和胃止痛片质量标准的研究

1 / 8 和胃止痛片质量标准的研究 【摘要】 目的 建立和胃止痛片的质量标准。方法采用高效液 相 色 谱 法 测 定 方 中 黄 连 药 材 中 盐 酸 小 檗 碱（ C20H17NO4HCl ）的含量。并同时对黄连、延胡索、木香进行薄层鉴别。结果盐酸小檗碱含量测定进样量在 0.0850.850g 有良好的线性， r=0.999 9，平均回收率 96.7%，RSD为 1.53%。 TLC 定性鉴别阴性无干扰，对照品与供试品溶液斑点对应整齐、清晰。结论该检测方法方便，准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。 【关键词】 和胃止痛片；薄层鉴别；高效液相色谱法；盐 酸小檗碱 Abstract： Objective To establish the quality standard for Heweizhitong tablet. MethodsThe content of Rhizoma coptidis (berberine hydrochloride) in Heweizhitong tablet was determined by HPLC. Rhizoma coptidis ， Rhizoma corydalis, banksian rose were identified by TLC. ResultsBerberine hydrochloride showed a good linearity in the concentration of 1.03 to 5.15g, r=0.999 93,the average recovery rate was 96.70% and the RSD was 1.53%. The TLC blank test showed no interference and theTLC spots developed were fairly 2 / 8 clear. ConclusionThe method is simple,accurate and reproducible,and it can be used for the quality control of Heweizhitong tablet. Key words:Heweizhitong tablet； TLC； HPLC； Berberine hydrochloride 和胃止痛片收载于国家中成药标准汇编 中成药地方标准上升国家标准部分，由大红袍、鸡矢藤、管仲、 金荞麦、黄连、砂仁、延胡索、木香 8味药材组成。功能主治彝医：猜尼围快，围斯希；中医：行气活血，和胃止痛。用于肝胃气滞，湿热淤阻所致的急慢性胃肠炎、胃及十二指肠溃疡、慢性结肠炎。和胃止痛片是中成药中治疗这类疾病的良药，市场需求量大。为了控制质量笔者对方中的黄连、延胡索、木香进行薄层鉴别，用高效液相色谱法对黄连中的盐酸小檗碱的含量测定进行了研究。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent G1311A Quat Pump， G1314A VWD， G1379A DEGASSER， AT-330 柱 温箱， Xtema Rp18（ 150 mm3.9 mm ，5 m ）色谱柱，塞多利斯全自动电子天平 (德国塞多利斯 )。 1.2 试药硅胶 G （青岛海洋化工厂） ;色谱纯乙腈 ;其它试剂均为分析纯；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，编号为 110713-200208，为供含量测定用） ;3 / 8 延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检验所提供，延胡索乙素对照品批号： 110726-200208, 供定性测定用） ;和胃止痛片样品（自制）。 2 方法与结果 2.1 定性鉴别 2.1.1 黄连的薄层鉴 别 1 取本品 25片，研细，加氨试液 1.5 ml使润湿，加三氯甲烷 30 ml，超声处理 15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材 0.5 g 和处方中不含黄连药材按制备方法制成阴性样品，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述 3 种溶液各 2l ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以正丁醇 -冰醋酸 -水（ 712 ）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（ 365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点。阴性对照无干扰。见图 1。 2.1.2 延胡索的薄层鉴别 2 取本品 50片，研细，加甲醇 50 ml，超声处理 15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水 20 ml 使溶解，用浓氨试液调节pH值至 8 10，用乙醚振摇提取 3 次， 15 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇 1 ml 使溶解，作为供试品溶液。取4 / 8 延胡索乙素对照品，加甲醇制成每毫升含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。另取处方中不含延胡索药材按制备方法制成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述 3 种溶液各 5 l ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以甲苯 -丙酮（ 92 ）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰。