2018届高考生物总复习生物技术实践11_40微生物的培养和应用.pptx

第40讲微生物的培养和应用考纲导航1.微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。3.某种微生物数量的测定。4.微生物在其他方面的应用。,考点一微生物的实验室培养1培养基(1)概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其_的营养基质。(2)营养组成：一般都含有_和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对_、氧气以及_的要求。,营养物质,生长繁殖,水、碳源、氮源,pH,特殊营养物质,(3)种类按照物理性质可分为_培养基、固体培养基、半固体培养基。按照成分的来源可分为天然培养基和_培养基。按照功能用途可分为选择培养基、_培养基等。2无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止_的方法。(2)关键：防止_的入侵。,液体,合成,鉴别,杂菌污染,外来杂菌,(3)不同对象的无菌操作方法：,3大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,(2)纯化大肠杆菌的方法平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面_的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。【特别提醒】1.操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：,连续划线,2.灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。3第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。4划线时最后一区不要与第一区相连。5划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。,稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的_，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。,梯度稀释,(3)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用_的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用_的方法。【判断与思考】1判断下列说法的正误。(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质。()(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。(),临时保藏,甘油管藏,(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害。()(4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。()(5)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落。()2根据题图，回答问题。如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考：,(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？【提示】获得效果A的接种方法为稀释涂布平板法，获得效果B的接种方法为平板划线法。,(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？【提示】最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？【提示】火焰附近存在着无菌区域。,考法1培养基及其制备方法分析1(2018云南民族大学附属中学高三月考)下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是(),A.能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因B此培养基是天然鉴别培养基C此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准D此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中,【解析】本题考查培养基的类型和作用，要求考生能根据培养基的配方，确定其中的青霉素、伊红和美蓝的应用，进而分析、判断各选项。分析培养基的配方可知，培养基中含有牛肉膏和葡萄糖，能为微生物提供碳源、氮源和能源，培养基中还含有青霉素(是一种抗生素)和伊红、美蓝，由于大肠杆菌对青霉素敏感，因此自然环境中的大肠杆菌无法在该培养基中生活，故不能在此培养基上培养大肠杆菌，且大肠杆菌的拟核上不含有抗青霉素的基因，A错误；,此培养基中的青霉素对细菌有选择作用，故该培养基是选择培养基，B错误；细菌对抗生素敏感，此培养基中含有青霉素，细菌不可以在此培养基上生长繁殖，C错误；由于转基因(运载体中含有青霉素抗性基因)的大肠杆菌菌种可以在含有青霉素的培养基中生长繁殖，且大肠杆菌在含有伊红美蓝的培养基中形成的菌落呈黑色，因此该培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中，D正确。【答案】D,2(2018广东省肇庆市高中毕业班第一次统一检测)绝大多数微生物对人类、动物及植物都是有益的，而且都是必需的，在医学工业方面和日常生活中，我们都是利用微生物的发酵法制造出来相应的制品。自然界中的各种微生物是混合生存在一起的，因此在进行某项具体生产时首先要纯化微生物。(1)分离提纯微生物常用_法和_法。(2)用接种环进行微生物接种时，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环_。,(3)配制培养基的操作步骤：_(用字母顺序回答)。a倒平板b计算c溶化d称量e灭菌(4)在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是_。(5)要确定培养液中某种微生物的含量，常用_法和_法进行计数。某同学涂布了四个平板，统计的菌落数是21、212、231和256，则应该取值为_。,【解析】本题考查培养基的配制、微生物培养与计数等知识，要求考生掌握微生物培养与计数的方法，能熟练进行相关的操作，并能对实验结果数据进行正确的处理和分析。(1)分离提纯微生物的常用方法有稀释涂布平板法和平板划线法。(2)平板划线操作的第一步之前要灼烧接种环，是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；以后的每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环灭菌，保证后一次划线的菌种仅来自于前一次划线的末端。,(3)配制培养基的操作步骤是：计算称量溶化灭菌倒平板。(4)要确定培养液中某种微生物的含量，常用稀释涂布平板法和血球计数板计数法(显微镜直接计数法)进行计数。该同学涂布了四个平板，但其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，实验数据缺乏正确性。应该去除统计的菌落数21，得到菌落数为(212231235)/3233。