探讨酸枣仁汤对失眠大鼠睡眠时相的影响

1 / 7 探讨酸枣仁汤对失眠大鼠睡眠时相的影响 摘要：目的探讨酸枣仁汤对失眠大鼠睡眠时相的影响。方法在恒温、恒湿、自动光控及电磁屏蔽条件下，给予实验动物不同剂量酸枣仁汤，采用慢性电极埋植技术描记电刺激所致失眠大鼠自由活动情况下的皮层脑电图。分析给予实验动物不同剂量的酸枣仁汤前后失眠大鼠脑电图的变化。结果低剂量酸枣仁汤对失眠大鼠慢波睡眠 期（ SWS1）睡眠时相有显著延长作用（ P0.05），中剂量酸枣仁汤能明显延长失眠大鼠 SWS1 和 SWS2（ P 关键词： 失眠大鼠 脑电图 睡眠时相 酸枣仁汤 酸枣仁汤源 自金匮要略 “ 虚劳虚烦不得眠，酸枣仁汤主之 ” 。长期临床观察结果表明酸枣仁汤或其加减方对各种失眠均有明显的改善作用。近几年来，开展了酸枣仁汤的现代药理实验研究，实验结果表明酸枣仁汤具有显著的镇静催眠作用 1 5。为了进一步验证酸枣仁汤的改善睡眠作用，为临床应用酸枣仁汤治疗失眠提供实验依据，我们观察了酸枣仁汤对电刺激所致失眠大鼠的睡眠时相的影响。 1 器材 1.1 动物 Wistar 大鼠，雄性，体重 215 225 g（黑龙江中医2 / 7 药大学实验动物中心提供，许可证号：黑动字第 P00101006）。 1.2 试剂 戊巴比妥钠（上海化学试剂采购供应站分装厂，批号020402，临用时以蒸馏水配制成 1%溶液）；自凝牙托水（哈尔滨齿科器材厂，批号 04-08-05）；注射用青霉素钠（哈药集团制药总厂， 批号 A05065612）。 1.3 供 试 药 品 酸 枣 仁 Ziziphus jujuba Mill. var.spinosa (Bunge) Huex H.F.Chou) 、茯苓 Poria cocos(Schw.) Wolf、川芎 Ligusticum chuanxiong Hort.、知母 Anemarrhena asphodeloides Bge.、甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.(以上中药材购于哈尔滨宝丰药店 ,均经黑龙江中医药大学生药教研室孙慧峰老师鉴定 )。 1.4 仪器 ND 97 数字化脑电图仪（上海医疗器械高技术公司）；大鼠脑立体定位仪（美国 Stoelting 公司）；有机玻璃笼（自制）。 2 方法 2.1 药液的制备 （酸枣仁汤的制备）按酸枣仁汤配比 :炒酸枣仁 18 g，茯苓 5 g，川芎 10 g，知母 10 g，甘草 5 g，称取 5 味药材共 454 g，加 8 倍量水，浸泡 1 h 后煎煮，沸后 30 min 滤过，药渣加 6 倍量水煎煮，沸后 20 min，滤过，合并滤液 , 浓缩3 / 7 成 0.648 g/ml 的高剂量药液。将高剂量药液分别稀释成0.324 g/ml 的中剂量药液和 0.162 g/ml 的低剂量药液，备用。 2.2 环境控制 实验环境为通风、避光、电磁屏蔽状态，采用自动定时光控系统对大鼠生活环境实行 12 h/d 的明暗光照周期处理，实验温度 (232) ，相对湿度 45% 50%。 2.3 时间每天上午 8： 30 将大鼠脑部电极插座与仪器相连，开机运行 30 min，并于上午 9： 00 正式开始描记实验。在记录皮层脑电时以视频监控系统观察大鼠状态。 2.4 ND 97数字化脑电图仪运行参数在脑电图描记前设置低频滤波截止频率为 0.5 Hz，高频滤波为 35 Hz。通过同时对 10 只大鼠脑电图描记预实验观察，设定仪器增益为200，速度为 2（每屏 20 s）时，各通道脑电信号清晰且未见重叠。 2.5 大鼠睡眠时相区分标准和定量分析指标根据大鼠脑电图，并参考有关文献 6 12，将大鼠觉醒睡眠周期分为觉醒（ Wake）、慢波睡眠 期（ SWS1）、慢波睡眠 期（ SWS2）和快动眼睡眠（ REMS） 4 个时相。规定任何一个独立的睡眠时相持续时间至少在 20s 以上，并以每 20s 作为一个分析单元。 4 / 7 2.6 电极埋置将实验动物置于上述实验环境中适应 7 d 后，采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（ 40 mg/kg）后，脑立体定位仪固定，头部剪毛，消毒后，剪去头部皮肤，充分暴露颅骨，剥离骨膜。分别于颅骨上（ AP 2， R2； AP+2， R2）钻孔，将 2 个直径 1 mm 不锈钢螺丝钉植入颅骨内，使之与硬脑膜接触，但不穿透硬脑膜，作为皮层电极；在额骨正中（ AP+5， R0）钻孔安置接地电极，并将电极螺 丝钉制成微型插座，以牙科水泥固定 13 16。术后将实验动物置于特定的环境中，单笼饲养，连续 3 d 腹腔注射 4 万单位青霉素，恢复 7 d，并于术后第 7 天将附有导线的插头与大鼠头部电极插座相连，进行大鼠对电极插座连接的适应性训练，训练4.5 h。 