纯培养课件.ppt

微生物的纯培养,病原教研室：陈恬,微生物无处不在、无孔不入，我们无时不生活在“微生物的海洋”中。绝大多数微生物在自然状态下是混杂群居的。 培养物(culture)：在人为规定的条件下培养繁殖得到的微生物群体称为培养物。 纯培养物(pure culture)：只有一种微生物的培养物。,德国微生物学家柯赫 （Robert Koch， 1843-1910）,1881 年德国乡村医生柯赫发明了使用固体培养基的 “ 细菌纯培养法 ”，使有可能将细菌从环境或病人排泄物等标本中分离成为纯培养。,纯培养技术：把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离纯化出来的技术。 无菌技术：在分离转移及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染，其自身也不污染操作环境的技术。包括：消毒灭菌和无菌操作。,培养基（medium）：人工配制的满足细菌及其它微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 固体培养基即用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。,斜面,平板,菌落（colony）：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度形成一堆肉眼可见的有一定形态结构的子细胞生长群体。 多个菌落连在一起形成菌苔（lawn）,不同微生物在特定培养基上形成的菌落特征稳定而不同，可以作为分类鉴定的重要依据。,光滑型菌落,粗糙型菌落,粘液型菌落,菌落大小、形态、颜色、边缘形状、表面突起、光滑程度随菌种不同而异,涂布平板法 稀释倒平板法 平板划线法 稀释摇管法,用固体培养基获得纯培养,涂布平板法,稀释倒平板法,稀释法进行液体分离 必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长,用液体培养基获得纯培养,2019/11/17,18,可编辑,显微镜下操作 对非优势种群和个体较大的微生物分离效果好,单细胞或孢子分离,显微操作仪,根据所分离微生物的营养、生理、生长条件等特点创造利于该微生物生长的环境，使之选择生长或抑制其他微生物生长的培养方式 选择平板培养 富集培养,选择培养,微生物保藏就是根据微生物特性及保藏目的的不同，给以特定的条件，使其存活而得以延续。 方法：传代培养、冷冻保藏、干燥保藏纸片保藏、薄膜保藏、寄主保藏等,微生物保藏,微生物保藏的基本方法 常用琼脂斜面、半固体琼脂柱及液体培养等 针对不同的菌种应选择使用适宜的培养基，并在规定的时间内进行移种，以免由于菌株接种后不生长或超过时间不能接活，丧失微生物菌种,传代培养保藏,一般来说，通过降低培养物的代谢或防止培养基干燥，可延长传代保藏的保存时间。 石蜡、胶塞等封闭管口,冷冻保藏,微生物处于冷冻状态，使其代谢作用停止以达到保藏的目的 冷冻时应速冻，解冻时应快速升温 可加入保护介质如甘油、二甲亚枫糊精、血清蛋白、脱脂牛奶或聚乙烯吡咯烷酮,保藏温度越低，保藏效果越好,液氮罐,液氮保藏196,普通冰箱,生物冰箱,低温冰箱70，普通冰箱20,冷冻培养保藏,沙土管保藏：适用于产孢子的微生物，如芽孢杆菌、放线菌等，一般将菌种接种斜面，培养至长出大量的孢子后，洗下孢子制备孢子悬液，加入无菌的沙土试管中，减压干燥，直至将水分抽干，最后用石蜡、胶塞等封闭管口，置冰箱保存。 冷冻真空保藏：将微生物样品冷冻后在真空下通过冰的升华作用除去水分，在真空或惰性气体的密闭环境中置低温保存。,干燥保藏,需加冷冻保护剂 微生物处于干燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期保藏的目的 冷冻真空干燥法是目前保存菌种的最好方法，可保存微生物存活数年数十年,冷冻真空保藏,真空冷冻干燥机,中国微生物菌种保藏委员会（CCCCM） 中国典型培养物保藏中心（CCTCC） 美国典型菌种保藏中心（ATCC） 美国的“北部地区研究实验室”（NRRL） 荷兰的霉菌中心保藏所（CB