日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（ 365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。见图 2。 2.1.3 木香的薄层鉴别 取本品 10 片，研细，加三氯甲烷 10 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至 1 ml，作为供试品溶液。取去氢木香内酯和木香烃内酯对照品适量，加甲醇制成每毫升各含0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。另取处方中不含木香药材按制备方法制成的阴性样品再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述 3 种溶液各 5 l ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷 -环己烷（ 51 ）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在 105 加热至斑点显色清5 / 8 晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图 3。 2.2 含量测定 2.2.1 对照品溶液的制备精密称取在 100 干燥 5 h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升中含盐酸小檗碱 60 g 的溶液，过滤即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 3取本品 10片，除去包衣，研细，取约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 80%甲醇 25 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 90 W，频率 59 kHz） 40 min，取出，放冷再称定重量，用 80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 色谱条件与实验结果色谱柱： Xtema Rp18（ 150 mm3.9 mm ， 5 m ）；柱温： 30 ；流动相：乙腈 -0.1%磷酸溶液（ 4060 ）（每 100 ml加十二烷基磺酸钠 0.1 g）；检测波长 265 nm；流速 1 ml/min，照此条件分析，制剂中的盐酸小檗碱的主峰和其它组分均能达到基线分离。对照品溶液、供试品溶液及缺黄连的阴性对照品溶液的色谱图。见图4 6。 2.2.4 线性范围的考察精密称取盐酸小檗碱对照品17.0mg，置 25 ml 量瓶中，加 80%甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀（浓度为 680 g/ml ），再分别精密吸取对照6 / 8 品母液适 量，用 80%甲醇溶液稀释成不同浓度的对照品溶液：17.0， 34.0， 68.0， 85.0， 170.0 g/ml 。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各 5 l ，按正文中色谱条件分析进样，以峰面积积分值为纵坐标，盐酸小檗碱的量为横坐标绘制标准曲线（图 7） ,计算得盐酸小檗碱回归方程： Y=3 685.126 28X+15.652 020 17， r=0.999 93。表明盐酸小檗碱进样量在 0.085 0.850 g 范围内具有良好线性关系。 2.2.5 精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(68.0 g/ ml)5 l ，重复进样 5次，按上述色谱条件测定峰面积。求相对标准偏差以盐酸小檗碱峰面积积分值计 RSD为 0.54%。表明仪器精密性良好。 2.2.6 重现性实验分别取同一批（ XX1001）和胃止痛片样品 5 份，按正文中含量测定项下方法实验，测定盐酸小檗碱的含量。样品中盐酸小檗碱含量的相对标准偏差为0.57%，表明此法重现性良好。 2.2.7 稳定性实验取上述标准曲线项下的盐酸小檗碱对照品溶液 (68.0 g/ml) 及和胃止痛片供试品溶液各 5 l ，分别在 0， 2， 4， 6， 8， 12 进样，按正文中含量测 定项下条件测定对照品、供试品在 0 12 h 内峰面积的 RSD 分别为 0.76%， 0.81%，表明对照品、供试品放置 12 h 内基本稳定。 2.2.8 加样回收率实验精密称取盐酸小檗碱对照品7 / 8 （ 100 干燥 5 h） 15.4 mg，置 10 ml 量瓶中，加 80%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成（ 1.54 mg/ml）对照品溶液。取同一批（ XX1001）已知含量的和胃止痛片（ 5.79 mg/g）精密称取样品各 5 份，每份约 0.25 g ，分别精密加入上述盐酸小檗碱对照品溶液各 1 ml，按正文中含量测定项下方法测定供试 品溶液并测定其盐酸小檗碱的含量。平均回收率为96.7%，相对标准偏差为 1.53%，表明此法回收率良好。结果见表 1。表 1 加样回收率实验结果（略） 2.2.9 样品含量测定取本品 10 批，按正文中含量测定项下方法测定。结果见表 2。表 2 10 批和胃止痛片样品含量测定结果（略） 3 讨论 实验过程中对盐酸小檗碱对照品的 80%甲醇溶液进行停泵扫描，波长范围为 190 nm 至 400 nm。结果盐酸小檗碱的紫外特征吸收最大 265 nm，由于在 265 nm处检测系统易稳定，峰形好、响应大，确定 265 nm为 检测波长。 由于不同产地及采收时间等原因导致黄连药材中的盐酸小檗碱的含量有高有低，结合以上 10 批样品中盐酸小檗碱的含量测定结果，将本品