肿瘤坏死因子琢在超重者脂肪组织中的表达.doc

肿瘤坏死因子琢在超重者脂肪组织中的表达 何衡杰郝丽 安徽医科大学第二附属医院肾内科，安徽合肥230601 摘要目的探讨安徽汉族超重者与正常体重者脂肪组织中TNF-基因的差异表达,分析TNF-基因的表达与年龄（AGE）、体重指数(BMI)、腰围尺寸(WC)、腰臀比例(WHR)的相关性。方法以肌动蛋白（-actin）基因作为内参照，用半定量RT-PCR方法检测网膜脂肪组织与皮下脂肪组织的TNF-基因在24例正常体重者（BMI在18.524kg/m2之间）和19例超重者(BMI在2428kg/m2之间)中的不同表达水平，并通过测量实验者的一系列指标，有体重、身高、臀围、腰围等，在此基础上计算出腰臀比例和体重指数，分析比较这些参数与TNF-基因表达的相关性。结果腹部皮下与网膜脂肪组织中的TNF-基因表达水平在超重组与正常体重组间差异均无显著性；超重组组内与正常体重组组内的皮下及网膜脂肪的TNF-基因表达差异亦无显著性；WHR、WC与皮下及网膜的TNF-基因表达相关性为正向。结论皮下及网膜脂肪组织TNF-基因表达在超重组中无明显增强,但与WHR、WC呈正相关。 关键词肿瘤坏死因子;脂肪组织;超重 R725A1672-5654（xx）08（b）-0013-03 Expressionoftumornecrosisfactoralphainsubcutaneousandomentaladiposetissuesofoverweightperson HEHengjie,HAOLi DeptofEndocrinology,The2stAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230601,China AbstractObjectiveToinvestigatetheexpressionoftumornecrosisfactoralphainadiposetissuesofAnhuiHannationalitybetweenover-weightandcontrolgroup,andtherelationshipwithAGE,BMI,WC,WHR.MethodsTheTNF-expressionlevelwasmeasuredbysemi-quantitativeRT-PCRinabdominalsubcutaneousandomentaladiposetissuesof24normalcontrols(BMI:18.524kg/m2)and19over-weights(BMI:2428kg/m2).Anthropometricdata,suchasheight,bodyweight,waistcircumference,hipcircumference;andwaisttocalculatewaist-hipratio(WHR)andbodymassindex(BMI).Insulinresistanceindexwerecalculated.ComparetheseparameterswithTNF-geneexpressionbycorrelationanalysis.ResultsThelevelofTNF-geneexpressionhavenosignificantdifferencebetweenoverweightandcontrolgroup,respectively;Therewerenodifferencesbetweensubcutaneousandomentaladiposetissuesfromeachsubject.WHRandWCwerefoundtohavesignificantpositivecorrelationwiththeexpressionofTNF-geneinsubcutaneousandomentaladiposetissues.ConclusionThegeneexpressionlevelsofTNF-waspositivelycorrelatedwithWHRandWC,buthavenoobviouslyincreasingintheover-weightgroupwhenparedwiththecontrolgroup. KeywordsTumorNecrosisFactorAlpha;AdiposeTissue;Overweight 近年来许多研究证实了肿瘤坏死因子与胰岛素抵抗有关，且肥胖者脂肪分泌的肿瘤坏死因子可能是正常者的数倍。但对于为数众多的超重者，相关文献相对较少。本实验旨在观察是否超重者脂肪组织也存在TNF-基因表达增强，正常及超重者腹部皮下脂肪组织及网膜脂肪组织的TNF-基因表达有无差异。 1对象与方法 11研究对象 均为在安徽医科大学第二附属医院普外科做手术的安徽汉族人，排除了感染、肝脏疾病及其他内分泌代谢疾病等。实验的分类标准为中国成人超重与肥胖症预防与控制指南，xx年该指南由中国肥胖问题工作组编写，超重组19人，BMI在2428kg/m2之间，年龄为2275岁，平均年龄48.9岁;正常组24人,BMI在18.524kg/m2之间,年龄为3370岁，平均年龄为51.2岁；二组年龄及性别基本匹配。 12方法 121手术时取腹部皮下、网膜脂肪组织，取样后用液氮迅速冷冻并低温保存。按QIAGEN公司提供RNeasyMiniKit试剂盒说明书要求提取脂肪组织总RNA。紫外分光光度仪测定及琼脂糖电泳判断RNA质量。根据基因特异性cDNA序列，通过软件primer5.0设计特异性扩增引物，扩增TNF-基因的特异性引物，上游序列为：5-GTGACAAGCCTGTAGCCCAT-3，下游序列为：5-TAGATGGGCTCATACCAGGG-3，扩增片段长度331bp；扩增-actin基因的引物，上游序列为：5-GCTATCCAGGCTGTGCTATC-3，下游序列为：5-CAGCACTGTGTTGGCGTACA-3，扩增片段长度495bp。