维生素C的定量测定ppt课件

紫外分光光度计法测定果蔬中Vc的含量,生物化学实验,1,本实验要求：,1.本实验为设计性实验，每人须撰写好实验设计，实验设计包含“前言、实验、结果与讨论、结论”四部分，其中前言和实验需要在上实验课前写好，其余两部分在实验结束时撰写，然后上交。2.实验时，每个小组做一种果蔬的Vc含量测定3.实验结束，每个小组提供一种果蔬的Vc含量数值供所有小组使用4.数据统计时，绘制表格或柱状图等请带直尺和铅笔5.参考资料：马宏飞，卢生有，韩秋菊，李薇.“紫外分光光度法测定五种果蔬中维生素的含量”.化学与生物工程，2012,29（8）：92-94.6.本实验成绩为生化实验考试成绩。,2,1.学习定量测量维生素C的原理和方法2.学习设计实验3.了解水果、蔬菜中维生素C的含量。,一、实验目的,3,二、实验原理,维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏它时会产生坏血病，因此又称其为抗坏血酸。它可分为还原型和脱氢型。还原型维生素C具有很强的性。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。根据它具有的还原性质可测定其含量。维生素C的测定方法主要有紫外分光光度法、红外光谱法、2,6二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；紫外分光光度法是根据维生素C对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，通过标准曲线方程，即可计算样品中维生素C的含量。,4,紫外分光光度计坐标纸移液器离心机研钵,三、实验器材,5,市售果蔬10-20g,四、实验材料,6,1.10%HCl:10mL浓盐酸溶解成100mL溶液。2.100ug/mL标准Vc溶液：准确称取0.05g抗坏血酸，加10L10HCl溶解，用蒸馏水定容至00mL，混匀，即得100ug/mL维生素标准溶液。3.1mol/LNaOH:40gNaOH溶解成1000mL溶液。,五、实验试剂,7,1.制作标准曲线（有一组同学提前完成，其他小组不需要做）按照下表操作，以A243为纵坐标，以Vc浓度为横坐标制作标曲。,六、实验步骤,8,（1）果蔬样品的处理将蔬菜洗净晾干，水果取果肉，分别称取10.00于研钵中，各加入0HCl10mL，研磨匀浆，转移到50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀。移至离心管中3000转/分钟离心10min，取上清液即为待测果蔬提取液。,2.样品测定,（2）待测果蔬提取液吸光度的测量取0.1mL待测果蔬提取液，放入盛有0.2mL10%HCl试管中，再加蒸馏水4.7mL，摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其吸光度（A1）。,9,（3）碱处理果蔬提取液吸光度的测量依次吸取0.1mL待测果蔬提取液、1.0mL蒸馏水和0.4mL1mol/LNaOH放入试管中。摇匀；静置20min后加入0.4mL0HCl，混匀，再加入3.1mL蒸馏水。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其吸光度（A2）。,（4）吸光度确定待测果蔬提取液与碱处理果蔬提取液的吸光度之差（A1-A2）即为果蔬样品吸光度。,10,3.计算,测得果蔬样品的吸光度后，依据标准曲线方程，即可计算出果蔬中维生素的含量mg/（100g）式中：为依标准曲线查到的Vc浓度,ug/mL；为测吸光度时吸取样品溶液的体积，mL；总为吸取样品定容总体积，mL；待测总为待测样品总体积，mL；总为果蔬质量，；100为100果蔬。,维生素含量,总待测总100,总1000,11,七、分析与讨论,12,线性回归方程:A=0.054825581c-0.004244186相关系数：R2=0.999703455,13,CORREL:array1和array2之间的相关系数INTERCEPT:利用现有的x值与y值计算直线与y轴的截