肝炎的分子诊断与临床应用（888）.ppt

,肝炎分子诊断项目开展介绍 -艾迪康市场部,目 录,1、了解肝炎分子诊断 2、分子诊断在HBV中的临床应用 3、分子诊断在HCV中的临床应用 4、ADICON已开展的肝炎分子诊断项目,我国乙肝病毒感染率概况,20062010年全国乙型病毒性肝炎防治规划显示，中国是乙型肝炎病毒感染和发病人数最多的国家，全国有6.9亿人曾感染过乙肝病毒，其中1.2亿人长期携带乙肝病毒。 目前全国慢性乙肝病人2000万人，每年死于与乙肝相关的肝病患者达28万例，发病率和死亡率都位居前三位。每年造成的直接经济损失约达3600亿元人民币。,我国乙肝病毒感染率概况,什么是分子诊断,在临床上应用核酸（DNA/RNA) 和分子生物学技术, 在基因水平诊断和监控疾病情况和疗效，评估疾病的检测方法。,分子技术在乙肝诊断与治疗中应用,高灵敏度乙肝DNA检测,高精度病毒载量检测系统 （ COBAS AmpliPrep/Cobas TaqMan ）,高灵敏度乙肝DNA检测优势,定量PCR技术检测患者的血清HBVDNA含量，能更准确地反映病毒复制程度，对HBV相关疾病的诊断、治疗、判断预后意义重大。 QF-PCR是国内常用的定量检测血清HBVDNA水平的方法，COBAS 系统是美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于血清HBVDNA定量检测的方法。它具有灵敏度高，线性范围广，实时监控，重复性好，可检测A、B、C、D、E、F、G、前C区变异等多基因型DNA载量优点。 由于本QF-PCR试剂盒的线性范围为1.0x 103 copiesmL1.0x 108 copiesmL，对于低于1.0 x 103 copiesmL标本的检测结果不能给出具体拷贝值，有存在漏检的可能。 而COBAS 系统线性范围为20-1.7108 IU/mL，因此， COBAS 系统更能准确反映血清HBV DNA含量。,COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV Test, v2.0,Cobas,高灵敏度 乙肝：20 IU/mL,准确判断治疗起点/终点,线性范围 乙肝：20-1.7108 IU/mL,极佳的重复性，结果可靠 正确指导抗病毒治疗,每批试剂均使用WHO标准品校准,保证定量结果的准确性 和可溯源性,每个样本使用同源性内标定量,避免结果不准确,采用AmpErase酶,减少交叉污染,目前在国内唯一满足治疗指南和专家共识的HBV DNA和 HCV RNA检测试剂,HBV DNA 监测的重要性 口服核苷（酸）类似物疗效评估,部分病毒学应答 60 2,000 IU/mL 加其他药物治疗 每3个月监测HBV DNA,*Keefe, E. Clin Gastro Hepatology. 2007; (5):890-897.,抗病毒治疗应将HBV DNA降至尽可能低的浓度，理想是低于实时定量 PCR方法（灵敏度10-15 IU/mL）的最低检出限1 1. EASL HBV Guidelines. J Hepatology. 2009;50:277-242,CHB疾病管理:治疗目标,HBsAg 清除及血清学转换,治疗终点,ALT正常,组织学改善,HBV DNA 降低/消失,HBeAg 血清学转换,HBeAg消失,cccDNA 清除,*Lok, A.S.F et.al. “Chronic Hepatitis B: Update 2009.” HEPATOLOGY, Vol 50, No. 3, 2009, pgs 8-9,治疗终点,2009年EASL指南提出的治疗终点： 最理想的治疗终点：持续的HBsAg 消失，伴或不伴抗HBs 抗体出现。 满意的治疗终点：在HBe Ag 阳性患者中，出现持续的HBeAg 血清转换 次级的满意治疗终点：尽可能降低病毒DNA水平（降至实时定量 PCR检测限以下：10-15IU/ml）,HBV基因分型,根据HBV全基因核苷酸序列的差异，分为不同基因型:A.B.C.D.E.F.G.H共8个型 不同的基因型具有不同地域分布 我国主要是BC型为主，偶有A型 北方C型,HBV基因分型检测临床意义,HBV变异的基础,乙肝病毒:高变异性 1/105 24h 一万亿-十万亿拷贝*变异：一千万一亿 复制过程:DNA-RNA-DNA HBV逆转录酶:缺乏严格的校正机制 变异:自然变异,免疫压力等等,P区耐药位点检测,HBV病毒耐药性检测,长期使用抗病毒药物可引起HBV耐药，引起耐药的基因突变位点主要集中于P区 原因：抗病毒药物作用在病毒P区药物靶点上，引起相关基因变异，使得药物与相关靶点作用下降，进而产生耐药。,抗病毒治疗后HBV从病毒变异到临床耐药,原发无应答,病毒学（部分）应答,临床耐药,抗病毒治疗后HBV从病毒变异到临床耐药,病毒耐药的临床影响,耐药病毒的出现使后续治疗的药物疗效降低 耐药病毒的出现抵消了之前获得的临床益处 病毒反弹, 血清转氨酶升高, HBeAg血清转换率降低 肝脏病理进展 肝硬化病人出现肝功能失代偿和死亡 肝移植后肝炎复发率增高 公共卫生危害 耐药病毒株的传播 免疫逃逸,Liaw et al. 1999. Hepatology 30: 567,病毒的水平越低，耐药发生的几率越低,初治患者耐药发生率,拉米夫定,阿德福韦,恩替卡韦为基因型耐药发生率, 替比夫定为因耐药发生的病毒学反弹发生率,P区耐药位点检测,长期使用抗病毒药物可引起HBV耐药，引起耐药的基因突变位点主要集中于P区 耐药基因分析在临床药物选择上的应用 目前最常见P区耐药位点11个 （169、173、180、181、184、194、202、204、233、236、250）,拉米夫定 M204I/V L180M V173L 恩曲他滨 V173L L180M M204I/V 阿德福韦 A181V N236T 恩替卡韦 T184A（G/I/S) M250V 特比夫定 M204I/V,常用抗病毒药物的耐药位点,常见变异的交叉耐药性,敏感,界于中间,耐药,抗病毒药物的选择和使用,1.一种药物产生耐药时，需要用具有不同耐药位点药物代替 2.为减少耐药情况，建议从治疗开始就使用具有两种不同耐药位点药物一起治疗 3.由于抗病毒药物的耐药以及治疗的长期性，在治疗过程中应该定期检查，或是在发现药物治疗效果不佳时需排除产生耐 药的可能,药物治疗慢性乙肝患者管理路线图,检测,检测,检测,检测,耐药检测项目,目前检测的变异位点： P区耐药位点11个 （169、173、180、181、184、194、202、204、 233、236、250） 专门检测LAM变异位点：180，181，204，173 专门检测ADV变异位点：181，233，236,艾迪康医学检验中心P区基因变异检验报告单样张,丙型肝炎病毒,传播途径:主要血液/体液传播(似HBV) 是引起输血后慢性肝炎和肝硬化主要原因 无症状HCV携带者和慢性丙肝者多见 感染HCV后，慢性化的比例高达50%以上 免疫力不牢固,黄病毒科 丙型肝炎病毒属 球形有包膜的RNA病毒，直径50nm 病毒基因为单股正链RNA，链全 长约10Kb,HCV RNA 检测,确定引起