RT-PCR：总RNA2uL，5倍逆转录反应缓冲液4uL,Oligo(dT)182.5uL,RNA酶抑制剂0.5uL,逆转录酶AMV2uL,dNTP8uL,加DEPC处理水至20uL,28放置10min，42温育2h，995min灭活逆转录酶。PCR反应体系中包括：模板10uL，10倍PCR反应缓冲液5uL，4种混合单核苷酸4uL，肿瘤坏死因子上下游引物及-actin上下游引物各1.0uL,Taq酶0.7uL,加DEPC处理水至反应总体积50uL。第一步：94预变性1min；第二步：30个循环即94变性32s，59.9退火40s，72延伸1min；第三步：72再延伸4min1。1.2%的琼脂糖凝胶电泳反应产物，通过凝胶成像分析系统来测定每个单独条带的亮度，并在此基础上计算出条带的光密度比值（TNF-/-actin），见图1。 01234 0:分子量标准DL2,000;1-4:腹部皮下及网膜脂肪组织中TNF-和-actin基因PCR产物。 122测身高、体重，腰围（腰围测量是以腋中线肋下缘与髂骨上缘间中点水平周长）、臀围（臀围为以耻骨联合水平测量臀部的最大周长），并在以上的基础上计算腰臀比例和体重指数。 13统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，组间比较采用t检验，相关因素采用线性相关分析。 2结果 21各组光密度比值之间的两两比较 TNF-基因在超重组的皮下脂肪组织表达变化较正常组略有增强，但差异无显著性(P0.05)；TNF-基因在网膜脂肪组织的表达变化比正常组也略有增强，差异无显著性(P0.05)；所以说，在超重组和正常组中，皮下与网膜的基因TNF-表达变化的差异没有统计学意义(P0.05)。 22TNF-基因在皮下与网膜的表达与各指标的双变量相关性分析 皮下的TNF-基因表达与WC（=0.420,P0.05）、WHR（=0.416,P0.05）成正相关;网膜的TNF-基因表达与WC（=0.360,P0.05）、WHR(=0.368,P30kgm2为超重组，BMI25kgm2为正常组，对两组对比发现，超重组的皮下和细胞中TNF-a基因会过度表达，约为对照组中TNF-a基因表达的2.5倍5，Bullo等对96例妇女的研究表明，TNF-基因表达与脂肪容量成比例关系6；但也有不同的结果，前人对39位体重指数各异的人为研究对象，结论是BMI与脂肪组织中TNF-基因表达变化呈现出正相关只限于体重指数介于2745kg/m2者，高度肥胖者则不在此列7；得出相反的结论是Koistinen和李晓男等的研究，显示消瘦和肥胖者皮下脂肪组织的TNF-基因基因表达基本无差异8-9，本实验通过对19例超重者和24例对照者的研究显示超重组皮下脂肪组织TNF-基因表达比正常体重组略有增强，没有统计学意义，与前人结果相符。但是还存在不同的研究结果，Montague等通过试验发现人体腹部的皮下和网膜的TNF-基因表达是一致的10；本实验中网膜的TNF-基因表达较正常组也略有增强，但同样无显著性差异；超重组与正常组的皮下与网膜之间的TNF-基因表达比较发现，P值均大于0.05，差异不显著，与Montague等的结果相符。两组合并后相关分析显示WC、WHR与在皮下及网膜中表达基因TNF-的变化相关性为正向的，与BMI、AGE与此基因无相关性。提示两种脂肪组织TNF-基因表达随中心性肥胖体型的趋势而上升，并且和体重指数具有密切的关系。 本实验通过对超重者19例和对照者24例的比较研究显示：超重组皮下及网膜脂肪组织的TNF-基因表达无明显增强，无论是超重组还是正常组，皮下与网膜之间的TNF-基因表达比较，不存在统计学意义。 参考文献 1胡国平，刘铃，王佑民,等.肥胖症患者皮下和网膜脂肪组织中PPAR2的表达与血浆瘦素、肿瘤坏死因子和游离脂肪酸的关系J.安徽医学，xx（4）:257-260. 2孙晖.生活方式干预对胰岛素抵抗大鼠脂肪组织肿瘤坏死因子及其受体表达的影响D.华中科技大学硕士学位论文，xx. 3曹艳丽.脂肪组织中肿瘤坏死因子-与血浆纤溶酶原激活抑制物-1相关性的研究D.安徽医科大学硕士学位论文，xx. 4郑娜.4-羟基异亮氨酸抑制TNF-表达改善胰岛素抵抗D.华中科技大学硕士学位论文，xx. 5RupertOberauer,WolfgangRist,MartinC.Lenter，etal.EGFL6isincreasinglyexpressedinhumanobesityandpromotesproliferationofadiposetissue-derivedstromalvascularcellsJ.MolecularandCellularBiochemistry,xx（343）:257-269 6BulloM，Garcia-LordaP，Peinado-OnsarbeJ，etal.TNFalphaexpressionofsubcutaneousadiposetissueinobeseandmorbidobesefemales:relationshiptoadipocyteLPLactivityandleptinsynthesisJ.IntJObesRelatMetabDisord，xx,26(5):625-628. 7何衡杰.肿瘤坏死因子在超重者脂肪组织中的表达D.安徽医科大学硕士学位论文，xx. 8KoistinenHA,BastardJP,DusserreE，etal.Subcutaneousadiposetissueexpressionoftumournecrosisfactor-alphaisnotassociatedwithwhoinsulinresistanceinobesenondiabeticorintype-2diabeticsubjectsJ.EurJClinInvest，2000，30(4):302-310. 9李晓南，陈荣华，TommyOlsson，etal.人类皮下和网膜脂肪组织脂肪细胞因子的表达J