论文完整窗胸萤生物学及人工繁殖技术的研究.doc

分类号分类号：Q96 授予学位单位代码：授予学位单位代码： 10434 研研 究究 生生 学学 号：号： 050280 山東農業大學山東農業大學 硕硕 士士 学学 位位 论论 文文 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 Studies on the biology of Pyrocoelis analis and the intestinal bacteria of P. analis larvae 2008 年 5 月 12 日 研究生研究生：何 华 学学科专业科专业：农业昆虫与害虫防治 研究方向研究方向：城市与资源昆虫 学院学院：植物保护学院 指导教师指导教师：刘玉升 副教授 1 关于学位论文关于学位论文原创性和使用授权的声明原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立 进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予 指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中 明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论 文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或 机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论 文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导 师 签 名： 日 期： 目目 录录 中文摘要中文摘要.1 ABSTRACT.3 引引 言言.6 1 生物发光与发光生物 .6 1.1 生物发光.6 1.2 发光生物.7 1.3 生物发光功能.8 2 萤火虫研究进展.9 2.1 萤火虫资源的分类概况.9 2.2 防卫行为.10 2.3 求偶识别与交配选择.11 2.4 萤火虫资源的开发利用与保护.13 3 昆虫肠道微生物的研究 .16 4 课题研究的目的和意义 .18 材料与方法材料与方法.19 1 供试材料 .19 1.1 供试虫源.19 1.2 培养基及制作.19 1.3 试验仪器.19 2 研究方法 .19 2.1 萤火虫资源调查及鉴定方法.19 2.2 窗胸萤生物学特性.20 结果与分析结果与分析.23 1 山东省萤火虫资源的种类及其形态特征 .23 2 窗胸萤的生物学特性.25 2.1 窗胸萤的形态特征.25 2.2 窗胸萤年生活史.29 1 2.3 卵的发育过程.30 2.4 幼虫发光与捕食行为.31 2.5 化蛹及羽化.31 2.6 成虫的发育及习性.32 2.6.1 求偶和交配行为.32 2.6.2 雌萤的繁殖力.32 2.7 反射性出血.33 2.8 温度对窗胸萤生长发育的影响.33 3 窗胸萤幼虫肠道细菌分离及鉴定.34 3.1 菌体形态和培养性状.35 3.2 温度、pH 值及渗透压对细菌的影响.36 3.3 供试菌株生理生化性状.37 3.4 供试细菌菌株鉴定结果.38 小结与讨论小结与讨论.39 1 山东省萤火虫资源的种类及形态特征.39 2 窗胸萤的生物学特性.42 2.1 形态特征.42 2.2 卵及发育.42 2.3 幼虫行为.43 2.4 成虫习性.43 2.5 反射性出血.44 2.6 温度对窗胸萤生长发育的影响.44 3 窗胸萤幼虫肠道细菌的分离培养及鉴定 .45 参考文献参考文献.47 附附 录录.55 致致 谢谢.56 攻读学位期间发表论文情况攻读学位期间发表论文情况.57 山东农业大学硕士学位论文 1 中文摘要中文摘要 萤火虫，泛指鞘翅目萤科(Coleoptera: Lampyridae)昆虫，全世界已记 录2000多种，分布在温带、亚热带和热带地区。我国已经记载的有76种， 台湾大约有58种, 俗称火金姑。小至中型，长而扁平，体壁与鞘翅柔软。 前胸背板平坦，常盖住头部，头狭小，眼半圆球形，雄性的眼常大于雌 性。腹部6-7节，末端下方有发光器，能发绿色光。本文在对山东7种萤 火虫资源调查的基础上，选择陆栖萤火虫-窗胸萤（Pyrocoelis analis Fabricius）为研究对象，从其形态、生物学、成虫的求偶和生殖习性、 幼虫的捕食行为、幼虫的肠道细菌方面对进行了研究，以期为胸窗萤的 保护和利用提供科学及实验依据。 生物学生物学 1 通过对山东省部分地区萤火虫资源调查及标本采集，经初步鉴定，共 采集到 7 种萤火虫，隶属于 2 亚科 3 属，分别为熠萤亚科（Subfamily luciolinae） 、萤亚科（Subfamily Lampyrinae）的熠萤属（Genus luciola Laporte，1833） 、短角窗萤属（Genus Diaphaes Motschulsky，1853）和 窗萤属（Genus Pyrocoelia Gorham，1880） 。 2 窗胸萤（P. analis）一生要经过卵、幼虫、蛹和成虫 4 个阶段，是一种 完全变态的昆虫。成虫具有雌雄二型性，雄虫前胸背板半圆形，橙黄色， 前缘部有 2 枚肾形透明斑，触角黑色，锯齿状，11 节；鞘翅黑色；第 5、6 腹板有 2 枚带状发光器。