GB17716-1999青鱼.pdf

G B 1 7 7 1 6 -1 9 9 9前言 为 了鉴定青鱼， 保护和保存青鱼原种优 良的性状及种质 ， 避免苗种生产过程 中种质混杂和退化 ， 开展青鱼种质的有效监测， 特制定本标准。 本标准主要是“ 八五， 科技攻关成果， 并吸取 r “ 六五” 、 “ 七五” 科技攻关及前人的有关成果 本标准的附录 A 和附录 B是标准的附录 本标准的附录 C是提示的附录 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归 口。 本标准起草单位: 匕 海水产大学、 中国水产科学研究院长江水产研究所。 本标准主要起草人: 李思发、 赵金良、 蔡完其、 周碧云、 吕国庆、 范兆廷、 徐忠法。 本标准从 1 9 9 9年 7月 1日起实施 。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准青鱼G B 1 7 7 1 6 -1 9 9 9B l a c k c a r p1 范围 本标准给出了青鱼( 似y l o p h a r y n g o d o n p i c e u s ) 的主要形态构造特征、 生长与繁殖、 遗传学特性， 以及检测方法 本标准适用于青鱼的种质鉴定。2 名称与分类2 门学名 青鱼( A 乃 d o p h a r y n g o d o n p i c e u s ) e2 . 2 分类位置 属鲤形目( C y p r i n i f o r m e s ) , 鲤科( C y p r i n i d a e ) , 雅罗鱼亚科( L e u c i s c i n a e ) ， 青鱼属( A 乃 l o p h u r y n g o -d o n)3 主要形态构造特征3 门外部形态特征3 . 1 . 1 外形 体延长， 呈梭形。 腹圆， 无腹棱。 口端位， 上领呈弧形。 吻尖 眼中侧位 体被较大的圆鳞， 侧线完全鳃耙稀而短小。尾鳍深叉. 上下叶等长。 体青黑色， 背部深黑， 腹部灰白色， 各鳍均为灰黑色 青鱼的外部形态见图 1 ,图 1 青鱼外形国家质f技术监督局 1 9 9 9 一 0 4 一 0 5 批准1 9 9 9 一 0 7 一 0 1实施免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9可数性状 背鳍鳍式: D 3 . 7 , 臀鳍鳍式 : A3 . 7 -9 ,侧 线 鳞 鳞 式 4 0 黯4 5 第一鳃弓外侧鳃耙数: 1 5 -2 1 ,可f i t 性状3123121312231233124313对f 体长 1 7 . 2 - 5 3 . 4 c m， 体重1 1 0 . 0 - 2 2 5 0 . 0 g的个体， 实测性状比例值见表1 表 1 实测可量性状 比例值全长i 本长体 长了 体高体长/ 头长头长/ 吻长头长/ 眼径头长/ 眼间距体长/ 尾柄长尾柄长/ 尾柄高1 . 1 5 9 士 0 . 0 3 24 . 0 5 0 上0 . 3 5 04 . 3 1 8 士 0 . 2 9 53 . 3 1 8 士0 . 5 8 06 . 6 1 9士 0 . 7 9 82 . 2 9 0 士0 . 3 9 67 . 6 5 7 士 0 . 6 2 4l . 0 5 9 士0 . 1 0 012 内部构造特征3 . 2 . 1 缥 二 室， 后室比较细长。3 2 . 2 下咽齿 1 行， 臼齿状， 齿式 4 / 5 .32 . 3 脊椎骨 脊椎骨总数 3 9 -4 2 03 . 2 . 4 腹膜 黑色4 生长与繁殖4 . 1 生长 不同年龄组的鱼体长、 体重的实测值见表2 。 与表2 对应的不同年龄组的鱼体长、 体重平均退算值、 1 长方程、 体长体重关系式见附录 c 提示的附录) 。 