植物组织培养试卷.doc

植物组织培养试卷一、名词解释：（每小题3分，共15分）1初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。2脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。3液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。4细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。5再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。二、填空（每空1分，共40分） 1 植物组织培养过程中，最常用的培养基是 ，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用 和 调节pH，大多数植物的pH要求调节在 范围内。 2 可以通过 、 、 、 、 等措施预防褐变的发生。 3 植物组织培养时，外植体可以是 、 、 、 。 4 应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为 。5 组织培养植株的再生途径有两条：一是 发生，另一是 发生。6 在配制培养基时，可以在培养基中添加 ，利用其吸附能力，可以降低褐变的发生，但它对物质的吸附 。 7 培养基的灭菌要求压力为 、温度为 、维持时间为 。 8 组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为 。 9. 茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段，即 、 、 、 、 。 10茎尖分生组织培养的目的主要是 ，其茎尖一般取 毫米。为了使脱毒效果更好，可以将茎尖分生组织培养与 结合起来。脱毒处理的试管苗，在用于生产之前，必须进行 。 11污染的原因从病源菌上分析主要有两大类 、 。三、判断正误，并改错。（每小题2分，共20分） 1一般将微量元素母液均配制成10倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。 细胞分裂素/生长素的比值较高时，有利于愈伤组织的诱导。 2 对于金边虎尾兰等遗传学上的嵌合体植物，要是组织培养繁殖的植株保持原有的园艺价值，只能通过叶培养。 3 植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，生长素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。 4 利用茎尖分生组织进行脱毒培养时，茎尖外植体大小与脱毒效果成正比。 5某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗。 6无病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，体内营养和生理状况发生改变，因而对其他病毒和病原体的侵染更为敏感，因此在种植脱毒苗的一定要隔离种植。 7微繁不定芽的产生有两个途径，一是不定芽不通过愈伤组织由外植体直接产生，二是外植体诱导产生愈伤组织，由愈伤组织上产生不定芽。后一途径相对较为优越，因为通过愈伤组织不会出现一些突变。 8细胞的全能性，可以通过分裂细胞的脱分化和再分化过程得以体现。 9培养基中的铁盐，常用不易分解的乙二胺四乙酸铁螯合物，以防在pH较高时铁被氧化为不溶的氢氧化铁。四、简答题：（每小题5分，共15分）1植物生长物质如何调控外植体形态发生？答案要点： 在植物组织培养过程中，常用的植物激素有生长素类和细胞分裂素类，在高生长素（如使用高浓度2，4D）时能促进外植体的脱分化，在生长素 / 细胞分裂素比值较高时，促进不定根的发生，比值较低时促进不定芽的发生。2为什么要对脱毒苗进行多次检定？答案要点：由茎尖分生组织培养获得的试管苗，经第一次扩繁后要对试管苗进行病毒检测，以确定材料的脱毒情况。因为剥取茎尖的大小直接关系到脱毒效果，一船剥取的茎尖愈小成苗率愈低，但脱毒率高，而培养的茎尖愈大，成苗率愈高，但脱毒率低。 脱毒苗中病毒有可能再次出现，病毒的再现可能有三方面的原因，一是脱毒不彻底，脱毒后试管苗血清检测没有病毒反映，是因为植株体内病毒含量非常少，以致检测不到，试管苗多次继代后，病毒逐渐积累，从而再次出现病毒侵染；二是一些弱系病毒或一些暂时没有条件检测到的病毒，在强系病毒脱掉后快速繁殖造成危害，三是由于操作及其它一些原因造成的病毒再次侵染。3茎尖培养根据培养的目的和取材大小可分为哪几种类型？各有何特点？答案要点：茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。