雌虫体橙黄色，前胸背板半圆形，前缘处 肾状斑不明显；触角橙黄色，11 节，锯齿状；前翅黑色呈雨滴状，后翅 退化缩小；第 6,7 腹板两侧各有 1 枚点片状发光器。发光器乳白色，发 出绿色持续光。 3 在山东省 1 年或 2 年完成一个世代，成虫在 7 月下旬至 8 月上旬大量 发生，10 月上旬为产卵高峰期，以卵或老熟幼虫越冬。 4 窗胸萤卵散产或成堆，圆球型，橙黄色；幼虫夜行性，发光规律不明 显，主要取食灰巴蜗牛（Bradybaena ravida Benson）和同型巴蜗牛 （Bradybaena similaris Ferussac） ，捕食需经过搜索、捕食、清洁、静息、 搜索的行为过程。幼虫可以直接在土缝、枯枝落叶和卫生纸上化蛹，不 山东农业大学硕士学位论文 3 需 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 2 要建造蛹室。幼虫期极易受到有蜘蛛、蟾蜍、蚂蚁和一些真菌如白僵菌 (Beaveria bassiana) 等的危害，蜘蛛是成虫的主要天敌。 5 内饲养和实验室观察发现，蛹前期发光器为片状，雌蛹发育至中期出 现成虫发光器，两种发光器并存直至羽化。雄蛹发育至中期出现成虫发 光器直至羽化。 6 雌虫羽化后 4-5 天进行交配，雌虫具有多次交配现象，大多数雄虫在 交配完后则死亡。室温下，交配过的雌虫的寿命为 14.553.65d，单头雌 虫的产卵量为 80.6047.94 粒。雌萤不经交配也可以产卵，卵不孵化。 7 窗胸萤雌雄成虫均有反射性出血现象，雌性的出血位点一般为前胸背 板和触角窝，雄萤于鞘翅、前胸背板和鞘翅边缘、触角窝处有出血位点。 8 窗胸萤在 20、24、28下实验种群相关参数研究结果表明，窗胸 萤在 24下的产卵率、孵化率、存活率均较高，雌蛹的发育历期较雄蛹 短，窗胸萤从卵发育到成虫平均 349.58.15d，其卵期、幼虫期、蛹期及 成虫期分别为 117.220.9d、184.9218.56d、12.651.09d 和 15.60 3.85d。 9 野外调查发现，雄虫的化蛹时间在 9 月上中旬，9 月下旬至 10 月上旬 为雌虫的化蛹时期，室内饲养和实验室观察结果窗胸萤在野外的发生情 况大体一致。 幼虫肠道细菌分离及鉴定幼虫肠道细菌分离及鉴定 从窗胸萤的5龄幼虫中分离纯化获得10个细菌菌株，并对其菌体形态、 染色反应、培养性状、生理生化性状进行了系统研究。鉴定结果表明， 这10个细菌菌株分别属于埃希氏菌属( Escherichia) 、金色单胞菌属 (Chryseomonas) 、放线杆菌属(Actinobacillus) 、摩根氏菌属(M organella ) 、李斯特菌属(Listeria) 、金杆菌属(Aureobacterium ) 、微杆菌属 (Microbacterium ) 、地杆菌属( Terrabacter) 、芽孢杆菌属(Bacillus)和黄 杆菌属( Flavibacterium ) 。 关键词：萤火虫；窗胸萤；生物学；发光器；肠道细菌 山东农业大学硕士学位论文 3 Abstract There were 2,000 kinds of fireflies (Coleoptera: Lampyridae) in the world, widely distributed in the temperate zone,the tropics and the subtropics.There were 76 kinds of fireflies readed in China,and in taiwan were about 58 species. Firefly,Little or middle,long and flat ,soft body and elytras,the flat pronotal often hided the head which small and spheroidals,maleseyes bigger than females. At the lateral sides of abdomen ventrites 6-7,each with a pair of spot- like luminescent organs.The adults all can give off green light. In this paper ,the biology characteristics and the larvaesintestine of P. analis were studied by reseaching 7 kinds of fireflies resouces,as a basis for future studies on protection an utilization. Biology 1 Through investigating firefly resources, collecting fireflies samples in part of Shandong province,and identifying and statistical analysis,7 species belongt -o 2 Subfamilys 3 orders were collected.There were Subfamily luciolinae Genus luciola Laporte,Subfamily Lampyrinae Genus Diaphaes Motschulsky and Genus Pyrocoelia Gorham. 