国家重点基础研究发展计划（973计划）项目申报书-针刺对功能性肠病的双向调节效应及其机制

项目名称：针刺对功能性肠病的双向调节效应及其机制首席科学家：朱兵 中国中医科学院针灸研究所起止年限：2011.1至2015.8依托部门：国家中医药管理局二、预期目标系统阐明穴位双向调节效应的临床疗效及其相关的生物学原理，为现代针灸学基础理论的建立奠定科学基础。以针灸临床理、法、术、效规律为主线，系统阐明机体状态、穴位固有特性以及不同针刺方法在决定针刺双向调节效应中的作用规律及其机制。调虚实、平阴阳是针灸临床治疗的重要理论，反映的是针灸具有恢复机体稳态的“双向调节效应”，该效应是在经络腧穴理论指导下，根据单穴及配穴的功能特性，通过穴位组合及刺激方法来实现的。机体和靶器官状态是选穴的重要依据，穴位的组合和刺激方法是决定疗效的关键因素。其意义在于揭示穴位功能和机体机能状态的相关规律，为解决穴位的双向调节效应奠定科学基础，明确穴位配伍的协同、拮抗关系和双向调节规律，形成建立在科学基础上的穴位组方原则，以指导临床和提高临床疗效。围绕上述的关键科学问题，选择功能性肠病为切入点，以针灸传统理论、针灸临床实践以及现代研究证据为指导，采用系统生物学、脑科学、基因敲除技术等多学科结合的方法手段，系统研究针灸双向调节效应的科学机制。阐明穴位功能和机体机能状态的相关性的规律，揭示针灸双向调节的规律和机制，探讨穴位配伍的机制及其生物学基础，阐述对针灸学科发展具有普适性规律的双向调节理论，指导临床和进一步提高疗效。三、研究方案本项目选择针灸临床疗效确切、诊断和评价指标明确的临床常见病“功能性肠病（功能性腹泻、功能性便秘）”作为研究的切入点，围绕“针灸具有“调和阴阳”的双向调节效应”的假说，系统研究针灸的双向调节效应的理、法、术、效的规律和相关的生物学基础。阐述“针灸调整和维持机体“稳态系统”的双向调节效应的临床规律及相关的生物学基础”这一针灸学的关键科学问题。本项目建立针刺双向调节效应数据采集与分析系统, 具备远程协同工作功能。实现数据定性、定量分析功能；综合查询与分析报表紧密结合、流程化数据提取和形象化表达等。将采取健康人体、病人以及动物多层次、多穴位、多指标、系统研究的方法，观察针刺治疗功能性腹泻和功能性便秘的双向调节的治疗效应，采用神经科学、分子生物学、基因技术、生物信息学等科学理念和方法，揭示这种效应的生物学基础，归纳提升针灸学现代理论。针灸对脏腑病变具有恢复稳态平衡的双向调节效应，腧穴与相同节段神经支配的内脏器官在交感神经控制下组成一个相对紧密联系的结构功能性单元；围绕这种结构功能性单元的异节段神经支配区域经穴形成一个可能通过副交感神经通路发挥相悖效应的功能性集元。单元经穴和集元经穴共同构建躯体传入信息调整和平衡内脏功能的稳态系统。副交感神经活动偏亢的病症主要取单元穴位，交感神经活动偏亢的病症主要取集元穴位。功能性便秘和功能性腹泻是肠道传输功能低下和亢进所出现的两种病变过程；前者是由于交感神经紧张、副交感神经兴奋状态降低，导致肠道传输功能低下引起；后者是由于副交感神经兴奋亢进，导致肠道传输功能过强引起。相应的功能性集元穴位（我们选择：曲池、上巨虚）可加强副交感神经兴奋，具有促进肠传输的功能，达到治疗功能性便秘的目的；功能性单元穴位（我们选择天枢、大肠俞）可兴奋节段性交感神经，抑制副交感神经，具有降低肠传输的功能，达到治疗功能性腹泻的作用。