表 2 不同年龄组鱼的体长、 体重实测值t i 龄 、 龄1 斗2 3 生4 +5 十6 +7 十8 斗9 十1 测 体 t28 . 6 -4 6 . 9 4 0 .5 5 -5 5. 7 5 7.8 4 -6 8 . 0 6 5.9 7 -69 . 1 7 1 .7 6 -7 7 . 191.7 3-97. 51 0 0 . 5 - 1 0 4 . 01 0 6 . 0 - 1 1 0 . 01 1 0. 0- 1 1 2 . 0实测体重 g1 80 -2 00 01 0 5 0 - 3 3 2 03 1 00 - 5 1 0 04 5 6 2 - 6 8 2 75 4 42 - 7 3 1 71 1 1 0 0 - - 1 4 0 0 01 5 9 0 0 - - 2 1 5 0 02 2 9 0 0 - 2 8 5 0 02 0 2 5 0 - 3 1 4 0 0早实测体长 cm2 6 . 2 -4 9 . 6 38 .5 9 -5 5 . 7 53 .8 5 -6 x . 0 6 1 .9 0 -6 9. 1 7 1.1 6 -8 1. 4 9 5.5 2 -95 . 5 9 9 . 0 -10 4 . 01 0 4 . 0 - 1 1 0 . 01 1 0 . 0 - 1 1 2 . 0实测体重 g4 80 -2 2 5 01 0 0 0 - - 3 3 2 02 8 0 0 - 5 1 0 03 5 0 0 - - 6 8 2 75 4 42 -1 1 8 0 01 2 9 0 0 - 1 7 8 0 01 5 9 0 0 - 2 2 0 0 01 7 4 0 0 - - 2 8 5 0 02 0 2 5 0- 31 4 0 0I )年龄土要依据鳞片上的年龄数鉴定4 . 2 繁殖42 门性成熟年龄: 雌鱼 5 -7 龄， 雄鱼 4 -6 龄。4 . 2 . 2 性成熟个体性腺每年成熟一次， 一次产卵。4 . 2 . 3 怀卵量: 不同年龄组个体怀卵量见表 3 e免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9表 3 不同年龄组个体怀卵量年龄 ， 龄7 +8 斗 一体鱼. g1 6,1 0 0 . 01 7 9 0 0. 02 1 4 0 0 . 0绝对怀卵量. 粒6 . a 义1 0 57 . 2火 1 0 ,9 . 1沐 1 0相对怀卵量， 粒/ g3 9 . 0 24 0 . 194 2 . 6 25 遗传学特性5 . 1 细胞遗传学特性5 . 1 门染色体数 体细胞染色体2 倍数， 2 n =4 85 . 1 . 2 核型 中部着丝粒染色体( m组) 1 4对; 亚中部着丝粒染色体( s m组) 4 对; 亚端部着丝粒染色体( s t 组) 6对， 染色体臂数( N F ) 8 4 ( 见图2 ) .I Y 以 越 盆X fi7 共挑翔君0卜蕊六 翻蕊 月孔共翻 吸 吕 入J A蕊决肠 图 2J 、 八 决卜 心 ) 己 、八扣卜价器扎几、青鱼染色体组型5 . 2 生化遗传学特性5 . 2 . 1 肌肉中乳酸脱氢酶( L D H) 同工酶5 . 2 门. 1 肌肉中乳酸脱氢酶( L D H) 同工酶酶谱见图 3 ,5 . 2 门. 2 肌肉中乳酸脱氢酶( L D H) 同工酶酶带扫描图见图4 , LDHL DH,L DH,L D H , L D H, 图 3 青鱼肌肉L D H同工酶电泳酶谱图 4 青鱼肌肉L D H同工酶酶带扫描图5 . 2 . 1 . 3 肌肉中乳酸脱氢酶( L D H) 同工酶酶带的活性强度见表 4 。 表 4 青鱼肌肉L D H同工酶酶带活性强度%酶带L D H,L D H,L DH,L D H,L DH.活性强度4 1 . 92 0 . 