晚期非小细胞肺癌靶向治疗中循环DNA检测EGFR基因突变应用价值.doc

晚期非小细胞肺癌靶向治疗中循环DNA检测EGFR基因突变应用价值 陈祥娜 福建医科大学附属第一医院病理科，福建福州350003 摘要目的结合该院在非小细胞癌（NSCLC）靶向治疗中，循环DNA检测EGFR基因突变的相关情况，对其临床价值进行评估。方法从该院中选取接受EGDRTIKs治疗的54例患者，分别对其进行血清采集和组织采集，并制作成标本，对DNA进行提取检测。结果女性出现基因变异的情况高于男性，差异有统计学意义（P0.05）；血清样本测定EGDR基因突变，特异性为97.30%；灵敏度为41.18%；所有患者的客观缓解率为27.78%，疾病控制率为48.15%；EGFRTKIs对晚期患者的客观缓解率为50.00%，对野生型的患者则只有16.67%。结论在EGDR基因突变的测定中，血清循环DNA具有一定的价值，且可有效优化晚期肺癌靶向治疗患者的临床效果。 关键词nsclc；循环dna；egdr基因突变 R73A1674-074（4）11（b）053-02 靶向治疗的出现极大的改善了晚期非小细胞肺癌患者的预后。肺癌组织的EGFR基因突变可以有效预测靶向药物EGFR-TKI的临床疗效。目前临床上多采用手术或穿刺标本来检测EGFR基因突变。但这种有创操作在一定程度上限制了EGFR基因突变的检测。研究发现肺癌患者循环血中游离DNA含量显著高于正常人，并与原发肿瘤组织具有高度的遗传一致性1-2。鉴于此，该院xx年1月xx年6月期间在NSCLC靶向治疗中，运用血清循环DNA检测EGFR基因突变，对其临床价值进行评估。现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 从该院xx年1月xx年6月所接诊的NSCLC患者中，选取54例采用小分子表皮生长因子受体细胞内酪氨酸激酶抑制剂（EGDRTIKs）治疗的患者；其中女性23例，男性31例，患者平均年龄为（65.411.24）岁；其中19例为非腺癌，35例为腺癌；患者中26例为b期，28例为期；在进行采样时，24例为曾经或者正在接受EGDRTIKs治疗，30例为首次接受EGDRTIKs临床治疗。在获得患者同意之后，对其进行血清样本的采集，并同时进行石蜡组织标本的制作，所有患者均满足以下几点：患者年龄在20岁或以上；经细胞学或者病理学证实，患者为b期或期，其中包括了初次治疗后复发或者未接受过化疗治疗的患者；经ECOG功能状态评分，测评结果为02分，具有能够测量的病灶；具有较高的依从性，并且能够及时到院或者电话接受随访；无重要脏器功能障碍。 1.2方法 1.2.1样本采集血清样本采集：提前一日叮嘱患者清晨空腹接受静脉血采集，每例患者采集5mL，于黄色促凝管内室温放置4h后，离心分离血清，-80下保存待用；石蜡组织样本采集：选取肺穿标本或者手术标本肿瘤部分，切取10张6m的蜡片，置于Eppendorf管内编号保存备用。 1.2.2DNA的提取血清样本DNA的提取：该研究选取Qiagen公司试剂盒QIAampDNABloodMiniKit，并按照说明书进行血清循环DNA的提取；石蜡组织样本DNA的提取：本研究选取QIAampDNAFFPETissueKit，并按照说明书进行血清循环DNA的提取。 1.2.3EGFR突变检测该研究使用ARMS（amplifiedrefractorymutationsystem）法进行EGFR突变检测。 1.3EGFRTIKs的治疗方法 为患者提供EGFRTIKs口服治疗，每日服用尼洛替尼150mg，在进食前1h或者进食后2h服用；或者在空腹状态下，与食物共同服用的情况下，服用250mg吉非替尼。直到患者出现不可耐受的药物毒副作用或者肿瘤疾病进展；在治疗前1周对患者的身体状态进行全面评估。 2结果 2.1血清及组织标本中 EGFR基因突变型患者的临床分布特征女性出现基因变异的情况高于男性，差异有统计学意义（P0.05）。见表1。 2.2血清EGFR基因突变检测的真实性和可靠性评价 通过血清样本测定EGFR基因突变，其特异性达到了97.30%；灵敏度则达到了41.18%。见表2。 2.3EGFR基因突变与EGFRTKIs疗效关系 所有患者的客观缓解率为27.78%，疾病控制率为48.15%；其中EGFRTKIs对晚期患者的客观缓解率为50.00%，而对野生型的患者则只有16.67%。