单元穴位或集元穴位间的组合存在协同效应；单元与集元穴位组合却可能出现拮抗作用。这是针灸双向调节效应发挥的生物学基础。这一基础得以明确，则可以为针灸临床疗效的提高、针灸临床规律的掌握提供指导原则和科学基础。具体研究方案见各课题任务书。前二年：建立动态、多指标穴位内脏效应数据采集与分析平台和临床及科研基地。并在此基础上，揭示穴位功能和机体机能状态的关系的规律性，开展针刺不同组合穴位组方对功能性腹泻和功能性便秘的临床观察研究。完成针刺不同穴位对肠运动的双向调节效应研究。拟发表30-40篇学术论文，其中争取在SCI源刊上发表论文8篇左右。后三年： 主要完成针刺不同组合穴位组方对功能性腹泻和功能性便秘的临床观察研究。完成针刺不同穴位对肠道功能性紊乱变化的双向调节作用与自主神经功能的关系和穴位对肠道功能性病治疗作用与药物剂量强度关系的量化研究此部分工作将发表论文35-45篇，其中争取在SCI源刊发表论文10篇左右，并编撰研究专著1部。四、年度计划第一年研究内容：1 开展项目启动的各项准备工作、项目研究数据平台的构建。2 完成各临床研究中心伦理委员会审批手续；完成临床试验注册；完成临床试验研究者工作手册、标准操作规程（SOP）、CRF表的制定；完成临床研究人员培训、考试；启动临床研究；成立临床研究质量控制小组；制定临床研究统计计划书。3 进行动物实验研究准备工作，包括采购相关实验器材、动物引种及繁殖、动物实验环境的完善、电针预试验、实验研究人员的培训等。必要时与国外相关机构开展合作，进行实验条件完善及人员培训。4 研究健康志愿者和功能性肠病患者穴位敏感度的变化，采用Electronic Von frey检查穴区的触觉敏感度，温度测定仪测定穴区的温度敏感度，Weber静态两点分辨觉实验方法检测各敏化穴位和非敏化穴位两点感觉分辨阈的变化关。5 建立动态、多指标穴位内脏效应数据采集与分析平台。并在此基础上，研究穴位功能和机体机能状态的关系的规律性，开展针刺不同穴位对肠运动的双向调节效应研究、针刺不同组合穴位组方对胃肠运动所产生的协同作用和拮抗作用研究、2 受体基因敲除对针刺双向调节功能影响的研究工作。预期目标1 完成项目启动的各项准备工作，召开项目启动会议。初步建立动态、多指标穴位内脏效应数据采集与分析平台。2 获得各临床研究中心伦理委员会批准文件；取得临床试验国际统一注册号；制作成册研究者工作手册、标准操作规程（SOP）、CRF表；召开临床研究人员培训会，组织培训、考试；发放考核合格者结业证书；召开临床研究启动会；提交临床研究质量控制小组名单；提交临床研究统计计划书。3 完成动物实验研究准备工作，使实验条件符合研究需要，研究人员掌握相关的技术。确定实验相关参数，成功获得相关模型动物，4 确定针刺不同穴位对肠功能调节效应的基本特征（调节趋向、调节量）。5 确定健康志愿者和功能性肠病患者穴位敏化现象。6 完成2 受体基因敲除对针刺双向调节功能影响的部分研究工作。7 发表研究论文6篇，SCI论文1篇。第二年研究内容：1 完成针刺对功能性便秘、腹泻双向调节作用各40%的临床病例收集；完成量-效关系研究40%的临床病例收集。2 观察测定敏化穴区致痛物质的分布和含量，探讨致敏穴位组织是否存在致敏生物活性物质的改变。3 在实验动物分别研究针刺功能性单元穴位（天枢、大肠俞）对肠道运动的抑制作用，与不同剂量的阿托品抑制肠道运动的效应作比较，量化针刺强度等同于多大的药物剂量。