211 . 52 . 92 . 65 . 2 . 1 . 4 群体变异范围: 长江中、 下游青鱼群体的多态座位比例为 5 . 9 %-1 1 . a %， 平均杂合度为0 . 0 0 1 0 - 0 . 0 3 5 0 _免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 7 7 1 6 -1 9 9 96 检测方法6 门年龄的鉴定6 . 1 门鳞片选取部位 体侧背鳍基部下方与侧线鳞_ L 方之间。6 门. 2 操作步骤 。 ) 取下背侧鳞片。 保存在鳞片袋中; b )将保存在鳞片袋中的鳞片取出， 放在培养皿中， 清洗干净; c )将清洗好的鳞片按在鱼体的位置夹在两块玻片之间， 贴上标签， 两端用透明胶带封好; d )在显微镜或投影仪下观察鳞片的年轮， 确定鱼的年龄。 注: 再生鳞不得用作年龄鉴定6 . 1 . 3 取胸鳍第一根鳍条基部磨片( 厚度为 。 . 2 0 -0 . 2 5 m m) 作为对照。6 . 2 繁殖力的测定 青鱼的繁殖力可通过计数亲鱼实际产卵量来估算， 避免杀死亲鱼。 在繁殖季节， 称量产卵前、 后亲鱼( 选取 一 次产空的亲鱼) 的体重( 精确到5 0 g ) ， 前后两次称量之差即为产的卵重。用电子天平称1 . 0 g卵, 2 个样品， 在解剖镜下分别计数每克卵的平均卵粒数。 卵巢中所含的全部卵粒数即为绝对怀卵量， 单位体重( 9 ) 所含的卵粒数为相对怀卵量。6 . 3 染色体的检测6 . 3 . 1 标本制备 采用体内注射植物血凝聚素( P H A) ， 取肾细胞悬液滴片， 空气干燥制片， 吉姆萨( G i e m s a ) 染色。吉姆萨染色液的配制见附录A( 标准的附录) 。6 . 3 . 2 测定染色体数 在显微镜油镜下观察， 计数 1 0 0 个以上清晰、 分散良好的中期分裂相的染色体数目， 测定染色体数。6 . 3 , 3 组型分析 选择部分最佳中期分裂相， 进行显微摄影， 按放大照片剪贴配组， 进行染色体组型分析。 染色体的形态类别， 按下列规定划分。即臂比1 . 0 -1 . 7 为中部着丝粒染色体( m组) ; 1 . 7 - 3。 为亚中部着丝粒染色体( s m组) ; 3 . 0 -7 . 。 为亚端部着丝粒染色体( s t 组) ; 7 . 0 - - a为端部着丝粒染色体( t 组) . m组和s m组染色体臂数为2 ; s t 组和t 组染色体臂数为1 .6 . 4 生化遗传分析6 . 4 . 1 样品的采集与保存 先剪断腹侧主动脉放血， 活体解剖， 取背部白肌， 放人编号的小塑料袋中， 液氮中保存。运回实验室后， 置于-2 5 C冰箱中保存。6 . 4 . 2 样品制备 样品加3 %辅酶 I 液匀浆， 低温离心， 至上清液澄清。整个制备过程均在低温下操作6 . 4 . 3 电泳分离 用水平平板电泳仪及 4 . O Y o 聚丙烯酞胺凝胶电泳分离。 加样前， 预电泳: 5 0 mA. 3 0 m i n 。 加样后， 前电泳 2 5 m A . 1 0 m i n ; 正式电泳; 2 7 5 V. 1 0 0 m i n 。电泳结束后， 放人预先配好并在3 7 恒温箱中保温的同J _ 酶染色液中染色。同工酶染色液的配制见附录 B ( 标准的附录) 。6 . 4 . 4 扫描测定 用激光扫描仪对电泳图谱进行扫描。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9 附录A ( 标准的附录)吉姆萨( G i e ms a ) 染色液配制A1 G i e ms a染色母液的配制称取 。 . 5 g G i e ms a粉， 量取甘油 3 3 ml - ， 在研钵中先用少量甘油与G i e m s a粉混合， 研磨至无颗粒时再将剩余甘油加人， 在 5 6 C 条件下保温 2 h后， 再加 3 3 mL甲醇， 保存于棕色瓶内。