动物血液样品采集制备与保存的方法.doc

动物血液样品采集制备与保存的方法 陈静陈德明徐玉玲/四川省兴文县动物疫病预防控制中心 随着国际国内动物疫病形式复杂多变，我国养殖业集约化程度不断提升，广大基层畜牧兽医工作者做好辖区内动物疫病监测对保障畜牧业健康发展具有十分重要的意义。其中最关键的环节是样品采集，样品质量的好坏直接决定监测结果的准确与否，而在基层采集数量最多的则是各种家畜家禽的血液样品。本文对几种常见畜禽血液样品的采集、制备及保存的方法作了阐述,供同仁参考。 一、常见畜禽血液样品的采集 （一）家禽的采血方法 1.心脏采血。对于雏鸡，采血者可独立完成，仰卧保定，左手抓鸡，右手持采血针，平行颈椎从胸腔前口插入，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。成年禽的心脏采血可采用侧卧法和仰卧法。侧卧法：助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，采血者在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒，垂直进针23cm，回抽见有回血时，针芯外拉收集血液。仰卧法：助手仰卧保定禽，采血者用手指压离嗉囊，露出胸前口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁骨俯角（既胸骨前端与两侧锁骨融合形成“V”字的地方）刺入，顺着体中线方向水平穿行，刺入心脏抽取血液。如刺入心脏，采血者可感到心脏跳动，稍回抽针芯可见回血，否则，应将针头稍拔出调整角度再刺入直至抽出血液。生产实践中，由于家禽品种和个体大小不同进针位置和深度也会有细微的不同，操作时需作适当调整。 心脏采血可大量采血，但容易造成死亡，不宜连续使用。特别是对雏禽，常因针头刺破心脏或伤及肺脏导致出血过多而死亡，而且心脏的修复能力特别差，对畜禽后期生长发育影响较大。为此，采血时，我们要找准采样部位，跟着心脏的跳动频率缓慢抽取血液，切忌抽血过快。 2.禽翅静脉采血。翅静脉采血法是家禽采血方法中最常用的一种。助手侧卧保定禽只，使翅膀展开，露出腋窝部。拔掉该处羽毛，可见由翼根进入腋窝的翼根静脉，其远心端则是较细的翼下静脉。采血者左手拇指压迫血管近心端，待血管怒张后，用装有细针头的注射器，由翼根向翅方向平行刺入静脉，即可缓慢抽取血液。选择的采血部位可是翼根静脉，也可是翅中部较直的一段翅下静脉。 由于禽类翼下表皮很薄，血管较细，采血时要保证禽只和手持采血针的稳定性，进针不宜过深，针头的切口面应向上，先刺入皮下再刺入血管。如刺破血管，皮下很快血肿，则采血失败。抽血速度要慢，因为静脉血管回血流速较慢，过快容易导致血管内压突然降低造成血管壁塌陷而阻塞针头，影响采血量。如需反复采血，应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉的采血。除此以外，家禽血液样品采集的方法还有鸡冠采血法、颈静脉采血法、跖骨内侧静脉采血法等。 (二)猪的采血方法 1.耳缘静脉采血。适用40kg以上的中大猪或种猪，采集少量的血液。动物站立或横卧保定，助手用力在耳根捏压静脉近心端，或用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张。采血者左手拉平耳朵并使采血部位稍高，右手持注射器或采血针，针头与猪耳水平面呈1015度角进针，如见回血再将针头顺血管向内送入1cm，松开捏压，缓慢抽取血液或接入真空采血管。黑色皮肤猪的耳静脉不易看清，可用手电筒照射耳腹面。此法也可用于采集家兔的血液。 2.前腔静脉采血。公母猪和中大猪，站立保定，助手让猪前肢刚好站立在地面上，使猪的头颈与水平面呈30度角，露出右腋窝。采血针对准颈部最低凹陷处，用针垂直刺入，回抽针管内芯，若针头扎中前腔静脉，可见血液流出。