HIV筛查实验室的质量管理与控制教材.ppt

HIV筛查实验室的质量管理与控制,质量保证,一、人员培训,人员要求,3名以上技术人员,至少1人具有中级职称、2年以上血清学检验工作经验,上岗要求,上岗前必须接受技术培训并获得合格证书,每年接受复训一次,培训内容,HIV检测相关基础知识、检测技术及管理要求、实验操作、质量管理与控制、生物安全。,使用新方法前,对人员进行培训,获得资格,开展相应工作,检验人员,检测人,复核人,签发人,不能一人同时承担多个角色！,二、环境条件,HIV筛查实验室,实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。,配备开展HIV抗体检测所需的设备：生物安全柜、酶标仪、洗板机、恒温孵育箱、离心机、加样器、冰箱等。,三、样品的采集和保存,尽量避免,溶血,细菌污染,抗凝不完全,假阳性,内源性HRP,红细胞破裂释放活性物,纤维蛋白原干扰,注：血清置4冰箱5天内完成检测,四、检测方法和试剂选择,试剂,必须是HIV-1/2混合型，并且经国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、在有效期内，经临床质量评估敏感性和特异性高。,更换试剂批号时应进行平行实验。,检测方法,使用可靠的检测方法，常用：ELISA和快速检测。,五、设备维护与校准,酶标仪/洗板机,加样器,温度计,高压锅,国家法定部门定期校准（每年至少1次）,精密仪器,生产厂家校准（每年至少1次）,均须做好日常维护及使用记录,蛋白印迹仪,流式细胞仪,病载仪,六、文件和文件管理,1.标准操作程序（SOP）,至少建立以下SOP,样品的接收、登记、处理和保存,检测方法和步骤,试剂使用和保存,仪器的使用、维护和校准,质量控制要求及程序,结果解释与报告,保密程序,实验室数据、相关文件记录与保存,不确定样品追踪和处理,实验室安全防护、清理及消毒,SOP应包括的内容,标题和编号,编写和修订日期,编写和修订人员姓名,方法、目的和应用范围,检测设备,试剂及有效期,安全防护相关步骤,结果的解释和报告,附录,每年修订一次,2.实验原始记录,原始记录表,试剂厂家,测定方法,试剂批号,试剂效期,操作人员姓名,复核人员姓名,检测日期,3.结果报告,试剂盒质控品外部质控品,满足要求,不满足要求,分析结果,重新检测,复核人签字,签发人签字,4.HIV标本的保存记录,标本保存记录,标本类型,贮存量,贮存温度,贮存起始时间,标本保管人,标本复核人,5.样品登记和保存,收样,建立唯一编码,登记相关信息,保存,姓名、性别、年龄、检测日期,6.文件存档实验原始记录、打印数据、WB试验的反应条带或照片、样品登记表、样品保存记录表等应妥善存档保存10年以上。,质量控制,一、实验室质量控制的定义,为达到质量要求所采取的作业技术和活动。,定义,二、酶免或发光法抗体检测的室内质量控制,1、室内质量控制的质控品,试剂盒内部对照,判断试验有效性，但不能作为室内质控品。,室内质控品,监控检测的重复性。可只设弱阳性质控，以试剂盒临界值的23倍为宜。,3、室内质控血清的制备,收集阳性血清（无溶血、黄疸、脂肪）,56、30min灭活3000r/min离心15min,正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀释,测量值,分装，-20冻存,4、质量控制方法,Levey-Jennings质控图使用累积和技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。,质控图参数,在不同的批次检测取得的至少20个数据,至少做5个批次的检测，每个批次中不少于4个质控品检测结果,平均值,标准差,变异系数,控制限,样本量足够,样本量较少,质控的规定和使用目前很多质控规则已被采用，最常用的是12S和13S规则。,告警（12S）：当外部对照的S/CO值超过2S范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。,警告:12S规则违背,失控（13S）：当外部对照的S/CO值超过3S范围时，系统处于失控状态，本次结果不能被接受。,失控:13S规则违背,位移：连续几次（3-5次）外部质控都落在均值的一侧。提示试验条件发生了较大改变。,发生位移,出现以下情况也应该应该暂停实验，找出原因。,连续两次同一方向超出2S,连续四次同一方向超出1S,失控原因的处理和分析,处理,出现数据违背控制规则,填写失控报告单,上交实验室主管,是否发出检验报告,决定,失控原因的分析,立即重新测定同一质控品,用新的质控品重测失控项目,检查仪器状态,检查试剂,联系仪器厂家,排除人为或偶然误差,排除质控品变质或污染,失控,失控,失控,失控,“即刻法”质控样本量较少，无法绘制“L-J”质控图时，前20个数据可采用“即刻法”。该方法只需3个测定值即可开始进行质控。,先将测定值从小到大排列，X1最小，Xn最大；计算X和S；计算SI上限值和SI下限值。SI上限=（X最大-X）/S