2 P. analis was a holometabolism insect,experiencing egg,larvae,pupae and adult. Adults of P.analis were typically sexual dimorphism , Themales pronotumweresemicircular,yellow orange,semitransparent, apical margin well reflexed and there a pair of small vitreous areoles at longitudinal ridge.Elytra were very strong and black.The zonary luminescent organs nearly occupy all of ventrites 5-6. Females were yellow-orange in the whole, brachypterous. the Pronotum was similar to that of male but without vitreous areolets.At the lateral sides of abdomen ventrites 6-7,each with a pair of spot-like luminescent organs，which were white, strong and flashing green light persistent. 3 There was one generation in one or two years.Adults were occurred on beginning of July to early August. The peak of the oviposit was on early 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 4 October. P. analis wintered by eggs or mature larvaes. 4 The eggs of the females were laid singularly or in heaps, spheroidal displacement and orange yellow . The larvaes are nocturnal.Larval glow is not refular, inhabitting moist grasslands and jungles and mainly feed on two species of land snails,Bradybaena similaris (Ferussac),Bradybaena ravida and Beaveria bassiana. The sequence of the preying behavior of larvae was searching,preying,cleansing,break and searching again. Larvaes did not need favorable places for pupal cell construction.A predator of adult fireflies is the spider,(Benson)( Stylomma tophora:Bradybaeniidae). 5 During pupation,the adult light organ developed and became functional.In addition,the larval light organ continued to function throughout prepupal,pupal and teneral adult stages. 6 The mating and ovipositing behavior was also observed in field and laboratory.Each female can mate immediately after emergence and with several different males in whole life.Most of males died when they end of the mating.The competitive behavior among mating males was ubiquitous.The mated and unmated females can lay eggs normally. The longevity of the former lasted for14.553.65d(n=20),and the average number of eggs was 80.6047.94 (n=20) at241.It is guessed that morphological and physiologi cal factor, which influenced female fecundity. 