4 观察样本100例，系统研究针刺不同穴位对肠道运动的影响。观察不同取穴对肠道运动的调制强度与规律，探讨不同穴位的双向调节效应的规律。建立实验动物的造模，观察病理模型的针刺双向调节效应。5 进一步研究穴位功能和机体机能状态的关系的规律性，开展针刺不同组合穴位组方对胃肠运动所产生的协同作用和拮抗作用。在实验动物采用球囊和埋藏电极法记录肠内压力和肠电的改变，同时记录内脏大神经和迷走神经活动，观察不同穴位刺激在调节肠道运动的同时对自主神经系统的效应。6 开展2 受体激动剂和拮抗剂对针刺双向调节作用影响的研究工作，同时察脊髓侧角的诱发电位及相关信号物质的变化。7 准备中期检查预期目标1 提供与年度计划任务相应数量的CRF表资料。2 明确针刺穴位有双向调节效应。在不同的生理病理情况下，针刺引起的效应是不同的，但这种效应都是纠正机体机能活动向正常平衡与稳态状态方向的良性调节。3 揭示功能性肠病患者穴位敏化穴位的局部组织细胞化学特征4 明确针刺穴位可能有协同和拮抗作用的双向效应。探讨这种协同作用和拮抗作用的穴位组合云和的生物学原理，为临床穴位组学奠定科学基础。5 完成针刺双向调节与交感神经功能关系的研究任务。完成脊髓侧角（交感初级中枢）介导电针双向调节作用的研究。6 完成研究论文14-18篇。SCI论文1篇7 汇总相关数据，进行项目研究总体分析，完成中期总结和评估。第三年研究内容：1 完成针刺对功能性便秘、腹泻双向调节作用各40%的临床病例收集；完成量-效关系研究40%的临床病例收集。2 研究内脏病理情况下“穴位”感觉敏化度的变化及相应组织深部微理化环境的变化，特别是与感受器敏化相关的物质变化，阐明其在穴位从沉寂到敏化过程中的作用。研究导致穴位敏化的受体机制。 3 研究针刺功能性集元穴位（曲池、上巨虚）对肠道运动的促进作用，与不同剂量的乙酰胆碱促进肠道运动的效应作比较，量化针刺强度等同于多大的药物剂量。4 观察样本100例，研究针刺不同强度电针对肠道运动的影响和对肠道运动的调制机制与规律，探讨植物神经系统在针刺的双向调节效应的作用。同时研究孤束核增强和抑制神经元与胃肠运动亢进与迟缓的关系。5 研究穴位配伍协同和拮抗效应与内脏大神经和迷走神经活动的关系，观察不同穴位刺激在调节肠道运动的同时对自主神经系统的效应。6 采用激活不同组织感受器或传入神经纤维的电针方法刺激穴位，观察对肠道运动的影响，明确针刺效应与穴位不同组织感受器之间的关系。7 开展M2、M3 受体基因敲除对针刺双向调节功能影响、M受体激动剂和拮抗剂对针刺双向调节作用影响的研究工作，同时观察脊髓侧角的诱发电位及相关信号物质的变化。预期目标：1 提供与年度计划任务相应数量的CRF表资料2 揭示功能性肠病疾病动物模型穴位敏化的定位、组织细胞化学特征；揭示穴位敏化的受体机制。3 明确植物神经系统在针刺的双向调节效应的作用。阐述孤束核神经元活动与胃肠运动变化之间的关系4 明确针刺穴位可能有协同和拮抗作用所涉及与植物神经系统的关系；以及这种协同和拮抗作用与经络或神经节段之间的关系，为临床穴位组学提供科学数据5 完成针刺双向调节与副交感神经功能关系的研究及脊髓侧角（副交感初级中枢）介导电针双向调节作用的研究。6 汇总相关数据，进行项目总体进程分析。7 完成研究论文16-18篇。SCI论文3-4篇。第四年研究内容：1. 