如果抽不到血液，说明针头没有扎中，可上下轻微移动针头，直到针管中见到血液为止。20kg以下的小猪，采血部位选择猪两前肢与气管交汇处（即两侧第一对肋骨与胸骨结合处的前侧方呈两个明显的凹窝）。助手仰卧保定猪，把前肢向后方拉直。采血者使用装有长针头的注射器采血，针刺方向为向后内方与地面呈60度角刺入23cm，当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血液进入针管内。 需要注意的是，猪前腔静脉的粗细及位置的深浅与猪的体重大小、肥瘦程度有关，此血管越往头部越浅，但也越细；越靠胸部越粗，但也越深，所以，采血应选择适当的部位，一般小猪应稍靠后，中大猪和种母猪，应略靠前。同时，我们还应选用合适的针头，建议100kg以上的大猪，选择14#38mm针头，40kg100kg的育肥猪，选择12#30mm针头，1040kg小猪，选择12#25mm针头；10kg以下乳猪，选择9#20mm针头。总之，猪前腔静脉采血进针的部位、深度、角度因猪只的不同而有细微差异，初学者需要通过不断的实践才能熟练掌握采血技巧。 (三)牛、羊的采血方法 1.颈静脉采血。将动物站立保定，使其头部稍前伸并稍微偏向对侧，采血者站于颈侧，在颈静脉沟上1/3与中1/3交界处剪毛消毒，左手拇指（或食指与中指）压迫采血部位下方颈静脉血管，使其充盈怒张。右手持采血针头，沿静静脉沟与皮肤呈45度角，由下向上方刺入，血液顺器壁流入容器内，防止气泡产生。结合实践经验，牛的皮肤较厚，采血刺入时应用手腕的弹拨力瞬间刺入；采血时一定要等血管充分怒张后才进针，且采血期间按压的手指不宜放松，否则，针头易滑落。 2.牛尾静脉采血。将牛引其自锁颈枷内，借以保定，采血者左手抬起牛尾往上翘与水平面呈45度角。右手在离尾根10cm左右，第4、5尾椎骨交界中点凹陷处消毒，将采血针针头垂直刺人约0.51cm深。如针头触及尾骨则需略微退点再进行抽血。此法与牛颈静脉采血相比，有易操作，用工少，应激小等优点，可普遍推广。 二、血液样品的制备与保存 （一）抗凝血的制备 抗凝血常用作细菌学或病毒学的样品检验。采血前，应预先在真空采血管或其他容器内按比例加抗凝剂湿润内壁，并放置在4560干燥箱中烘干备用。常用的抗凝剂有0.1肝素或3.8%柠檬酸钠，血液每10ml需要抗凝剂的量为1ml。 也可直接购买抗凝试管。血液注入容器后，立即轻轻摇动试管，使血液和抗凝剂混匀。这样的抗凝血即为全血。抗凝血如经过静置或20003000rpm离心10min（血样采集后半小时之内进行）使血细胞下沉，其上清液则为血浆。 (二)非抗凝血的制备 即不加抗凝剂采血，等血液凝固后析出的血清常用来作血清学试验检测。血清的制备，首先是将血液室温（2025）倾斜4560度角放置23h，血清将自然析出；或将血液室温倾斜静置半小时以上，20003000rpm低速离心10min；也可将凝固的血液倾斜放置4冰箱约1h，然后30004000rpm离心35min。如果是用一次性注射器采血分离血清，应针芯后拉抽入少量空气，便于凝血。 （三）样品制备的注意事项 为了避免溶血，血液存放的容器（如试管）必须清洁无菌；血清未离前，血样应避免震荡，血液凝固后方可转移至冷藏箱，送往实验室。同时，还应注意消毒采血部位后，要等酒精干后才能采血。偶尔也会遇到采集的血液离心后呈胶冻状，这是血液中的纤维蛋白原不能完全参与凝血，血清变为胶冻状的纤维蛋白凝块。造成的原因可能是采血时动物刚进食不久，饮水过少，或者脂肪堆积过多，以及血液静置时间不够，血液纤维蛋白收缩不完全就离心。要避免此种现象，建议空腹采血，采血后静置时间充足。确实出现这种情况时，也可用灭菌的针头或用枪头将胶冻物挑出，再离心或静止也能提取出少量血清。 （四）血液样品的保存 采集的血样经分装密封后做好标记，立即4冷藏送往实验室。而不同温度下血液样品保存时间长短则不同，所以我们应根据试验时间的安排，选择恰当的保存条件。病毒检测样品：20以下保存。细菌检测