7 Adults of P.analis exhibit feflex bleeding when tactually stimulated.Male discharge fluids from along elytral and pronotal margins and around the anten Nal socket,but females only discharge from pronotal margins and antennal sockets,without the small elytral buds. 8 Effects of four constant temperatures(20,24,28) on development duriation,fecundity and longevity of P.pectoralis were investigated.The1nd to 2nd instars larvae development well, the developmental period 3nd to 5nd instars larvae at 24 were shorter than 28,and the 5nd instars larvae all dead at 20 . the survival rate of oviposition rate,hatching rate and survival rate at 山东农业大学硕士学位论文 5 24were higher at 28,the development duriation of female pupa is shorter than that of male pupa. The development duriation from eggs to adults were 349.58.15 days on the average,which the period of eggs,Larvars,pupas and adluts stage were 117.220.9days184.9218.56days,12.651.09days and15.60 3.85days respectively. 9 Field survey that the males can be found earlier female about 15 days.Male pupation in the mid-September,late September to early October was the female pupation period.The time of the rising in labrotory and observtion results were unform. Bacteria strains of intestine of P. analis Ten bacteria strainswere isolated from the intestine of the 5 th instar larvae of Py rocoelis analis Fabricius, and were identified as Escherichia, Chryseom onas,Actinobacillus,Morganella,Listeria,Aureobacterium,Microbacterium,Ter rabacter,Bacillus and Flavibacterium based on bacterialmodality,dyeing reaction,cultural characteristics,physiological characteristics and biochemical reactions. Key words: firefly; P.analis; biology; reflexed bleeding; luminescent organs ; Bacteria strains 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 6 引引 言言 1 1 生物发光与发光生物生物发光与发光生物 1 1.1 1 生物发光生物发光 生物发光是由光细胞或光细胞所组成的光器官产生，生物体在神经 控制下，通过细胞发生了生化反应。在自然界中，生物发光是一种普遍 的自然现象，并非生物的基本生理功能，而是生物体所特有的一种生理 特性(刘流等，2003)。 根据发光方式的不同，生物的发光现象可分为三种： 受辐射诱导 的光诱导发光； 与细胞分裂和死亡、细胞癌变、细胞内和细胞间的信 息传递与功能调节、生物氧化、解毒作用、光合作用等生命的不可缺少 的重要过程相联系的超微弱发光； 由生物体内特殊系统发出的功能化 学发光。 根据生物体不同，生物发光大致分为6类：第类为细菌类 （Bacteria）底物在催化循环中形成还原型核黄素磷酸盐和醛，再与荧光 素和氧作用生成激发态的络合物，络合物断裂发出蓝绿色光(Abu-Sound et al.,1993；Wilson The structure of the luciferase B 1.2 发光生物发光生物 生物发光(bioluminescence)是自然界活体生物自身发光的现象，具有 这一现象的生物称作发光生物。自然界中具有发光生物的种类约有 40- 50 个生物类群，分布在生物四界即原生生物界 Monera、真菌界 Fungi、 植物界 Plantae 和动物界 Animalia 的 11 个门中。 