完成针刺对功能性便秘、腹泻双向调节作用各20%的临床病例收集；完成量-效关系研究20%的临床病例收集。2. 研究穴位敏化反应与纤维直径的关系，推论穴位激活相关的神经类型。3. 应用腺苷受体或胶质细胞特异性缝隙连接蛋白（Cx43）基因敲除动物建立功能性便秘和腹泻模型，采用不同刺激强度电针（腹泻：天枢、大肠俞；便秘：曲池、上巨虚），应用MRI观察针刺强度、治疗效应与大脑皮层之间的内在联系。4. 研究调节结肠运动特异性的物质（CRF)在功能性肠病的变化、蛋白的表达以及针刺不同穴位对其影响，分析针刺调节结肠活动的分子生物学机制。 5. 采用胃黏膜应变片电极记录肠道活动，分析与肠消化、运动相关的生物活性物质（如胃动素、胃泌素等）的变化，观察不同穴位刺激对肠道消化、运动的影响和对排便功能的作用。6. 开展Trpv1受体基因敲除对针刺双向调节功能影响、Trpv1受体激动剂和拮抗剂对针刺双向调节作用影响的研究工作。预期目标：1. 提供与年度计划任务相应数量的CRF表资料2. 揭示功能性肠病疾病动物模型穴位敏化的外周敏化机制3. 明确在针刺的双向调节效应中的相关生物活性物质的变化和相关的分子生物学基础。阐述这些物质变化与胃肠运动之间的关系。4. 进一步明确针刺穴位可能有的协同和拮抗作用与穴位不同组织感受器之间的关系；以及这种协同和拮抗作用与经络或神经节段之间的关系。为穴位组学的建立提供科学数据。5. 完成伤害性感受器与针刺双向调节作用的关系研究、电针双向调节中伤害性感受器功能状态与初级中枢关系的研究。6. 发表研究论文18-20篇，SCI论文3篇。7. 汇总相关数据，完善研究平台。第五年研究内容：1 临床研究资料数据管理（汇总、录入、审查等）以及数据统计分析。2 开展内脏病变和穴位敏化相关的脊髓机制。结合以往研究探讨穴位的生理和病理特性，揭示穴位反映病邪的诊断方面的特异性规律。3 研究不同大小动物针刺效应与针刺的数量之间的关系，研究单个穴位刺激对肠道运动调节强度之间的差异，通过不同大小动物的研究，了解选穴数量与疗效之间的对应关系。4 研究针刺协同和拮抗作用与穴位不同的解剖学结构的相关性。5 补充整体研究计划所未完成的所有内容，整理全部的研究数据，提炼和整合研究结果，阐明针灸双向调节的规律及生物学基础。6 结合国内外相关研究结果，系统整理，完成学术专著。7 完成项目验收及结题工作。预期目标：1 提交临床研究统计分析结果。2 揭示功能性肠病疾病动物模型穴位敏化的中枢敏化机制。3 研究证实针刺对机体的影响具有明确的双向调节作用，即通过触发机体自身固有的调节系统，实现其防病治病、增强免疫机能等作用，实现本项目的总体研究目标。4 撰写发表论文20-24篇，其中SCI论文6-9篇。专著1部。5 完成数据汇总、项目验收结题工作一、研究内容我们提出的研究假说是：针灸具有“调和阴阳”的双向调节效应。拟解决的关键科学问题是：针灸调整和维持机体“稳态系统”的双向调节效应的规律及其相关的生物学基础。以针灸临床理、法、术、效规律为主线，系统阐明机体状态、穴位固有特性以及不同针刺方法在决定针刺双向调节效应中的作用规律及其机制。调虚实、平阴阳是针灸临床治疗的重要理论，反映的是针灸具有恢复机体稳态的“双向调节效应”，该效应是在经络腧穴理论指导下，根据单穴及配穴的功能特性，通过穴位组合及刺激方法来实现的。机体和靶器官状态是选穴的重要依据，穴位的组合和刺激方法是决定疗效的关键因素。