A 2 磷酸缓冲液( 0 . 2 m o l / L, p H7 . 2 ) 配制 磷酸缓冲液由 A液和 B液按比例混合而成。A 2 . 1 A液( 0 . 2 m o l / L , N a , H P O , ) 配制: 取 3 6 . 6 1 g含 1 个结晶水的磷酸氢二钠( N a 2 H P O , H B O) 定容于1 0 0 0 m l蒸馏水中， 或取7 1 . 6 4 g 含2 个结晶水的磷酸氢二钠( N a , H P O , H 0 ) 定容于1 0 0 0 m L蒸馏水中， 即成。A 2 . 2 B液( 0 . 2 m o l / L N a H , P O , ) 配制: 取 2 7 . 6 g含 1 个结晶水的磷酸二氢钠( N a H 2 P O , H , O) 定容于1 0 0 0 m l - 蒸馏水中， 或取3 1 - 2 1 g含2 个结晶水的磷酸二氢钠( N a H 2 P O , 2 H 2 0) 定容于1 0 0 0 m l蒸馏水中， 即成。A 2 . 3 取 A液 7 2 0 ml ， 加上 B液 2 8 . 0 ml , , 混合即成所需的磷酸缓冲液。A 3 G i e m s a 工作染色液的配制 取 1 0 0 ml , 磷酸缓冲液， 加人 3 m L G i e m s a 染色母液即成 附录B ( 标准的附录)同工酶染色液的配制B 1 三m甲基氮基甲烷一 盐酸( T r i s - H C I ) 染色级冲液( 1 . 5 m o l / L ) 的配制 取T r i s 1 8 1 . 7 1 g 溶于9 0 0 m l蒸馏水中， 用盐酸调节至p H 9 . 5 ， 再用蒸馏水稀释至1 0 0 0 m L ,B 2 抓化硝墓四氮哩蓝( N B T ) 液( m g / m L ) 的配制 取2 5 0 m g抓化硝基四氮哇蓝溶于2 5 0 m L蒸馏水中。B 3 乳酸钠溶液( 1 mo I / L ) 的配制 取 2 0 3 . 7 6 mL乳酸， 加人 7 0 0 mL蒸馏水混合， 用 5 0 %氢氧化钠溶液调节至p H7 . 0 ， 再用蒸馏水稀释至 1 0 0 0 ml 。B 4 同工酶染色液的配制 所需同工酶染色液按表 B I 配制。免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9表 B l 同工酶染色液配方T , i s - H C I 染色缓冲液辅 酶 1m g30N B Tm 1,吩嗓甲醋硫酸盐 m只乳酸钠溶液 -L擎3 01 0 . 51 09 5 附录C ( 提示的附录)不同年龄组青鱼体长、 体重退算值、 生长方程、 体长体重关系式C l 体长、 体龙退算值与表 2对应的不同年龄组鱼的体长、 体重平均退算值见表 C l .表 C 1 不同年龄组鱼的体长、 体重平均退算值年龄 ， 龄0 十1 十2 3 干4 +5 +6 7 十8 +O退算体长 Cfll2 1 . 33 6 . 649 . 76 1 . 071 . 78 4 . 09 2, 71 0 0 . 41 0 9 . 5退算体重 g2 2 0 . 99 0 9 . 92 2 0 9 . 64 0 0 2 . 64 6 2 3 . 58 0 7 2 . 41 1 3 3 31 5 1 2 3 . 12 0 5 2 4 . 7退算体长 cm2 0 . 83 6 . 44 9 . 861 . 97 4 . 28 5 . 09 3 . 91 01 . 91 0 8 . 6+退算体重 g2 0 5 . 68 9 5 . 52 2 2 2 . 54 1 7 6 . 26 3 9 0 . 39 5 67 . 41