发光昆虫分布于弹尾目 Collembola、同翅目 Homoptera、双翅目 Diptera 和鞘翅目 Coleoptera。这些类群在长期进化过程中演化出特殊的 身体构造发光器官(photogenic organs 或 luminous organs)。发光器官 或在雌雄两性均有,或仅发生在雌虫或不成熟的形态(幼虫或蛹期),分布 于从头部到腹部的任何部位。发光昆虫主要集中在鞘翅目，通常将这些 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 8 发光鞘翅目昆虫统称为发光甲虫(luminousbeetles)。 发光甲虫主要分布在叩甲总科 Elateroidea 的萤科 Lampyridae、雌光 萤科 Rhagophthalmidae、光萤科 Phengodidae 和叩头虫科 Elateridae。也 有的分布在叩甲总科稚萤科 Drilidae，目前发光类群已移至萤科、雌光萤 科或光萤科。此外隐翅虫总科 Staphylinoidea 的隐翅虫科 Staphylinidae 也 有发光种类存在。 萤科昆虫,俗称萤火虫(firefly)(狭义),是最常见的发光甲虫, 已知 2 000 多种，分布于南极洲外的各大洲；其绝大部分总类的幼虫均可发光, 而成虫则包括发光和不发光种。萤火虫的发光器官在腹部腹面，雄性通 常 2 节，雌性通常 1 节。发光波长 538582 nm。 广义的萤火虫还包括雌光萤科，雌光萤科因发光虫态限于雌成虫及 幼虫而得名,其在外部形态及发光行为等方面都与萤科很相似。已知 30 多种，分布于亚洲。 光萤科的发光虫态也限于雌成虫和幼虫，但其发光器官分布与萤火 虫不同，常呈胸节和腹节背面后侧缘点状(spot-like)结构或体节背面的发 光带(luminous bands)。雄成虫为典型甲虫，具有羽状触角用以感受雌性 激素，无发光器。 叩头虫科是常见甲虫，Pyrophorinae 亚科的 3 属即分布于热带和亚热 带美洲的 Pyrophorus、新赫布里底群和斐济群岛的 Photophorus 及智利的 Campyloxenus。发光叩头虫的发光器官有两类，最显著一类位于前胸背 板后侧角的卵圆型点状发光器官，发淡绿色光；另一类位于第 1 腹节的 心型发光器官，仅在飞行或鞘翅展开时可见，发橙色光(刘流等，2003； 李学燕等，2006) 。 1 1.3 3 生物发光功能生物发光功能 生物体发出的光就其功能来讲，主要是寻找配偶和传递信息、引诱捕 食、恐吓、迷惑和防御敌人等，其中萤火虫中的大多数种类能通过光信 号传递出丰富的信息，甚至有些雌虫可以伪装其他种类雌虫发出求爱信 号，最终而将这些吸引而来的雄虫吃掉。与这些雌虫同类的雄虫有时也 山东农业大学硕士学位论文 9 会伪装出这种雌虫想要捕食的那种雄虫所发出的信号，以吸引雌虫过来 捕食，而进行交尾(Wood et al.,1989；Babu Grouquist et al.，2006；Vencl，2004；Branham 萤亚科包含 窗萤属(Pyrocoelia) 、短角窗萤属(Diaphanes) 、锯角萤属(Lucidina) 、 栉角萤属(Vesta) 、黑脉萤属( Pristolycus) 、巨萤属(Lamprigera)等 6 属; 弩萤亚科包含弩萤属(Drilaster) 、垂须萤属(Stenocladius)等 2 属;双栉角 萤亚科仅双栉角萤属(Cyphonocerus) 1 属（陈灿荣,1999）。目前在我国 还没有形成独立的完善的分类体系。 2.2 防卫行为防卫行为 2.2.1 色彩模式色彩模式 自然界中的许多昆虫都能通过拟态或保护色对天敌起警戒作用，从 而使自己远离敌害，保护自己(Guiford 2003)， 蛹是为了抵御敌害的攻击和警戒。 萤火虫成虫两性交流中的闪光信号起源于鞘翅目的幼虫阶段，最初 起警戒天敌的作用，由于萤科昆虫在幼虫阶段不能进行生殖，所以萤科 幼虫发出的光信号并不是两性交流的信号，而是一种警戒潜在天敌的信 号(Branham 张剑飞、王林玲，2002；秦伟，王维，2007)，近年来，随着微生 态理论及其实践范围的不断扩大和对资源昆虫生产技术及害虫生物防治 技术研究的不断深入，以微生态学理论为指导，开展的昆虫肠道微生态 环境与其营养生理关系的研究范围也在不断扩大，涉及到了桑粒肩天牛、 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 18 日本龟蜡蚧、蝙蝠蛾、小蠊、斑衣蜡蝉、黄粉虫与黑粉虫、中华真地鳖、 东亚飞蝗、等诸多经济昆虫和农林业害虫种群(贝绍国等，2005；刘玉升， 张丽等，2006；刘玉升, 陈艳霞等，2006；刘玉升， 李明立，2007；刘 玉升，叶保华等，2007)。 昆虫肠道微生物的研究，不但有利于昆虫资源的开发利用，而且有 利于从昆虫肠道这一特殊环境中获得特殊功能的细菌资源。同时，可以 通过检测肠道微生物区系的变化测定一些特殊影响因素的作用，并在重 要经济昆虫的生产中研制、应用微生态制剂。人为的控制或改良昆虫肠 道微生态环境，以实现害虫的生物防治，促进微生态制剂的研制及其在 昆虫生产学中的应用。 4 4 课题研究的目的和意义课题研究的目的和意义 窗胸萤Pyrocoelia analis Fabricius属于窗萤属Pyrocoelia Gorham ，该 属记载于1880年，主要分布在古北区，已记录60余种，中国大陆约20余 种，目前，国内外对窗萤属的报道不是很多(Mcdermot 1964，1966；Jeng 1999a，1999b)。 