茎尖分生组织培养主要是指对茎尖长度不超过0.l mm，最小只有几十微米的茎尖进行培养，这种培养可获得无病毒植株。但这样小的茎点分离实际上是很困难的，而且成苗时间也很长，需要一年乃至更长的时间。因此在茎尖分生组织培养中往往采用带有l2个叶原基的生长锥进行培养。普通茎尖培养是指对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，这类茎尖的培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需要的时间短，能加快繁殖速度。五、综述题（每小题10分，共10分）试管苗移栽时应注意哪些事项？1保持试管苗的水分平衡2要选择合适的基质3要防止杂菌滋生4要注意光、温的管理。二、填空（每空1分，共40分）1 MS、HCL、NaOH、5.66.0 2 适宜外植体、最佳的培养基、连续转接、加抗氧化剂、加活性炭。 3 器官、组织、细胞、去掉细胞壁的原生质体 4 无菌砧木、茎尖准备、嫁接、嫁接苗培养、移植 5 器官、胚胎 6 活性炭、无选择性。7 10005000Lx、16h、252 8 2，4-D、NAA、 IBA、IAA 9 无菌外植体的建立、芽的增殖、中间繁殖体的增殖、诱导生根、试管苗的移栽。10 脱毒、0.1 热处理、病毒检定11 细菌、真菌 三、判断正误，并改错。1一般将微量元素母液均配制成100倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。2 细胞分裂素/生长素的比值较高时，有利于愈伤组织芽的诱导。3 对于金边虎尾兰等遗传学上的嵌合体植物，要是组织培养繁殖的植株保持原有的园艺价值，只能通过茎尖和侧芽培养。4植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，细胞分裂有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。 5. 利用茎尖分生组织进行脱毒培养时，茎尖外植体大小与脱毒效果成反比。 6.某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗。 7.无病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，体内营养和生理状况发生改变，因而对其他病毒和病原体的侵染更为敏感，因此在种植脱毒苗的一定要隔离种植。 8. 微繁不定芽的产生有两个途径，一是不定芽不通过愈伤组织由外植体直接产生，二是外植体诱导产生愈伤组织，由愈伤组织上产生不定芽。前一途径相对较为优越，因为通过愈伤组织会出现一些突变。 9. 细胞的全能性，可以通过成熟细胞的脱分化和再分化过程得以体现。 10培养基中的铁盐，常用不易分解的乙二胺四乙酸铁螯合物，以防在pH较高时铁被氧化为不溶的氢氧化铁。一、填空：（ 10 个小题，每小题 2 分，共 20 分） 1 、组织培养植株再生的途径主要有两条：一是_ ，另一个是_ 。 2 、试管苗的生态环境与外界环境条件相比有四大差异：即_ 。 3 、 B 5 培养基特点是_ ； MS 培养基的特点是_ 。 4 、使用植物生长调节物质时要注意：_ 、_ 。 5 、茎尖分生组织培养主要是对 茎尖进行培养，目的是_ 。 6 、由胚乳培养得到的植株，除少数是_ 倍体外，多数是由_ 细胞组成的嵌合体。 7 、受精胚珠培养的目的：一是_ ，二是_ 。8 、 是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂是_ 。 9 、离体培养的花粉粒成苗途径与花药培养相同，即有_ 和_ 两条途径。 10 、鉴定杂种植株的方法有_ 、_ 、_ 和_ 。 二、名词解释：（ 10 个小题，每小题 2 分，共 20 分） 植物组织培养 : 将植物的离体器官、组织、细胞放在离体无菌条件下，在人工控制的环境条件下，培养在人工配置培养基上，使其生长、分化成植株的过程。外植体 : 由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织或器官等。微尖嫁接技术 : 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。 脱分化 : 将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。 花药培养 : 是 将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培养： 是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。 平板培养法 : 把单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合，并平铺一薄层在培养皿底上的培养方法。