GB9695.2-1988肉与肉制品脂肪酸测定.pdf

中华人民共和国国家标准6 3 75 4 3. 5 1 / . 5 2. 0 6肉与肉制品 脂肪酸测定GB 9 6 9 5. 2一 88Me a t a n d me a t p r o d u c t s -Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f f a t t y a c i d s 本标准等同采用国际标准I S O 5 5 0 8 -1 9 7 8 动植物油脂 脂肪酸甲 醋的气相色谱分析 和国际标准I S O 5 5 0 9 -1 9 7 8 动植物油脂 脂肪酸甲 醋的制备) ) ,1 主题内容与适用范围 本标准规定了 对按照G B 9 6 9 5 . 1 肉与肉制品游离脂肪含量 的侧定得到的脂类制备脂肪酸甲醋的方法以及脂肪酸 9 R HI &合物成分用气相色谱进行定性定RA 9 定的方法。 本标准适用于肉和肉制品中脂肪酸的测定。 本标准不适用于测定聚合的脂肪酸。2 引用标准 G B 9 6 9 5 . 1 肉与肉制品 游离脂肪含量的测定3 原理 按G B 9 6 9 5 . 1 从肉和肉制品中提取脂类，并在三 氟化硼存在一 ，进行甘油脂的皂化 和游离脂肪酸的醋化，然后进气相色谱仪，用面积归一化法测其组成。4 试剂 所用水为蒸馏水或相当纯度的水。4 . 1 氢氧化钠 ( G B 6 2 9 )甲 醇 ( G B 6 8 3 )溶液:0 . 5 m o l , 将2 B 氢氧化钠溶于l 0 0 m L 含水不超过0 . 5 % ( m / m )的甲 醉中。溶液放置一 段时间后， 可能产生少量碳酸钠白色沉淀而失效。此时重新配制。4 . 2 三氟化硼 ( 进口 分装)甲 醇 ( G B 6 8 3 )溶液:1 2 %一1 5 % ( 二m ) o4 . 3 庚烷 ( 进口分装) :色 谱纯。4 . 4 石油醚 ( H G 3 -1 0 0 3 ) :重燕馏的，沸程4 0 6 0 0C o澳值小于1 ，无残渣。 或己烷( 进口分装) 。4 . 5 尤水硫酸钠 ( H G 3 一1 2 3 ) 04 . 6 黑化钠 ( G B 1 2 6 6 ) : 饱和溶液) 。4 . 7 氮气:完全干 燥，纯度不小于9 9 . 9 9 Y O .4 . 8 氢气;纯度不小于9 9 . 9 ，无有机杂质。4 . ， 空气 或氧气:无 有机杂质。4 . 1 0 参照标准物 与被测定的脂肪酸甲 醋相同的脂肪酸甲 醋标准物质的混合物。 注: 各种试剂和溶剂在进行色潜分析时不得产生千扰脂肪酸甲 醋峰的信号。在其色 谱分析中，特别是二 氟化 w甲 Kx液，可能在色潜图的2 0 - 2 2 A脂肪酸区域内产生干 扰峰。因此每批新试剂或溶f ig 都应用;K9备纯 油酸甲醋，并进行色谱分析。若有干扰峰出现，该试剂应弃之。 若不存在含有2 0 或更多碳原子脂肪酸，己烷可代替庚烷。中华人民共和国商业部1 9 8 8 - 0 2 一 2 5 批准1 9 8 9 一 0 3 一 0 1 实施GB 9 69 5. 2一 8 85 装置和仪器5 . ， 突 验室常规仪器。5 . 2 产 计目 色L 爵 仪配备F I 日 丰 众 测器。5 . 3 微处理机或积分仪。6 试样 按( ; H 9 6 95。 1 的规定，得到的脂肪。7 分析步骤了 . 1 月 旨 肪酸甲醋的制备 三 氟化硼有毒，下列操作请在通风橱里进行，玻璃仪器用后，应立 即用水冲洗。了 . 1 . ， 试 样称取 称取脂肪约3 50m g 。根据称取脂肪量的多少按下表选择烧瓶及试剂。脂肪睦烧瓶氢氧化钠甲 醉溶液三氟化翻甲辞溶液庚九 仁m 只 .一一rnL1 ( ) ) 2 5 05 04、 1 32 5 0 5 0 05 0672 55 0 0 7 5 01 0 089今 87 5 0 1 0 川 ) 1 0 0一 1 01 27 1 ( j7 . 1 . 2 魁化 将样品置于 烧瓶中，加人 适址氢氧化钠甲 醉溶液及助沸剂。然后将冷凝竹固定J ; 烧瓶上 _ 。 水浴 卜 回流，至没有脂肪滴下，通常需 5一10mi n 。用移液竹从冷凝价 几 部加人适暇的 _ 氛化硼甲 醉溶液J “ 沸腾的溶液里。 注:在含两个以上 双键的脂肪酸存在时，排掉甲醉溶液和烧瓶中的空气，可向溶液中导人抓产 、 数分 钟，.曰匕 时 从冷凝管上部持续通人氮之 认7 . 1 . 3 丰 两 行 化7 . 1 . 3 . 1 接7 . 1 . 2 继续煮沸 Zmi n 。了 . 1 . 3 . 2 经冷凝管上 部加人适墩 的庚烷，继续煮沸l m : n 。 停止加热，冷却至室温后， 移去冷凝管。加人少址 饱和氯化钠溶液并轻摇烧瓶数次。 继续加人饱和氯化钠溶液至烧瓶预部。7 . 13 . 