GB18133-2000马铃薯脱毒种薯.pdf

G B 1 8 1 3 3 -2 0 0 0前言 随着我国经济、 国际贸易和技术合作的发展， 需要尽快提高我国马铃薯种落的质量， 并使之能与国际标准接轨， 有必要制定我国的马铃挤脱毒种薯质量标准。 本标准中附录A, 附录B 、 附录C 、 附录D和附录E都是标准的附录。 本标准由中 华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位: 黑龙江省农业科学院马铃薯研究所、 农业部谷物及制品质t监份检验测试中心( 哈尔滨) 、 黑龙江省农业科学院生物技术研究中心。 本标准主要起草人: 崔荣昌、 李芝芳、 吴国林、 王乐凯、 雷勃钧、 赫世涛。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载中 华 人 民共和 国 国 家 标 准马 铃 薯 脱 毒 种 薯G s 1 8 1 3 3 一 2 0 0 0C e r t i f i e d s e e d p o t a t o e s1 范围本标准规定了马铃薯脱毒苗和各级马铃薯脱毒种薯的质量指标及检验方法。本标准适用于马铃薯脱毒苗及脱毒种薯生产、 销售过程中的质量鉴定。2 定义 本标准使用下列定义。2 . 1 脱毒苗 应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗， 经检测确认不带马铃薯X病毒( P V X ) 、 马铃薯Y病毒( P V Y) 、 马铃薯S 病毒( P V S ) 、 马铃薯卷叶病毒( P L R V) 等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒( P S T V d ) ， 才确认是脱毒苗。2 . 2 脱毒种薯 从繁殖脱毒苗开始， 经逐代繁殖增加种薯数量的种薯生产体系生产出来的。 脱毒种薯分为基础种薯和合格种薯两类。 基础种薯是指用于生产合格种薯的原原种和原种; 合格种薯是指用于生产商品薯的种薯。2 . 2 . 1 基础种薯: 分为三级。22 . 1 . 1 原原种p r e - e l i t e 用脱毒苗在容器内生产的微形薯( Mi c r o t u b e r ) 和在防虫网、 温室条件下生产的符合质量标准的种薯或小薯( M i n i t u b e r ) .2 . 2 . 1 . 2 一级原种 e l i t e I 用原原种作种薯， 在良 好隔离条件下生产出的符合质量标准的种薯。2 . 2 . 1 . 3 二级原种e l i t e， 一级原种作种薯， 在良 好隔离条件下生产出的符合质量标准的种薯。2 . 2 . 2 合格种薯: 分为二级。22 . 2 . 1 一级种薯 c e r t i f i e d g r a d e I 用二级原种作种薯， 在隔离条件下生产出的符合质量标准的种薯。2 . 2 - 2 . 2 二级种薯 c e r t i f i e d g r a d e I 用一级种薯作种薯， 在隔离条件下生产出的符合质量标准的种薯。2 . 3 病毒病株允许率 脱毒种薯繁殖田中病毒病株的允许比率。2 . 4 细菌病株允许率 脱毒种薯繁殖田中细菌病株的允许比率。2 . 5 混杂植株允许率 脱毒种薯繁殖田中混杂的其他马铃薯品种植株的比率。国家质f技术监仔局2 0 0 0 一 0 6 一 1 3 批准2 0 0 0 一 1 0 一 0 1 实施免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 8 1 3 3 -2 0 0 02 . 6 有缺陷薯 畸形、 次生1 龟裂、 虫害、 冻伤、 黑心和机械损伤的薯块。3 控制和汰除的病容3 门控制的病害3 . 1 . 1 马铃薯病毒病: 脱毒种薯繁殖田中， 具有花叶、 卷叶、 条斑坏死等病毒病症状的植株。3 . 1 . 2 马铃薯黑胫病 E r w i n i a v a r . a t r o s e p t i c a ( V a n H a l l ) D y e . 或E r w i n i a v a r . c a r o t o v o r a ( J o n e sD y e . ) .3 . 1 . 3 马铃薯青枯病( P s e u d o m o n u s s o l a n a c e a r u m E . F . S m i t h ) ,3 . 2 汰除的病害3 . 2 . 1 马铃薯纺锤块茎类病毒( P o t a o S p i n d l e T u b e r V i r o i d . P S T V d ) ,3 . 2 . 2 马铃薯环腐病 C o r y n e b a c t e r i u m S e p e d o n i c u m ( S i e c k & K o t t . ) S k a p t & B u r k h ,3 . 