原血症，但均很少见，获得性的见于DIC、原发性纤溶、维生素K缺乏症