2.7 大鼠失眠模型的复制术后第 8 天将大鼠置于失眠刺激器内，通过笼底部的电栅刺激大鼠足底部 8 h（刺激参数：电流 0.5 mA，波宽 15 ms，频率 1 Hz，在刺激期间， EEG和 EMG 记录线路可自行中断。电刺激可被两个可调定时器自动启动。这样，每刺激 30 s 间隔 30 min, 以造成大鼠失眠），同时进行皮层脑电的描记，描记时间从 9： 00 17： 00 共计8 h。 2.8 步骤每天 8： 30 经灌胃途径给予失眠大鼠高中低剂量的酸枣仁汤，连续给药 7 d，于末次给药 30 min 后，再对失眠大鼠进行 8 h 的脑电描记和电刺激，分别计算此描记时5 / 7 间段内给药前后高 -中 -低剂量组失眠大鼠 Wake， SWS1， SWS2，REMS内各自的总时间，应用自身配对 t检验法进行统计分析。 3 结果 实验结果见表 1。表 1 不同剂量酸枣仁汤对失眠大鼠睡眠时相的影响（略） 从表 1 可知，电刺激后大鼠的 W， SWS1， SWS2， REMS， TST与电刺激前相比均有显著性差异，表明失眠模型制作成功。3 种不同剂量的酸枣仁汤均可明显减少失眠大鼠的觉醒时间；低剂量酸枣仁汤对失眠大鼠的 SWS1 期有延长作用（ P 2李哲 .酸枣仁汤对小鼠脑组织内啡肽的影响 J .河南中医， 2001， 21(5):21. 3张丽萍，卢建 .酸枣仁汤合甘麦大枣汤治疗更年期失眠症 25 例 J .浙江中西医结合杂志， 2002， 12(6)：362. 4沈鸿，肖红，陈建芳，等 .酸枣仁汤对血虚小鼠的镇静催眠作用 J .中医康复研究， XX， 9(43)： 106 . 5杨晓霞，陈彤伟 .酸枣仁汤改善心肌梗塞患者睡眠和情绪障碍 J .中国临床康复， XX,8(12)： 2370. 6 Claude Gottesmann,The transition from slow-wave sleep to paradoxical sleep:evolving facts 6 / 7 and concepts of the neurophysiological processes underlying the intermediate stage of sleep J .Neuroscience and Biobehavioral Reviews,1996,20(3):367. 7 Pierre Gauthier, Christian Arnaud, Gabriel Gandolfo, et al. Influence of GABA2 receptor antagonist on the sleep-waking cycle in the rat J .Brain Research,1997,773(10)： 8. 8 张杰，王明时 . 睡眠脑电的研究 J .国外医学 生物医学工程分册， 1997,20(2)： 65. 9 M.oshimoto,H.Higuchi,M.Kamata,et al.The effects of benzodiazepine (triazolam), cyclpyrrolone (zopiclone) and imidazopyridine (zolpidem) hypnotics on the frequency of hip-pocampal theta activity and sleep structure in rats J .European Neuropsychopharmacology,1999,9(1)： 29. 10 Koichi Saitou, Yoshio Kaneko,Yukio Sugimoto,et al.Slow wave sleep-inducing effects of first generation H1-antagonists J .Biol. Pharm.Bull,1999,22(6)： 1079. 11 Imeri L,Mancia M,Opp M.R. Blockade of 7 / 7 5-hydroxytryptamine(serotonin)-2 receptors alters interleukin-1-induced changes in rat sleep J .Neuroscience,1999,92(5)： 745. 12 Youssef Slisli,Renaud de Beaurepaire. Interleukin-and calcitonin, but not corticotropinreleasing factor,alter sleep cycles when injected into the rat hypothalamic lateral paraventricular area J . Neuroscience L-etters,1999,265(4)： 29. 13 Depoortere H. Some aspects of the polygraphic studies on sleepwakef-ulness