,【答案】(1)平板划线稀释涂布平板(2)灭菌(3)bdcea(4)防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基(5)稀释涂布平板显微镜直接计数/血球计数板计数233,【总结归纳】1.培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需的pH不同。,2微生物对主要营养物质的需求特点(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。,考法2无菌技术的操作3(2018华大新高考联盟高三教学质量测评)我国乳制品国家标准中，原奶细菌数允许最大值为每毫升200万个。下图是某高中生物兴趣小组进行的牛奶消毒及细菌检测实验的过程图。请回答下列相关问题：,(1)图示过程采用的方法是_，对从富含纤维素的土壤中分离分解纤维素的细菌进行计数前一般_(填“需要”或“不需要”)进行过程，理由是_。(2)过程是采用_法接种培养得到的结果，该统计结果一般情况下_(填“低于”或“高于”)实际值。,(3)过程后应将培养基放入_中，一段时间后取出，统计4个平板上的菌落数分别是16、82、126和167。经过消毒后的牛奶中，细菌数大约是_个/mL。(4)小明用下图所示的方法在培养基上接种牛奶中的细菌，在图中_(填图中字母)区域更易获得单菌落。,【解析】据图分析，图中表示用巴士消毒法对牛奶进行消毒，步骤表示对牛奶进行系列稀释，步骤表示利用稀释涂布平板法对牛奶中细菌进行培养计数。(1)根据以上分析已知，图中表示用巴士消毒法对牛奶进行消毒；富含纤维素的土壤中的分解纤维素的微生物数目较多，在进行计数前要进行梯度稀释，因此需要进行过程。(2)步骤表示利用稀释涂布平板法对牛奶中细菌进行培养计数，由于细菌的菌落会重叠，所以该统计结果一般情况下低于实际值。,(3)将过程接种后的培养基放入37恒温培养箱中，一段时间后取出，统计4个平板上的菌落数分别是16、82、126和167，由于16数值偏差太大，不予计算，又因为图中稀释倍数为103，因此，经过消毒后的牛奶中，细菌数大约是(82126167)31031.25105104个/mL。(4)如题图所示的方法为平板划线法，划线的次数越多，菌落越少，所以图中c区更容易获得单菌落。,【答案】(1)巴氏灭菌法(或巴氏消毒法)需要富含纤维素的土壤中的分解纤维素的微生物数目较多，在进行计数前要进行梯度稀释(2)稀释涂布平板低于(3)恒温培养箱1.25105(4)c,4(2018宁夏育才中学高三上学期第二次月考)豆浆是人们喜爱的食品之一，很多家庭自制豆浆作早餐食品，为了检测自制豆浆中细菌含量，做如下图所示操作。回答下列有关问题：,(1)在接种前，常常随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。(2)为了对自制豆浆中细菌进行计数，应采用的接种方法是_。采用这种方法接种培养时，取最终的豆浆稀释液0.1mL滴在平板培养基上，操作前一般用_法对接种工具进行灭菌。(3)用上述方法接种、培养后统计4个培养皿，菌落数分别为25个、31个、33个、35个，则可以推测每毫升自制豆浆中含细菌数为_个。该结果往往较实际值偏小，原因是_。,【解析】分析图示操作过程可知，10mL豆浆中加90mL无菌水，表示对豆浆稀释了10倍，之后每取出1mL稀释后的豆浆液加9mL无菌水，再稀释3个10倍，累计可得10mL豆浆最后被稀释了104倍，再取最后的稀释豆浆进行涂布平板培养，观察、统计菌落数。(1)在接种前，培养灭菌后的空白平板的目的是检测培养基是否感染杂菌或是否彻底灭菌。,(2)为了对豆浆中细菌进行计数，常采用稀释涂布平板法。对接种工具涂布器灭菌常采用灼烧灭菌。(3)若用上述方法培养设置4个培养皿，其中一个平板的菌落数只有25个，没有达到计数菌落数要求的范围(30300个)，应舍去；其余三个平板菌落数分别为31个、33个、35个用于求平均值计数。根据题干信息，豆浆被稀释了104倍，因此可以推测豆浆中每毫升含细菌数(313335)30.11043.3106个。由于个别菌落可能是由2个或多个细菌形成，因此运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小。,【答案】(1)检测培养基是否感染杂菌或是否彻底灭菌(2)稀释涂布平板法灼烧(3)3.3106少数菌落可能是由2个或多个细菌形成,【易错警示】消毒和灭菌,考法3大肠杆菌的纯化方法及过程分析5下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。,下列叙述中错误的是()A甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不一定是由单一的细胞或孢子繁殖而成C乙培养皿中所得的菌落都符合要求D乙中连续划线的起点是上一次划线的末端,【解析】灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确；稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确；平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误；连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体的密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成，D正确。【答案】C,6下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题。,(1)图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？_。,(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？_。(4)如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。,【解析】图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。【答案】(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)火焰附近存在着无菌区域(3)避免培养过程产生的水分影响微生物的生长(4)图乙,【归纳总结】两种纯化细菌方法的比较,考点二微生物的筛选和计数1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成_，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到_作用。,脲酶,催化,(2)统计菌落数目一般用_法。,稀释涂布平板,统计菌落数目时，培养基表面生长的1个菌落，来源于样品稀释液中_个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在_的平板进行计数。从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_。利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的_。,1,30300,(平均菌落数涂布的稀释液体积)稀释倍数,稀释度,【特别提醒】用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(3)实验流程：土壤取样_微生物的培养与观察细菌的计数。,样品的稀释,【知识拓展】用显微镜直接计数法计数：血细胞计数板法,(1)结构：常用的是1mm1mm0.1mm方格的计数板(如图)。