见表3。 3讨论 人类表皮生长因子受体（EGFR）是一种受体酪氨酸激酶，正常情况表达于上皮细胞表面，而在一些恶性肿瘤中常过度表达。EGFR基因突变包括基因扩增和点突变，主要集中在18、19、20、21号外显子上，第19外显子的缺失和第21外显子的L858R点突变，占到89%95.5%，与肿瘤对TKIs的敏感度有重要关系。60%85%的NSCLC细胞存在EGFR过度表达/突变，这部分患者接受肿瘤分子靶向治疗（EGFR抑制剂）的临床疗效优于常规化疗。临床研究表明，肺癌细胞中有EGFR酪氨酸激酶基因编码区外显子19缺失或外显子21突变的患者，靶向药物易瑞沙的有效率高达80以上3。该研究中主要针对19和21外显子的突变型检测，其中19外显子突变为55.56%(10/18)，21外显子突变为44.44%(8/18)；所检测出的基因突变型(19DelK746-A750、19DelK745-E749、19DelK745-A750；21L858R、21L861Q)与当前研究显示的已检测出的基因突变类型及突变率相符。 一些临床实验结果进一步证实，通过筛查EGFR基因突变对肺癌初治患者进行吉非替尼治疗，中位无进展生存时间达到12个月，中位生存时间达到20个月4。因而针对EGFR突变进行选择性靶向治疗，患者可以显著获益5。 xx年5月，美国病理学家协会(CAP)、国际肺癌研究协会(IASLC)和美国分子病理学会(AMP)三大权威机构发布了一项基于循证医学证据的肺癌分子检测指南，建议所有晚期肺腺癌患者不论性别、种族、是否吸烟或伴有其他临床危险因素，均应接受EGFR突变和ALK融合基因检测，以判断是否适于接受酪氨酸激酶抑制剂治疗6。但是对于晚期肺癌患者，其肿瘤组织标本往往难以获得，或不能取得足够适合检测的标本。这就需要一种能方便取得EGFR突变信息的检测方法7-8。 在该次研究中，对血清循环DNA与肿瘤组织DNA的突变检测结果进行对比，结果表明，血清游离DNA检测到的突变类型与组织检测到的类型无差异，依据血清EGFR检测结果进行选择性靶向治疗，可以使患者显著受益。由于血液采集方便，患者易于接受，血清EGFR检测技术可以作为肿瘤组织EGFR检测的补充与替代，值得临床推广应用。但是，由于检测还具有一定的局限性，故表现出相应的假阴性率，故在实际应用中，还需要与其他检测手段同时使用。 参考文献 1RMBremnes,RSirera,CCamps.Circulatingtumour-derivedDNAandRNAmarkersinblood:atoolforearlydetection,diagnostics,andfollow-upJ.LungCancer,xx,49(1):1-12. 2CiuleanuT,StelmakhL,CicenasS,etal.Efficacyandsafetyoferlotinibversuschemotherapyinsecond-linetreatmentofpatientswithadvanced,non-small-celllungcancerwithpoorprognosis(TITAN):arandomisedmulticentre,open-label,phase3studyJ.LancetOncol,xx,13(3):300-308. 3车德海,田强,曹京燕,等.DNA直接测序技术检测EGFR基因突变指导厄洛替尼一线治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察J.现代肿瘤医学,xx,19(10):xx-xx. 4黄进肃，董强刚，许凯黎，等.血清循环DNA的EGFR基因突变于肺癌选择性靶向治疗研究J.肿瘤，xx,27（12）：968-972. 5BrevetM,JohnsonML,AzzoliCG,etal.DetectionofEGFRmutationsinplasmaDNAfromlungcancerpatientsbymassspectrometrygenotypingispredictiveoftumorEGFRstatusandresponsetoEGFRinhibitorsJ.LungCancer,xx,73(1):96-102. 6刘宏杰,叶斌,程静，等.肺癌