其意义在于揭示穴位功能和机体机能状态的相关规律，为解决穴位的双向调节效应奠定科学基础，明确穴位配伍的协同、拮抗关系和双向调节规律，形成建立在科学基础上的穴位组方原则，以指导临床和提高临床疗效。围绕上述的关键科学问题，选择功能性肠病为切入点，以针灸传统理论、针灸临床实践以及现代研究证据为指导，采用系统生物学、脑科学、基因敲除技术等多学科结合的方法手段，系统研究针灸双向调节效应的科学机制。阐明穴位功能和机体机能状态的相关性的规律，揭示针灸双向调节的规律和机制，探讨穴位配伍的机制及其生物学基础，阐述对针灸学科发展具有普适性规律的双向调节理论，指导临床和进一步提高疗效。主要研究以下3方面的内容。1 功能性肠病相关穴位敏化现象的规律研究，为解决穴位的双向调节效应奠定科学基础。“五脏有疾也，应出十二原”。说明脏腑有病可在体表一定部位出现病理反应。也说明穴位的功能和机体的机能状态密切相关。这是穴位存在的基础。因此，本研究拟采用临床观察和实验相结合研究肠道病变时体表反应点及与常用治疗肠道疾病穴位的关系：（1）肠道疾病时体表牵涉痛敏化点分布与穴位的关系；研究内脏病理情况下“穴位”感觉敏感度的变化及相应组织深部微理化环境的变化，特别是与感受器敏化相关的物质如缓激肽、P物质、5-HT、K+浓度及相关生物活性物质的变化，阐明这些微理化环境改变在穴位从生理状态下的相对沉寂到病理情况下的唤醒（敏化）过程中的作用。（2）采用直结肠扩张刺激（CRD，20-100mmHg，分级的扩张出现分级的疼痛反应），然后经静脉注射Evans blue引起体表皮肤兰点渗出反应的分布与相关穴位的关系。在此基础上，用蛇毒选择性破坏坐骨神经的A-类纤维，或用辣椒素选择性破坏坐骨神经的C-类纤维（或用新生大鼠辣椒素处理），观察腿部Evans blue渗出反应的变化，并与健侧作对照。研究穴位敏化反应与纤维直径的关系，推论穴位激活相关的神经类型。（3）采用肠道局部损伤或伤害性刺激引起神经源性炎性反应后经尾静脉注射Evans兰引起皮肤兰点渗出反应点的分布与相关穴位的关系；（4）用微电极记录延髓全身会聚神经元的活动，用von Frey 毛检测体表各部位刺激对神经元反应的敏感度，然后用上述方法造成内脏局部伤害性刺激；在此基础上观察神经元对穴位的敏化变化。（5）研究导致穴位敏化和采用不同的受体（缓激肽，P 物质, VR1, 辣椒素, ACE和前列腺素等）阻断剂和激动剂，基因敲除伤害感受器（VR1受体或辣椒素受体）后，探讨不同受体对穴位敏化现象的影响，研究与穴位敏化相关的受体机制。2 针刺对功能性肠病双向调节的疗效与效应规律研究采用多中心随机对照临床研究方法，观察不同穴位配伍方案针刺治疗功能性肠病（功能性便秘和功能性腹泻）的临床疗效。以疾病症状的改善、肠电图、大便的频度、粪便的形状、肠道微生态的系统生物学、直肠顺应性检测，脑功能影像变化、QoL、自主神经系统活动为指标，通过不同穴位及穴位配伍方法治疗，系统评价其临床疗效。依据针灸经络理论及临床经验，按照针灸临床选穴原则，设立：俞募配穴（功能性单元取穴）组：天枢、大肠俞（双侧）；合治内腑的循经远道配穴（功能性集元取穴）组：曲池、上巨虚（双侧）；合募俞配穴（单元+集元取穴）组：天枢、大肠俞、曲池、上巨虚（单侧）；敏化穴治疗组：选择经检测具有敏化现象的4个穴位进行临床观察研究；标准药物治疗组。