每个计数板上有两个计数室，每个计数室上刻有9个大方格，其中只有中间的大方格为计数室，大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3；大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格，即大方格是由400个小方格组成。(2)操作：将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的菌液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，充满计数室。,(3)计数：在显微镜下计数45个中方格内的菌体数，求出每个小方格所含有的细菌的平均数，按照以下公式计算：每毫升原液含有的菌数每小格平均细菌数400104原液被稀释倍数。,(2)纤维素分解菌的筛选原理,筛选方法：_染色法，即通过是否产生_来筛选纤维素分解菌。培养基：以_为唯一碳源的选择培养基。实验流程土壤取样：富含_的环境选择培养：用_培养，以增加纤维素分解菌的浓度,刚果红,透明圈,纤维素,纤维素,选择培养基,_：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生_的菌落【判断与思考】1判断下列说法的正误。(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。()(2)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法。(),梯度稀释,透明圈,(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源。()(4)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低。()(5)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(),2根据题图，回答问题。研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落如图1所示，并用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同的温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2，请分析：,(1)透明圈是如何形成的？【提示】刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。细菌分泌的纤维素酶能将培养基中的纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，形成透明圈。(2)图1中透明圈大小代表什么？降解纤维素能力最强的菌落是哪种？,【提示】透明圈大小与纤维素酶的量和活性有关，降解纤维素能力最强的是菌落。(3)结合图2推测哪种菌株更适合用于人工瘤胃发酵？【提示】J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，更适合用于人工瘤胃发酵。,考法1选择培养基成分及配制方法的分析1(2016四川理综改编)下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。,(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_。,【解析】(1)脲酶由分解尿素的细菌产生，故需用以尿素为唯一氮源的培养基筛选该类微生物。分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，故培养基中加入酚红指示剂后，菌落周围将出现红色。,(2)稀释涂布平板法常用来统计样品中的活菌数，在计数时一般选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值。每克样品中的菌株数(C/V)M。因培养基上两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故统计结果往往较实际数目少；而用血细胞计数板计数时，死亡的、活的菌体都计数在内。【答案】(1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法1.75少,2苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请据图回答下列问题：,(1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入_作为碳源，中不同浓度碳源的培养基_(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用_法。(2)为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于_；,使用_法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是：_。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？_。,【解析】根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用稀释涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再进行接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计实验时要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。,【答案】(1)苯酚影响稀释涂布平板(2)的培养基中没有加入苯酚作为碳源，的培养基中加入了苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作,【总结归纳】选择培养基的制作方法(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。,(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物生长，使能够利用石油的微生物生长，从而分离出能消除石油污染的微生物。,(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。,考法2微生物的分离与计数3(2018甘肃省会宁县第一中学高三上学期月考)甲、乙两同学学习完微生物的实验室培养与分离后，要利用所学知识研究环境中微生物的情况。请回答相关问题：.甲同学为了检测饮用水中是否会有某种细菌，配制如下培养基进行培养：,(1)该培养基所含有的碳源有_；培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，最后一步待培养基冷却至_左右时，在_火焰附近倒平板。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_(“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洁和_(“消毒”或“灭菌”)。(3)对获得的菌种可以依据菌落的_特征对细菌进行初步的鉴定。,.乙同学从土壤中分离分解尿素细菌的相关实验。(1)在培养基中加入_指示剂，可初步鉴定出该种细菌是否分解尿素。(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种后的培养基倒置于_中培养。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种等量的_作为对照进行实验。