3 吸取上层庚烷溶液约l m L 于试管中，加适址无水硫酸钠脱水。 此溶液含脂肪酸甲醋约1 00m gm L ，可直接取一定童注人气相色L 爵 仪测定。71 . 脂肪酸甲 醋的贮存71 . 4 . 1制备样品应尽快分析。 不能尽快分析时，脂肪酸甲 醋的庚烷溶液短期可 贮存f 有惰性产 、 体的冰箱 1 ! ，不适合较长时间的贮存。了 . 14 . 2 不含溶剂的T 燥甲 酚应立 即予以分析。不能分析时，应用惰性气体封存J 二 冰箱内保存2 4 卜 ;GB 9 6 9 5. 2 一 ai l或装在真空密封管里，在冰箱内可保存更长时间。7 . 2 色谱条件了2 . 1 选择色谱分离条件的原则 ( 对硬脂酸甲 醋) 。( 附录A ) . a . 理沦塔板数不少于2 0 0 0 ; b . 分辨率不小于1 . 2 5 ; c . 出峰时fa il 小于1 5 m i n .: 一: 一:色 谱柱:柱长1 一3 m ，柱内径2 一4 m m .填充剂2 . 3 . 1 担体:酸洗硅烷化的硅藻土或其他合适的惰性担体2 . 3 . 2 固定相:聚醋型的极性液体 ( 如二甘醇聚丁二酸醋其粒度分布均匀， 大约在8 0 一 1 0 0 目 间。丁二醇聚丁二酸醋、 乙二 醇聚乙二酸IJ -_ I等) 、 氰基 硅酮或其他在气相色 谱中 作分离用的固定相。 固定相占 填充剂的5 %一 2 0 % .7 . 2 . 4 柱温:1 7 0 C一2 2 0 *C .7 . 2 . 5 进样口温度:比柱温高2 0 5 0 C .7 . 2 . 6 检测器温度:比柱温高2 0 一5 0 C .7 . 2 . 7 载气流 速:1 5 一 6 0 m L ; m i n .7 . 2 . 8 进样量:0 . 4 - 0 . 5 j L .了 . 3 定性分析 在与试样相同的操作条件下，分析标准混合物以保留时间来确定脂肪酸的成分。7 . 4 定量分析 面积归一化法。8 分析结果的计算8 . 1 一般计算 成分 含量由下式计算: C i ( %)二 C i 成分 的质量百分比，% ; A i 成分f 的峰面积;l Ai全部峰面积之和。AiE Aix1 加 (1 )一 般情况下，根据面积百分比计算的结果可以代表质量百分比。对于某些要求定量准确度高的测见8 . 2 0 校正因子计算法脂肪酸定量准确度要求很高时，采用校正因子法，将面积百分比换算为质量百分比。中，2式定8.二2 . 1 校正因子校正因子A li 定，是在与样品测定相同的操作条件下进行参照标准物的测定， 由得到的色谱图计算。校正因子K; 按下式计算:K; 二们 1 .Ai (2)式中:K; 组分 的校正因子。 m参照标准混合物中成分i 的质量， Fm;参照标准混合物中各种成分的质量总和; A，参照标准混合物中成分i 的峰面积; E A;参照标准混合物中 各种成分峰面积之和。8 . 2 . 2 相对校正因子GB 9 6 9 5. 2 一 B e相对校正因子 K; 由F 式给出: 。 。 。 (3)K-凡K ， ，二式中:K ; 相对校正因 r ; K c 16 - 软脂酸甲醋的校正因子; K; 组分 的校正因子。8 . 2 . 3 含量计算样品中成分 的含量按下式计算: C飞 ( %)二 一K 三 A ;、 ， 。 。 = 2 : ( A; )E A ;x 1 0 0 (4)式中:C ， 校正后成分i 的质量百分比，%; A 校正后成分 的峰面积; 1 ; A , 校正后样品中各种成分峰面积之和。8 . 8 计算结果保留小数点后一位。， 精密度9 . 1 重复性 同一分析者用同一仪器在同一天对同一样品含最超过5 % 所进行的分析， 相对误差不应超过3 % ,或绝对误差不超过 1 %，对于含量少的成分的测定，其绝对误差应小于0 . 2 %.9 . 2 再现性 同一样品，待测成分超过5 % ， 在不同实验室里测定获得的两个值的相对误差不应超过1 0 % ，绝对误差不能超过 3 %，对于含最少的成分的测定，其绝对误差不应超过0 . 5 %.GB 9 69 5. 2一 8 8 附录A柱效能和分辨率的测定 ( 补充件) 以分析各占一平的硬脂酸甲所和油酸甲酚的R合物为例。 合理选取进样址、 柱温及载气流速，使硬脂酸甲 酮色 L峰的极大e 1 1 - 溶剂 峰出现后1 m 1 v 1 R J 就出现且占满刻度的3 4 . 理沦塔板数的计算: d 尺。 。=I Fr se 二 二 二 二 - 、 - 。 ， . 。 . . . . . . ， . . . . . . . . . 一( 入1 ) 切 l分辨率R 的计算:R 二 卫生 一 一. . . . . . . . . . . ( 切 w +w 2式， I :。 理论塔板数， R 分辨率; d R, 保留距离，m m ，进样开始到硬脂酸甲 酷峰极大值间的距离， 二， 硬脂酸甲 醋的峰 宽，m m ,为曲 线拐点处的