（6）观察探讨相同的针刺方法刺激相同的穴位是否对腹泻和便秘两种不同机能状态均可产生调节效应（双向调节），以阐明机体机能状态在针刺双向调节效应中的作用规律。（7）探讨相同的针刺方法刺激不同的穴位是否对腹泻和便秘两种不同机能状态均可产生调节效应（双向调节），以阐明穴位固有特性在决定和影响针刺双向调节效应中的作用及其规律；以阐明机体机能状态不同、穴位不同在决定和影响针刺双向调节效应中的作用及其普适性规律。（8）在功能性腹泻和便秘患者观察不同针刺强度电针（分别采用低于（约0.6-0.8倍阈值）RIII反射和引起RIII反射的阈值电流作穴位电刺激；前者仅激活粗传入纤维，后者能激活细的传入纤维）刺激功能性单元穴位（天枢、大肠俞）治疗效应、效应强度与药物治疗效应强度的比较，量化针刺所产生的临床疗效。（9）分别在功能性腹泻患者和便秘患者，观察在针刺得气与非得气的情况下，应用MRI观察针刺得气、治疗效应以及大脑皮层之间的内在联系。（10）在实验动物分别研究针刺功能性单元穴位（天枢、大肠俞）对肠道运动的抑制作用，与不同剂量的阿托品抑制肠道运动的效应作比较，量化针刺强度等同于多大的药物剂量。在实验动物分别研究针刺功能性集元穴位（曲池、上巨虚）对肠道运动的促进作用，与不同剂量的乙酰胆碱促进肠道运动的效应作比较，量化针刺强度等同于多大的药物剂量。为针刺临床的效应量化提供参考系数。3针刺双向调节效应的生物学基础研究以不同功能性肠道疾病动物模型系统研究针刺不同穴位对肠道功能的双向调节效应，明确是否同一穴位对不同生理病理状态下的肠道有双向调节效应，或者是不同穴位才能表现出双向调节效应。（11）肠道力值变化和感觉尺度改变的研究：选择健康志愿者，从感觉（传入）和运动（传出）两方面评价在躯体各部位穴位刺激前后的肠道力值变化和感觉尺度的改变。根据经脉-脏腑相关联系原则选穴，并以异经穴位、同神经节段穴位、异神经节段穴位作比较。各个穴位分别采用低于（约0.60.8倍阈值）RIII反射和等同RIII反射的阈值电流作穴位电刺激（前者仅激活粗传入纤维，为非伤害性的；后者能激活细的纤维，属伤害性的），观察对肠道感觉和运动的影响。系统研究针刺不同穴位对肠道运动的影响。观察不同取穴对肠道运动的调制强度与规律，探讨不同穴位的双向调节效应的规律。（12）系统研究针刺的双向调节效应，明确是否同一穴位对不同生理病理状态下的内脏器官有双向调节效应，或者是不同穴位才能表现出双向调节效应。观察不同穴位刺激在调节肠道运动的同时研究对不同自主神经系统种类活动的影响，阐述哪类自主神经与促进肠道运动有关，哪类与抑制肠道运动有关。（13）阐明哪类感受器和神经纤维介导了针刺的双向调节效应，为临床提供相应的针刺参数。在T2节段切断脊髓后观察电针效应的变化，研究细的传入纤维（C-纤维）与脊髓上中枢（如孤束核）调控的关系。（14）系统观察针刺这些促进和抑制降肠道运动穴位对孤束核“增强”和“抑制”神经元活动的调节效应，以阐明穴位双向调节作用及调节机制。（15）以结肠-孤束核-迷走运动背核通路为中心，观察调节结肠运动特异性的物质（Corticotropin releasing factor，CRF)在功能性肠病水平的变化、蛋白的表达以及针刺不同穴位对其影响，分析针刺调节结肠活动的分子生物学机制。 （16）在单纯腹泻和便秘的动物模型，采用胃黏膜应变片电极记录肠道活动，分析与肠消化、运动相关的生物活性物质（如胃动素、胃泌素等）的变化，观察不同穴位刺激对肠道消化、运动的影响和对排便功能的作用。