谈夏至草醇提物对休克大鼠自由基损伤的影响

1 / 5 谈夏至草醇提物对休克大鼠自由基损伤的影响 摘要：目的观察夏至草醇提物对失血性休克大鼠多器官自由基损伤的影响。方法 Wistar 雄性大鼠 18只，随机分为夏至草组、模型组和对照组（均 n=6）。夏至草组和模型组复制失血性休克模型，维持 90 min，对照组仅手术。夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物（ 5 g/ml， 6 g/kgbw ），其它两组以等量生理盐水代替。 40 min 后，制备肝、肾、心肌、肺组织匀浆，观察组织匀浆自由基指标的变化。结果与对照组相比，模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆 MDA含量显著升高， SOD 活 性降低；夏至草组各器官组织匀浆 MDA 含量显著低于模型组， SOD 活性升高，除心肌组织匀浆 SOD 活性低于对照组外，其它各指标与对照组均无统计学意义。结论夏至草醇提物能明显减轻大鼠重症失血性休克后各器官的自由基损伤。 关键词： 夏至草 失血性休克 器官 自由基 淋巴循环是循环系统的重要组成部分，近年来，淋巴循环维持机体稳态和疾病中的作用逐渐受到重视 1。失血性休克（ hemorrhagic shock）致组织微循环低灌注是引起肺、心、肾、肝等多个器官的功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征（ multiple organ dysfunction syndrome, MODS）2 / 5 的主要因素之一。我室研究表明，淋巴微循环与休克的发生、发展及转归关系密切 2，良好的淋巴微循环有利于休克的代偿，淋巴微循环障碍可促进休克的恶化 3。夏至草具有利水消肿、活血化淤作用 4，夏至草醇提物可明显改善大鼠的淋巴微循环障碍 5。本研究观察了夏至草醇提物对失血性休克大鼠多器官自由基损伤的影响，旨在阐明夏至草对失血性休克以及淋巴微循环的药理学作用。 1 材料与仪器 1.1 动物与分组 18 只健康清洁级 Wistar 雄 性大鼠（中国医科院实验动物繁育中心提供），体质量 220 300 g。随机均分为 3 组（均 n=6）：对照组（仅行手术）、模型组（复制失血性休克模型，输血加生理盐水进行治疗）、夏至草组（复制失血性休克模型，输血加夏至草醇提物进行治疗， MI）。实验前大鼠禁食 12 h，自由饮水。 1.2 药品与仪器 唇形科夏至草属植物夏至草 Mrrubium incisum Benth 的全草（内蒙古驻张家口医药站提供，经河北北方学院中医系姜希强教授鉴定），按文献 6报道方法，制备夏至草醇提物，经水煎醇沉，再经活性炭脱 色、灭菌制成原生药含量为 5 gml -1 的注射液（ pH、澄清度、溶血实验检测均为合格）；戊巴比妥钠（北京化学试剂厂生产，批号3 / 5 20000919）；肝素钠（北京奥博星生物技术责任有限公司生产，批号 001218）， FJ-200 型高速分散均质机（上海标本模具厂），自动抽注机（浙江大学医学仪器厂）。 2 方法 2.1 失血性休克模型的复制及液体复苏所有大鼠肌注质量分数 2的戊巴比妥钠（ 50 mg/kg）全身麻醉，无菌手术，行右侧颈总动脉和左侧颈静脉插管，备放血及输液用。舌静脉注射质量分数 0.5%肝素（ 1 ml/kg， 700 U/ml），全身抗凝。稳定 10 min 后，经自动抽注机自颈总动脉缓慢放血（失血量以全血量的 1/5 计，全血量以体重 1/13计）， 3 min完成，保留备回输用。以无菌林格式液瓶作为 Lamson 瓶，连接无菌输液器，将液面调整至固定高度，维持低血压（ 40 mmHg） 90 min，复制大鼠重症失血性休克模型 7。然后，模型组、夏至草组以自动推注机自左侧颈静脉缓慢回输放出之血液；输血完毕后，夏至草组输入 6 gkg -1剂量（ 生药）的夏至草醇提物（输前用生理盐水等倍稀释），模型组输入等量的生理盐水。对照组仅麻醉及颈部手术，不放血及输液复苏。 2.2 组织匀浆标本的制备行液体复苏后（或相当） 3 h，分别处死动物。选择固定的肝、肾、心、肺组织各 0.8 1.0 g，加 9 倍的 4 无菌生理盐水，应用 FJ-200 型高速分散均4 / 5 质机低温制备 10%组织匀浆，应用高速低温离心机以 2 500 r/min离心 10 min（离心半径 8 cm），取上清液置于 -26 冰箱内。 2.3 组织匀浆 MDA,SOD 测定应用改良硫代巴比妥酸（ TBA）微量法 测定各脏器组织匀浆 MDA 含量、黄嘌呤氧化酶法测定 SOD活性（试剂盒购自南京建成生物工程研究所），严格按照试剂盒说明书要求进行操作。组织匀浆蛋白以考马斯亮蓝法进行定量。 2.4 统计学处理所有数据以 s 表示，经 SPSS 11.0统计软件包进行单因素方差分析，两组间比较用两样本均数t 检验， P0.05）。见表 1。 3.2 夏至草醇提物对失血性休克大鼠各器官组织匀浆 SOD活性的影响模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆 SOD 活性均显著低于对照组（ P0.05），且各器官组织匀浆 SOD活性高于模型组（ P 2张 静 ,姜 华 ,薄爱华 .失血性休克时淋巴微循环的变化 J .中华医学杂志 , 1991, 71(1): 24. 3牛春雨 ,张 静 ,穆 铮 ,等 .不同转归的过敏性休克大鼠淋巴微循环的变化 J .中国病理生理杂志 , 1997,13 (6): 620. 4李佳 , 陈玉婷 . 夏至草文献考证 J .中华医史杂志 , 2001,31(2):113. 5牛春雨 ,李继承 ,刘艳凯 ,等 . 夏至草醇提物对大5 / 5 鼠淋巴循环作用的实验研究 J .中国药学杂志 , XX, 41(12): 914. 6顾学裘 . 药物制剂注解 M .北京 :人民卫生出版社 ,1988:238. 7牛春雨 ,李继承 ,赵自刚 ,等 . 肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠肺组织一氧化氮及其表达的影响 J .中国危重病急救医学 , XX, 18(9): 527. 8王万铁 ,林丽娜 ,王 卫 ,等 . 异丙酚对家兔肝缺血 /再灌注后抗氧化能力改变的影响 J .中国应用生理学杂志 , XX, 21(1): 26. 9 Schauer RJ, Gerbes AL, Vonier D, et al. Glutathione protects the rat liver against reperfusion injury after prolonged warm ischemia J .Ann Surg, XX, 239(2)