窗胸萤主要分布在中国大陆地区，但无详细的描述及相关后续方面 的研究。其幼虫主要取食陆生蜗牛，是灰巴蜗牛（Bradybaena ravida Benson）和同型巴蜗牛（Bradybaena similaris Ferussac）的重要天敌之一， 同时它可以取食钉螺，通过控制钉螺来控制血吸虫的发生危害，从而为 防治血吸虫节省大量的药物防治成本，并在很大程度上控制了血吸虫的 蔓延，具有极强的生物防治价值；窗胸萤的成虫具有雌雄二型，幼虫和 成虫个体较其他种类的萤火虫要大，发光器也比较大，可以作为提取荧 光素酶及荧光素的重要生物来源，具有较大的经济价值；其成虫发绿光， 且光色强、明亮，并带动了世界生态旅游业的发展，具有较高的观赏价 值；另外，它可以作为生态环境的一个指示物种，用来监测环境的好坏， 有较高的生态价值。 但是，由于近几年来由于人类对环境过度的开发和破坏；人工光源 带来的冲击；河流、沟渠水泥化所引起的危机；农药的使用；水污染造 成环境的劣化；外来物种的入侵以及人为捕捉等原因，在一定程度上， 造成了窗胸萤栖地环境恶化，种群数量急剧下降。努力营造一个适应萤 山东农业大学硕士学位论文 19 火虫栖息的环境并建立专门的复育场所已经成为目前需要解决的重要问 题之一。 本文以窗胸萤为研究对象，研究了其形态、生物学包括成虫的求偶 和生殖习性、幼虫的捕食行为，记录了不同温度下窗胸萤发育特征，同 时，研究了窗胸萤幼虫的肠道细菌类群。旨在为研究窗萤属系统学及相 关后续研究提供参考，为实现该类资源昆虫的自然保护、人工繁殖和工 厂化生产及为窗胸萤的有效利用和保护提供一定的理论和实验依据。 材料与方法材料与方法 1 1 供试材料供试材料 1.1 供试虫源供试虫源：窗胸萤（Pyrocoelis analis Fabricius）幼虫、成虫采自山东 泰山、沂水、邹城地区的河流、水库的附近草地及小型灌木丛中。幼虫 每日以灰巴蜗牛（Bradybaena ravida Benson）和同型巴蜗牛 （Bradybaena similaris Ferussac）活体喂养，喷水保湿，室温条件下饲养， 每 2 天检查并移除被取食剩下蜗牛空壳，补充活的蜗牛，羽化成虫以 5 %蜂 蜜水溶液饲养，成虫交配产卵后，收集所有的卵粒，放入 51冷藏箱 中保存。 1.2 培养基及制作培养基及制作 NA 培养基、NB 培养基、PDA 培养基、金氏培养基 B (KB 培养基)（陈天寿，1995） 。 1.3 试验仪器试验仪器 GXZ-128 智能型人工气候箱（宁波江南仪器厂） BXY-128 冷藏箱（宁波江南仪器厂） GXY 型智能光照培养箱 SPX 智能光照培养箱 YQX 型厌氧培养箱 CASIO DSC-V7 型数码相机 解剖刀、游标卡尺、镊子、医用剪刀、胶布 窗胸萤生物学及其幼虫肠道细菌的研究 20 2 研究方法研究方法 2.1 萤火虫资源调查及鉴定方法萤火虫资源调查及鉴定方法 2006-2007 年从 4 月至 10 月在山东省的泰山、沂水及邹城等地区采 集萤火虫标本。采集方法主要利用捕虫网进行人工捕捉。 所有采集到的萤火虫标本都带回实验室进行整理，制作和鉴定。标 本的鉴定参照台湾产萤火虫成虫亚科与属级检索表及图谱。 2.2 窗胸萤生物学特性窗胸萤生物学特性 2.2.1 形态特征形态特征 卵 在解剖镜下观察其颜色、形状并测量其直径。 幼虫 用游标卡尺测量各龄幼虫的体长、体宽 蛹 在解剖镜下观察蛹的形态 成虫 测量雌雄成虫的体长、体宽、前胸背板长和宽、鞘翅长和宽。形态 指标：雄成虫体长是指前胸背板长度（PL）和鞘翅长度（EL）之和；体 宽（BW）是指鞘翅的最大宽度（EW） ；雌雄成虫前胸背板宽度（PW）指前 胸背板最宽处的测量值；由于雌成虫体壁较柔软，鞘翅和膜翅退化，实 验中全部测量其酒精浸泡标本，所以，雌成虫体长是指前胸背板顶端到 腹部末端之间的长度。 2.2.2 生活史生活史 通过野外调查和室内饲养，记录实验室内窗胸萤各虫态的生长发育情 况，从而观察出窗胸萤生活史。 2.2.3 生活习性生活习性 卵及发育卵及发育 调查幼虫在野外的孵化时间；室内饲养观察幼虫发育的过程及特征。 幼虫发光及捕食。 化蛹及羽化化蛹及羽化 （1）化蛹特征 野外调查和室内饲养相结合，观察幼虫化蛹特点。室内 山东农业大学硕士学位论文 21 观察记录幼虫发光器官到成虫发光器官的发育变化过程。 （2）羽化节律观察 室内将蛹单头饲养于玻璃培养皿中，观察其羽化行 为。分别记录每天羽化的雌雄成虫的时间。 成虫求偶行为与繁殖力成虫求偶行为与繁殖力 待老熟幼虫羽化后，将其单头置入玻璃培养皿中，记录雌萤的体长、 体宽，并将当日羽化的雌萤与野外采集的雄萤进行配对，24 小时后取出 雄萤。观察交配后的雌虫的产卵行为，记录雌萤的每日产卵量和产卵期。 反射性出血反射性出血 取 20 头刚羽化成虫，从羽化到死亡期间，每天用剪刀或镊子对窗胸 萤进行适度的机械刺激，记录成虫反射性出血的位点。 2.2.4 温度对窗胸萤发育的影响温度对窗胸萤发育的影响 （1）试验方法 采用 GXZ-128 智能型人工气候箱（宁波江南仪器厂） ， 设置 20、24、283 个温度处理，误差为1，相对湿度为 805 %， 光周期 L:D=14：10。 将室内保存在冷藏箱中的卵用毛笔挑出，放入铺有湿润卫生纸的玻璃 培养皿中，每个温度三个重复，每个重复 50 粒卵，待卵