采用基因组学和蛋白组学技术，观察功能性肠病结肠差异基因、差异蛋白表达，以及针刺不同穴位后的影响，分析针刺双向调节的系统生物学机制。（17）观察不同穴位的组合（天枢、大肠俞；曲池、上巨虚；天枢、大肠俞、曲池、上巨虚）对胃肠顺应性、感觉和胃肠运动的变化影响，研究不同穴位组合刺激对胃肠感觉和运动调节的协同性和拮抗性。为临床穴位配伍和穴位组方提供有价值的资料。（18）观察不同穴位刺激在调节肠道运动的同时对自主神经系统的效应。在确定单个穴位作用的基础上，研究两个以上穴位同时针刺的效应，观察协同穴位是否存在进一步加强所固有的生物学效应和饱和效应。然后进一步研究拮抗穴位所产生的效应有何变化？是否具有局部的优势原则？并进一步探讨穴位的协同和拮抗作用的机制和生物学原理。（19）采用激活不同组织感受器或传入神经纤维（分别刺激皮肤感受器、肌梭、腱器官、关节）的电针方法刺激穴位，观察对肠道运动的影响，阐明哪类组织感受器和神经纤维介导了针刺的双向调节效应，哪些装置可能介导针刺的协同或拮抗作用，则为针灸临床选择不同的针刺方法提供又一新的依据，有一定的临床指导意义。（20）选用交感神经肾上腺素能 2 受体特异性基因敲除的动物模型（交感神经肾上腺素能2受体主要分布于消化道平滑肌上），该模型由于去除了交感神经系统对肠道运动施加的抑制作用，从而表现肠道运动的加强（可出现腹泻症状）。研究不同穴位对肠道运动的调节作用的机制。由于功能性单元穴位对肠道运动起抑制作用是通过交感神经系统发挥其特异效应的，在交感神经肾上腺素能2 受体特异性基因敲除的动物模型这部分功能将不会出现或明显减弱。并与基因未改变的同类野生小鼠（wild type）对照。（21）选用副交感神经毒蕈碱乙酰胆碱能 M2M3 受体特异性基因敲除的动物模型（毒蕈碱乙酰胆碱能 M2M3 受体主要分布于消化道平滑肌上），该模型由于去除了副交感神经对肠道运动施加的兴奋作用，从而表现肠道运动的抑制（可出现便秘症状）。研究不同穴位对肠道运动的调节作用。由于功能性集元穴位对肠道运动起促进作用是通过副交感神经系统发挥其特异效应的，在副交感神经毒蕈碱乙酰胆碱能 M2M3 受体特异性基因敲除的动物模型这部分功能将不会出现或明显减弱。并与基因未改变的同类野生小鼠（wild type）对照。（22）选用正常大鼠，观察针刺不同穴位对肠道运动的调节的基础上，给予2受体激动剂和拮抗剂，研究该受体参与针刺双向调节肠道运动的程度。选用正常大鼠，观察针刺不同穴位对肠道运动的调节的基础上，给予M受体激动剂和拮抗剂，研究该类受体参与针刺双向调节肠道运动的程度。（23）敲除伤害感受器基因（Trpv1）后，研究不同穴位对肠道运动的调节作用。由于引起体表-内脏联系的神经系统主要是通过细的传入神经发挥作用的，破坏Trpv1将可能影响针刺效应的发挥。选用正常大鼠，观察针刺不同穴位对肠道运动的调节的基础上，采用特异性辣椒素受体阻断、激动剂，观察该感受器参与针刺双向调节作用的程度。（24）研究穴位与肠道联系的脊髓神经与脊髓侧角交感神经联系的神经生物学基础，有可能发现躯体骨骼肌运动与交感神经调节内脏运动的体表运动-内脏运动反射，这在生命科学中是一种全新的躯体-内脏联系通路。本项目建立针刺双向调节效应数据采集与分析系统, 具备远程协同工作功能。实现数据定性、定量分