无病毒苗 : 指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的 存在表现阴性反应的苗木无土栽培：也称水培，就是不用土壤，而用无机化肥溶液，即营养液来栽培植物的技术。 连续培养 : 指在培养过程中，以不断抽取悬浮培养物并注入等量新鲜培养基，使培养物不断得到养分补充，保持其恒定体积的培养基。 胚状体 ： 指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。三、选择题：（单项选择题， 10 个小题，每小题 1.5 分，共 15 分）1 、将细胞分裂素类物质配制成 0.5-1mg/ml 的母液时，可先用少量的（ ）溶解，再定容到所需的体积。 A 、 95% 酒精 B 、 0.1mol NaOH C 、 85% 酒精 D 、 0.1mol HCl 2 、外植体接种时，刀、剪、镊子等用具一般在使用前浸泡在（ ）中，用时在火焰上灼烧灭菌，冷却后使用。 A 、 70% 酒精 B 、 85% 酒精 C 、 95% 酒精 D 、 0.1% 升汞 3 、 KNO 3 和 (NH 4 ) 2 SO 4 含量高，不含钼的培养基是（ ）。 A 、 White 培养基 B 、 N 6 培养基 C 、 MS 培养基 D 、 B 5 培养基 4 、培养室的湿度一般保持在（ ）。 A 、 50%-60% B 、 60%-70% C 、 70%-80% D 、 80%-90% 5 、培养基进行高压灭菌时，当压力升到 108kPa 时维持 15-20min ，即可达到灭菌目的。此时灭菌锅内的温度可达（ ）。 A 、 101 B 、 110 C 、 121 D 、 120 6 、琼脂在固体培养基中的用量一般为（ ） g/L 。 A 、 6-10 B 、 0.6-1.0 C 、 2-6 D 、 0.2-0.6 7 、进行茎尖培养脱毒时，通常以带 1-3 个幼叶原基的茎尖作外植体较合适。则茎尖的长度约为（ ）。 A 、 0.1-0.3mm B 、 0.3-0.5mm C 、 0.4-0.6mm D 、 0.6-0.8mm 8 、适合水稻、小麦、玉米等禾谷类作物花药培养的培养基是（ ）。 A 、 MS 培养基 B 、 B 5 培养基 C 、 N 6 培养基 D 、 White 培养基 9 、在细胞悬浮液成批培养过程中，细胞数目会不断发生变化，其中细胞数目迅速增加，增长速率保持不变的是（ ）。 A 、减慢期 B 、延迟期 C 、对数生长期 D 、静止期 10 、在组织培养中，可通过（ ）获得单倍体植株。 A 、受精胚珠的培养 B 、胚培养 C 、未授粉子房的培养 D 、胚乳培养 四、简答题：（ 5 个小题，每小题 5 分，共 25 分）1 、什么是植板率？小细胞团的计数方法有几种？ 植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。 小细胞团的计数方法：在低倍显微镜直接计算视野中的小细胞团数。细胞团显影法。在暗室中，在平板下放一张印相纸，打开平板上方的光源，平板上的细胞团就印到相纸上，然后冲洗相纸即得细胞团呈白色、培养基呈淡黑色的照片，再计算白点的数目，即为形成细胞团的数目。2 、试管苗与常规苗相比有哪些特点？ (1)生长细弱；(2)光合作用差(3)叶片气孔数目少，活性差 (4) 根的吸收功能弱(5)对逆境的适应和抵抗能力差3 、阐述外植体的成苗途径。 1) 外植体先形成愈伤组织，再形成完整植株 (1) 同时长芽和根(2) 先长芽，再长根(3) 先长根，再长芽 2) 形成胚状体，再发育成完整植株 3) 外植体直接形成芽和根。4 、 目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？ 直接检测法； 指示植物法； 抗血清鉴定法； 分子生物学鉴定法：1、双链 RNA 法( dsRNA)： 、互补 DNA(cDNA) 检测法： 电镜检查法5、 试管苗的生根培养时应注意哪些方面？ 1）用无机盐浓度低的 White 及12，13或14 MS、B 5 培养基 2）适当加大生长素- NAA 的浓度，不用或少用细胞分裂素。也 可在无激素的培养基上生根。 3）降低蔗糖的浓度到1.0-1.5%，以增强植株的自养能力。 4）加入1%左右的活性碳；以免培养基过硬 5）将光强度增加到3000-10000 lux， 以提高小植株的光合能力 6 ）光周期可用 24 小时光照或 16 小时， 8 小时黑暗以利于形态建成。五、论述题：（ 3 个小题，任选 2 个，每小题 10 分，共 20 分） 1 、无菌操作接种外植体时，应注意哪些方面？ (1) 在接种 4h 前用甲醛熏蒸接种室 ； (2) 在接种前15- 20min ，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； (3) 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； (4) 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面； (5) 接种工具蘸95%酒精，灼烧； (6) 接种时将试管斜着，使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。 (7) 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等； (8) 接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。2 、如何纯化分离的植物原生质体并鉴定其活力？ 原生质体的纯化： 1 ）离心沉淀法：应用原生质体的比重大于溶液的性质，将原生质体沉于底部。 2 ）漂浮法：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面。 3 ）界面法：选用两种不同渗透浓度的溶液，使原生质体介于两种溶液之间。 原生质体活力的测定： 1 ）、形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜色鲜艳的即为存活的原生质体。 2 ）、染色识别： 1 、 0.1% 酚蕃红或 Evans 蓝染色，有活力的不被染色，死亡的被染上色。 2 、双醋酸盐荧光素（ FDA ）染色法：荧光显微镜下有荧光的即为有活性的原生质体。3 、 无土栽培过程中应注意哪些问题？ （ 1 ）、配制营养液时，忌用金属容器，更不能用它来存放营养液，最好使用玻璃、搪瓷、陶瓷器皿。 （ 2 ）、配制营养液时如使用自来水，应加入少量的乙二胺四乙酸钠或腐殖酸盐化合物来处理水中氯化物和硫化物。 （ 3 ）基质应选用具有保水性、排水性和一定强度及稳定性，而且无害的物质。 （ 4 ）在栽培中，需经常测营养液中的 pH ，使其保持恒定。 （ 5 ）在水培中，植物需从营养液中吸氧，注意增加营养液中氧的含量。一、填空：（ 10 个小题，每小题 2 分，共 20 分） 1 、 体细胞胚胎发生 ， 器官发生 2 、 高温、高湿、弱光和无菌 3 、含较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素 ； 无机盐的浓度高。 4 、种类和浓度 、 生长素和细胞分裂素的比值 5 、茎尖长度不超过 0.1mm ，最小只有几十微米的 ， 获得无病毒植株。 6 、三，各种倍性 7 、用来打破种子的休眠 ， 挽救胚的发育，以获得杂交种 8 、 压片染色法 ， 醋酸洋红 9 、胚状体成苗 ， 愈伤组织再分化成苗 10 、形态学鉴定、细胞学观察、 DNA 内切图谱分析、同工酶分析 三、选择题1.D 2.C 3.B 4.C 5.C 6.A 7.B 8.C 9.C 10.C 一、填空：（ 10 个小题，每小题 2 分，共 20 分） 1 、原生质体的分离方法有 _ 和_ 。 2 、胚胎培养包括_ 。 3 、 White 培养基特点是_ ； N 6 培养基的特点是_ 。 4 、进行纸桥培养的最大优点是_ ；缺点是_ 。 5 、组织培养时，应选择具有_ 外植体。 6 、花药和花粉培养时，适宜的花粉发育时期是_ 。 7 、在细胞培养中，常由分散性较好的_ 来制备单细胞，也可以用_ 从植物不同组织直接制备单细胞。 8 、原生质体培养时常用的三个指标：_ 、_ 和_ 。 9 、原生质体融合的方法有_ 、_ 和_ 。 10 、细胞全能性学说的内容为：_ 。 二、名词解释：（每小题 2 分，共 20 分） 1 、外植体 : 是指植物组织培养中的各种接种材料。包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。 2、愈伤组织培养: 是指将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 3 、胚培养 : 是指将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在进行组织培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 4 、看护培养法 : 指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 5、体细胞杂交: 即原生质体融合，就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在人工控制的条件下，像性细胞受精作用那样互相融合成一体。 6、 快速繁殖(微繁殖)：用组织培养的方法，使植物的部分器官、组织在人工控制的适宜条件下，迅速扩大培养，并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。 