2 . 3 马铃薯癌肿病 S y n c h y t r i u m e n d o b a i t i c u m ( S c h i l b) P e r c . ,4 质f要求4 . 1 各级别脱毒种薯田的植株带病指标应符合表1 要求。 表 1 各级别种薯带病植株的允许率种若级别第一次检验第二次检脸第三次检验病害及混杂株， 肠病害及混杂株， %病害及混杂味， %类病毒植 株环腐病植 株病毒病植 株黑胫病和育枯病植 株混杂植株类病毒植 株环腐病植 株病毒病植 株黑胫病和青枯病植 株棍杂植株类病毒植 株环腐病植 株病毒病植 株黑胫病和青枯病植 株混杂植株原原种000000000000000一级原种000 . 2 50 . 5F.2 500O . 1 o . 2 5000蕊0 . 1毛0 . 2 50二级原种00G O . 2 50 . 5阵 。 二000 - 1k 0 . 2 50000 - 1阵 0 . 2 50一级种甚00O . 5簇1 . 00 . 500G O 二0 . 5簇0 . 1二级种薯00成2 . 03 . 01 . 0001 . 02 . 0簇0 . 1表 2 种薯的块茎质量指标块茎病害和缺陷允许率， %环腐病0湿腐病和腐烂0 . 1干腐病I . 0疮痴病、 黑痣病和晚疫病: 轻徽症状( 1 %一5 %块茎表面有病斑) 中等症状( 5 写1 0 %块茎表面有病斑)簇1 0 . 0 s . 0有缺陷薯( 冻伤除外)O . 1冻伤(4 . 0免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 8 1 3 3 -2 0 0 05 检验方法5 . 15 . 1 . 1脱毒苗的检验 脱毒后的检验 某一品种获得一批组培再生苗后， 要逐株鉴定带病毒和类病毒状况， 检测筛选的无马铃薯X . S , Y病毒， 马铃薯卷叶病毒( P L R V ) 和类病毒的组培苗才能确认是脱毒苗。 检测方法应符合附录A和附录B的要求。5 . 1 . 2 扩繁前的检验 扩大繁殖前， 对脱毒苗要再次检测， 确认无马铃薯X , S , Y病毒、 马铃薯卷叶病毒( P L R V ) 和类病毒后， 方可用于扩大繁殖。检测方法应符合附录A和附录B的要求。5 . 2 脱毒种薯的检验5 . 2， 在种植脱毒种薯的田间进行目 测植株质量检验。 检测方法应符合附录C的要求。 如需进一步确认时， 用附录D中所列的方法检验。5 . 2 . 2 检验数量 对田间生长的植株作整体观察后， 按表 3 方法随机抽样检验并记录于表 4中。 表 3 不同面积田块的检验点数和植株数面积, h . 检脸点数和每点检脸植株数 , E 2 . 6 8 X电极缓冲液贮液: 1 m o l / L三经甲基氨基甲 烷( T r i s ) , 0 . 1 5 m o / L硼酸， p H 8 . 9 。使用时， 1 份 贮液加 7 份水， 即为0 . 1 2 5 m o / L T r i s , 0 . 0 2 m o l / L翻酸， p H 8 . 9 的电极缓冲液。 E 2 . 7 0 . 0 2 5 %考马斯亮蓝R 2 5 0 染色液: 配制方法是， 1 6 0 m L水， 4 0 m L甲醉, 1 4 mL冰醋酸， 再加 1 2 g 三氛乙酸， 然后加5 m L l % 考马斯亮蓝R - 2 5 0 无水乙醇溶液， 混匀。 E 2 . 8 脱色液: 按 1 4 0 ml水， 6 0 m L甲醇 1 0 m l冰醋酸的比例配制。 E 3 块茎水溶性蛋白提取 E 3 . 1 取新鲜或贮藏的块茎， 用打孔器取样， 去掉表皮， 称取5 g 薯肉放于小研钵中， 加。 . 5 m L亚硫酸 3 4 2免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 8 1 3 3 -2 0 0 0钠溶液， 在一1 8 C冷冻过夜。E 3 . 2 在室温条件下融化冷冻的样品， 研碎， 3 0 0 0 r / m i n 离心1 0 m i n ,E 3 . 3 取上清液。 . 8 m L加。 . 2 m L载样缓冲液， 混匀， 即制备成供鉴定用的样品。E 4 电泳E 4 . 1 用6 %聚丙烯酞胺凝胶， 每老升凝胶中含N a z S O , 0 . 3 3 mg 。应用1 X电级缓冲液( 即1 份电极缓冲液贮液加 7 份水) 进行从负极到正极电泳( 上电泳槽的电极是负极， 下电泳槽是正极) ， 电流量为每厘米宽胶板5 m A 。上样量为1 0 2 0 匹。E 4 . 2 如室温较高， 可把电泳槽放于冰箱保鲜室中电泳。E 4 . 3 当示踪染料澳酚蓝达到凝胶底部边缘时停止电泳， 取出凝胶片进行染色。E 5 染色E 5 . 1 用。 . 0 2 5 % 考马斯亮蓝R - 2 5 0 染色3 h ， 然后用脱