,(3)该同学利用_法统计土壤样品中尿素分解菌的菌落数时，1g样品被稀释106倍后，每个严格灭菌的培养皿中用了0.5mL稀释液，最终所用的5个培养皿所得的菌落数分别是112、132、141、130、140，则每克样品中的菌株数为_。,【解析】本题考查微生物的培养和分离计数的相关知识。题目比较简单，解题思路是根据题意梳理相关基础知识，然后结合题目要求分析作答即可。.(1)由表格内容可知，该培养基的碳源主要是乳糖、蔗糖，蛋白胨作为主要的氮源也能提供碳源；培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，最后一步待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。,(2)消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行灭菌；操作者的双手需进行清洁和消毒。,(3)当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落。每种细菌在一定条件下形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。因此，对获得的菌种可以依据菌落的形状、大小、颜色和隆起程度等特征对细菌进行初步的鉴定。.(1)在细菌分解尿素的反应中，细菌产生的脲酶可将尿素分解成为氨。为证明分离得到的细菌是否可以分解尿素，可在培养基中加入酚红指示剂，若该指示剂变红，则可初步鉴定该细菌可以分解尿素。,(2)要想使微生物快速地繁殖，就要置于适宜的条件下，特别是温度，所以要将接种后的培养基倒置于恒温培养箱中培养；要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种等量的无菌水作为对照进行实验。(3)常用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，本实验中的C(112132141130140)5131，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，本实验中的V0.5mL，M代表稀释倍数，本实验中的M106，因此，每克样品中的菌株数为(1310.5)1062.62108。,【答案】.(1)蔗糖、乳糖和蛋白胨50酒精灯(2)灭菌消毒(3)形状、大小、颜色和隆起程度等.(1)酚红(2)恒温培养箱无菌水(3)稀释涂布平板2.62108,4(2018江西省赣州市第四中学高三上学期月考)进入冬季，部分城市出现严重雾霾，与秸秆野外焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力，缓解环境污染。试分析并回答有关问题：,(1)专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中_在细胞结构上与其他两者不同。(2)纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将_分解为_。,(3)微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列_，从而得到单个菌落，再采用_方法进行鉴定，得到上图的菌落。那么，图中降解纤维素能力最强的菌落是_(填图中序号)。(4)图中所示培养基从物理状态上看，属于_培养基。,【解析】本题主要考查分离土壤中能分解纤维素的微生物的相关知识，要求考生能够识记原核细胞与真核细胞结构的异同点，识记纤维素酶的种类及其专一性，掌握微生物分离与培养的一般步骤。纤维素的单体是葡萄糖，纤维素酶能够将纤维素分解为葡萄糖。纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,(1)霉菌和酵母菌属于真核生物中的真菌，细菌属于原核生物，原核细胞和真核细胞在结构上最主要的区别是原核细胞没有核膜包被的成形的细胞核。(2)纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将纤维二糖分解为葡萄糖。(3)微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，制备了选择培养基，将菌液进行一系列梯度稀释，从而得到单个菌落，再采用刚果红染色方法进行鉴定；纤维素酶的量越多，活性越强，分解的纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中降解纤维素能力最强的菌株是。,(4)图中所示培养基从物理状态上看，属于固体培养基。【答案】(1)细菌(2)纤维二糖葡萄糖(3)梯度稀释刚果红染色(4)固体,【归纳总结】两种微生物筛选方法的比较,1(2018海淀中学高三第一学期期中练习)在微生物培养的过程中，需要通过选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种，下列与之相关的叙述中不正确的是()A纤维素分解菌能够分解刚果红染料，从而使菌落周围出现透明圈B尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红,C在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株D在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”,【解析】纤维素分解菌能够分解纤维素，在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，A错误；尿素分解菌能够将尿素分解为氨，使培养基呈碱性，从而使酚红指示剂变红，B正确；在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株，C正确；在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”，D正确。【答案】A,2(2018北京海淀首师大附中高三月考)硝化细菌广泛存在于通气性较好的土壤中，下列关于其代谢叙述正确的是()A碳源为葡萄糖B培养时需隔绝空气C氮源是氮气D培养时需适宜的温度,【解析】硝化细菌可以利用氨氧化过程产生的化学能将二氧化碳和水转变成有机物，属于化能自养型生物，所以培养硝化细菌时培养基成分不需要有机碳源，其碳源为二氧化碳，A项错误；由题干中“硝化细菌广泛存在于通气性较好的土壤中”可知，硝化细菌应属于需氧型生物，所以培养时不需要隔绝空气，B项错误；固氮微生物的氮源是氮气，而硝化细菌不能直接利用氮气做氮源，C项错误；硝化细菌能利用NH3氧化释放的能量把二氧化碳和水合成有机物，需要酶的催化作用，所以培养时需要适宜的温度，D项正确。【答案】D,3(2018山东省滨州博兴三中高三期末)下面有关倒平板的操作，错误的是()A将灭过菌的空培养皿放在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置D把培养皿打开，将培养皿盖倒放在桌子上,【解析】将灭过菌的空培养皿放在火焰旁的桌面上，以防止杂菌污染，A正确；使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰，对锥形瓶的口径处进行灼烧灭菌，防止空气中的杂菌污染，B正确；等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，C正确；倒平板时不能把培养皿盖完全打开并放到桌面上，这样会污染培养皿中的培养基，D错误。【答案】D,4(2017江苏卷)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：,(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_，以达到富集