大肠杆菌的分离和培养ppt课件

选修1 生物技术实践,第一部分 微生物的利用 实验1 大肠杆菌的培养和分离 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 第二部分 酶的应用 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 实验6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 第三部分 生物技术在食品加工中的应用 实验8 果酒及果醋的制作 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 第四部分 浅尝现代生物技术 实验11 植物的组织培养,1,第一部分 微生物的利用,微生物：是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，如酵母菌、细菌、放线菌、霉菌、蓝细菌和病毒等。 绝大多数微生物与传染病无关，90%以上的微生物是对人类有益的。 微生物有多种用途，许多抗生素来源于放线菌和霉菌；有些食品由微生物发酵制成，如酒由酵母发酵产生，腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成。,2,实验1 大肠杆菌的培养和分离,基本要求 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的培养。,3,一、大肠杆菌,革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌 在肠道中一般对人无害 但也有一些菌株对人体是有害的，可侵袭肠粘膜并产生毒素 任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。,4,结晶紫 碘液 95%乙醇,革兰氏染色法,革兰阳性 革兰阴性,复染,5,菌落（colony）：一个细菌细胞在固体培养基上发展成一个肉眼可见，具一定形态结构的子细胞群。,粗糙型菌落,6,7,二、细菌的培养和分离,1、实验仪器设备：,移液枪,8,接种环,玻璃刮刀,9,超净工作台,（保证 无菌环境）,10,高压蒸汽灭菌锅,11,恒温培养箱,12,摇 床,13,2、培养基：,平板,斜面,固体培养基,LB培养基： 蛋白胨：0.5g 酵母提取物：0.25g NaCl:0.5g H2O:50mL 琼脂：1g,调pH值,14,液体培养基（培养液）,15,3、实验步骤：,（1）培养基、培养皿灭菌 高压蒸汽灭菌法,将配制好的50ml LB液体和固体培养基 分别装入250ml 三角瓶中，加上封口膜；,将培养皿用牛皮纸包好；,16,无菌技术,最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞（不能用脱脂棉：易吸水引起后引起污染），也可采用各种金属、塑料、封口膜及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。,（160 2h或170 1h）,17,高压蒸汽灭菌法：玻璃器皿、金属、移液枪头等 （火焰）灼烧：接种环、试管口、三角烧瓶口 紫外灯+过滤风：超净台灭菌,消毒：70%酒精棉球,（消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。）,18,（2）倒平板,灭菌后，待灭菌锅压力与大气压力相同时打开锅盖 将有培养基的三角瓶和培养皿放到超净台上 打开超净台的紫外灯和过滤风，待固体培养基冷却到60时，关闭紫外灯 用酒精棉球消毒桌面和手。,19,倒平板： 10-12ml培养基/培养皿 每倒入一个后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，并形成平面。,酒精灯旁： 左手？右手？,20,制作试管斜面：,将配制好的呈熔化状态的培养基转移到试管中时必须用三角漏斗,灭菌试管冷却到50左右， 把试管棉塞一端搁在玻棒上， 待冷凝后即成试管斜面,将分装好的含培养基的试管灭菌,P21小字部分,21,不正确,棉塞制作,22,（3）接种培养,左手：将大肠杆菌斜面和有液体培养基 的三角烧瓶，靠近酒精灯火焰；,右手：拿接种环，并用无名指和小指 夹住斜面的棉塞和三角瓶的封口膜；,接种环在火焰上烧红，再深入到斜面， 使环接触培养基，再取菌体；,将菌体放入三角瓶的液体培养基中， 瓶口封口膜和管口棉塞复原；,将三角瓶置于37摇床振荡培养12h。,23,24,（4）划线分离,在酒精灯火焰上灼烧接种环；,将摇床上培养了12h的菌液 打 开，接种环部分深入到菌液中；,在固体培养基的平板上连续划线，接种环只 在菌液中蘸菌液一次，划线后盖好培养皿；,将培养皿倒置（盖在下面），放到恒温培养箱中培养12-24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。,25,划线分离法,划线的起点要有菌，且每一次新的起点应比前一次的起点菌含量（浓度）低 划线的最终点不能与前面的划线点重叠,除第1次外，其余几次划线前，都要将接种环火焰灼烧,26,恒温培养箱,平板倒置,防止培养皿盖上的冷凝水滴落入培养基表面，使菌落中的菌随水扩散，造成污染。,27,划线分离法,28,（5）斜面接种保存,在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上。,37培养24h后，4 冰箱保存。,29,涂布分离法,30,首先，涂布分离法的操作比划线分离法更复杂。因为涂布分离法包括先将菌液稀释的步骤，而且通常要稀释多个浓度，常稀释到10-5-10-7倍。（稀释实验过程见P26图）在涂布时，从不同稀释度的稀释菌液中各取0.1ml放在平板固体培养基上，再用玻璃刮刀涂布后培养。 其次，涂布分离法更易分开单菌落。通常培养皿中有20个以内的单菌落为最