分离以尿素为氮源的微生物.ppt

1B2B3C4CD6B7B10.D11.B12.C13.C,13.“培养基的稀释率（培养基的更新速率）”的含义就是“添加新的培养基以及放出老的培养基的速度”。横坐标为“培养基的稀释率（培养基的更新速率）”，也就是“添加新的培养基以及放出老的培养基的速度”。,14（1）目的菌选择（2）化合物A异养需氧型（3）减少增加（4）划线（5）定期取样细菌数目的对数（6）灭菌,实验2分离以尿素为氮源的微生物,细菌尿素NH3中性碱性酚红颜色：黄色红色,(变色范围pH6.4-8.2),任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？,利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。,配制培养基,尿素培养基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g琼脂糖0.5g酚红0.25g尿素10ml,选择培养基,琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物,（1）将土壤中的固氮菌分离出来,（2）将土壤中自养微生物分离出来,举一反三,（3）筛选出抗青霉素的微生物,（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物,2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实具有选择作用，你该如何设计实验。,思考：,配制培养基,尿素培养基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g琼脂糖0.5g酚红0.25g尿素10ml,选择培养基,实验组,3、请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。,思考：,方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。,二、实验目的:,使用专一培养基(含有尿素)分离专一的细菌,通过指示剂（酚红）颜色的变化检知脲酶催化的化学反应,三、实验中涉及到的一些问题：,（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）,（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？,（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？,没硬化，腐殖质丰富的土壤,碳源、尿素、无机盐、水、酚红,培养基红色的深浅,三、实验中涉及到的一些问题：,重复性原则,对照原则,（排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度）,（四）实验设计要遵循的原则：,过滤灭菌后的尿素,（二）制备细菌悬液制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液,配制菌悬液,1个99ml无菌水2个4.5ml无菌水,得10-2,10-3,10-4的菌悬液,1g土壤,倒平板,需要倒3个LB平板，9个尿素平板,每个稀释度1个LB对照平板3个尿素平板(平行重复组),接种,取0.1ml菌悬液,涂布分离,高浓度低浓度，换枪头,低浓度高浓度，可不用换枪头,涂布分离,37倒置培养,按浓度捆成一摞,恒温37培养,10-4、10-3,、10-2,本实验尿素固体培养基上生长的菌落都是以尿素为氮源的微生物吗？,思考与练习,2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？,如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下就会被水解，水解后的NH3会使土壤变成碱性，NH3与其他阴离子物质如SO42、CO32、NO3等形成化合物，则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。,4与全营养培养基早的菌落比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落？,因为全营养培养基中的氮源是蛋白胨，很多细菌都能利用它，而尿素培养基中的氮源只有尿素，只有含脲酶的细菌才能利用尿素，能存活。这一现象表明能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占有极少数量。,1土壤中有些微生物能利用尿素是因为()A其体内含有脲酶B其体内含有氨(NH3)酶C它能将CO2合成为有机物D它们不需要氮源,A,【例题2】分离以尿素为氮源的细菌和分离大肠杆菌都使用了LB培养基，其成分()A前者含琼脂，后者不含琼脂和琼脂糖B两者都含有琼脂C前者含有琼脂糖，后者含琼脂D两者都不含琼脂和琼脂糖,C,3用104稀释度的细菌悬液分别涂布于LB、尿素培养基上，培养后的结果，以下叙述正确的是()ALB培养基上未出现任何菌落B尿素培养基上出现的菌落数量和种类都多于LB培养基上的C尿素培养基上出现的菌落数量和种类都少于LB培养基上的D尿素培养基上是不可能出现菌落的,C,5.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10-6培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有()由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照ABCD,A,2为什么本实验中要用琼脂糖来代替琼脂配制固体培养基呢？琼脂糖与琼脂有何区别？琼脂在制作固体培养基时起凝固剂的作用。但它却是一种未被纯化的混合物，里面有一定量的含氮化合物。在本实验中所使用的尿素培养基却要求提供氮元素的物质只有尿素，用这种培养基才能分离得到含脲酶的细菌。若用琼脂来制备本实验的尿素固体培养基，则提供氮元素的物质除了尿素还有琼脂，用这种培养基就不难只得到含脲酶的细菌，还会得到大量以非尿素为氮源的细菌，这样就达不到分离出以尿素为氮源的细菌这一实验目的了。所以要将琼脂纯化，去除那些含氮化合物，这样经纯化得到的琼脂糖就可以代替琼脂做固体剂且不会带来含氮化合物对本实验的干扰了。,3本实验的微生物分离与上一实验中大肠杆菌的分离实质上一样吗？两者的细菌分离有很大的不同。实验名称分离方法分离的内容分离