7 、纸桥培养法：用酒杯状的滤纸代替琼脂，使杯底朝上塞入试管中，与液体培养基接触，将离体茎尖置于滤纸上方进行培养。 8 、体细胞胚胎发生途径 : 由外植体形成胚状体，经类似合子胚发育过程形成新植株的过程。 9 、 无病毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。 10、 胚状体 ： 指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。三、选择题：（单项选择题， 10 个小题，每小题 1.5 分，共 15 分）1 、无菌操作接种时，在操作前和操作期间要经常用（ ）擦拭双手和台面。 A 、 70% 酒精 B 、 85% 酒精 C 、 95% 酒精 D 、 0.1% 升汞 2 、在组织培养中，一般用蔗糖作为碳源，其浓度为（ ）。 A 、 1%-3% B 、 3%-5% C 、 5%-10% D 、 1%-5% 3 、在进行花药和花粉培养时，最适宜的花粉发育时期是（ ）。 A 、成熟花粉粒 B 、单核花粉期 C 、二核花粉期 D 、三核花粉期 4 、无机盐的浓度高，尤其硝酸盐的用量大，还含有一定数量铵盐的培养基是（ ）。 A 、 White 培养基 B 、 N 6 培养基 C 、 MS 培养基 D 、 B 5 培养基 5 、进行茎尖培养脱毒时，通常以带 1-3 个幼叶原基的茎尖作外植体较合适；则茎尖的长度约为（ ）。 A 、 0.1-0.3mm B 、 0.3-0.5mm C 、 0.4-0.6mm D 、 0.6-0.8mm 6 、培养室温度一般要求常年保持在（ ）左右。 A 、 25 B 、 22 C 、 28 D 、 24 7 、在组织培养中，可通过（ ）获得单倍体植株。 A 、受精胚珠的培养 B 、胚培养 C 、胚乳培养 D 、未授粉子房的培养 8 、大多数植物在进行组织培养时，要求培养基的 pH 为（ ）。 A 、 5.6-5.8 B 、 5.8-6.0 C 、 6.0-6.2 D 、 6.3-6.5 9 、适合双子叶植物花药培养的培养基是（ ）。 A 、 MS 培养基 B 、 B 5 培养基 C 、 N 6 培养基 D 、 White 培养基 10 、将生长素类物质配制成 0.5-1mg/ml 的母液时，可先用少量的（ ）溶解，再定容到所需的体积。 A 、 100% 酒精 B 、 0.1mol NaOH C 、 85% 酒精 D 、 0.1mol HCl 四、简答题：（ 5 个小题，每小题 5 分，共 25 分） 1 、简述茎尖微繁技术的过程 (1) 无菌培养体系的建立 (2) 芽的增殖 (3) 中间繁殖体的增殖 (4) 诱导生根 (5) 试管苗的移植2 、 无土栽培与常规土壤栽培相比有哪些优点？ 3 、单倍体植株染色体加倍的方法有哪些？ 1) 自然加倍 2) 人工加倍： 用秋水仙素溶液浸苗、处理愈伤组织和用含 0.4% 秋水仙素的羊毛脂涂抹单倍体植株的顶芽、腋芽，可得到能结实的二倍体植株。 3) 愈伤组织反复继代培养后，经分化培养可得到二倍体植株。4 、组织培养一般进行哪几道工序？ 1)、培养器皿的清洗；2)、培养基的配制、分装和高压灭菌；3)、无菌操作材料的表面灭菌和接种；4)、将培养物放到培养室培养；5)、试管苗的驯化、移栽和初期管理。5 、愈伤组织的器官发生有哪 4 种情况？ （1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根； （2）先形成芽，再在芽伸长后，在其茎的基部长出根而形成小植株，多数植物属这种情况； （3）先产生根，再从根的基部分化出芽而形成小植株。这种情况较难诱导芽的形成，尤其对于单子叶植物； （ 4 ）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株小植株。少见五、论述题：（ 3 个小题，任选 2 个，每小题 10 分，共 20 分） 1 、什么是细胞悬浮培养？简述成批培养和连续培养的的特点。 细胞悬浮培养是 使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。 1 ）成批培养的特点： (1) 细胞生长在固定体积的培养基上，直至养分耗尽 (2) 用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布 (3) 细胞数目呈现慢 快 慢 停止生长的变化 (4) 必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养。 2 ）连续培养的特点：（ 1 ）由于不断加入新鲜培养基，保证了养分的充分供应，不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象（ 2 ）可在培养期间使细胞保持在对数生长