黄海胶州湾海区腹泻性贝毒素的特征和时间变化规律研究-硕士论文

上海 硕士 题 昔 变化规律研究 T h eP r o f i l e sa n dS e a s o n a lV a r i a t i o no f 英文题目：D i a r r h e t i cS h e l l f i s hP o i s o ni nm e 坍口D Z 乃D “ 专业： 研究方向： 姓名： 指导教师： _ 争一 B a yY e l l o wSe a ( C h i n a ) 动物遗传育种与繁殖 水产品质量安全与检测技术 杨守国 王清印研究员李兆新副研究员 二。一。年六月六日 kIIIlI，lIf ，。LlI-rllIII 上海海洋大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位 论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除 文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集 体己经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我 对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：物了目 R 期：弘届年月，) 只 上海海洋大学学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密 口 ，在年解密后适用本版权书。 本学位论文属于 不保密 学位论文作者签名：7 物、寻国 闩期： ，p 年月f R 甲 漕， j 腑 名 F雠啤 币刃 撕 导缈 临日 同 上海海洋大学硕士学位论文 黄海胶州湾海区腹泻性贝毒素的特征和时间变化规律研究 T h eP r o f i l e sa n dS e a s o n a lV a r i a t i o no fD i a r r h e t i cS h e l l f i s hP o i s o n i nt h eJ i a o z h o uB a yY e l l o wS e a ( C h i n a ) 学位论文完成时间： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 上海海洋人学硕十学位论文 黄海胶州湾海区腹泻性贝毒素的特征和时间变化规律研究 摘要 腹泻性贝毒素( D i a r r h e t i cs h e l l f i s hp o i s o n i n g ，D S P ) 是较为常见的一类藻毒素，通 常由甲藻产生。其组分包括大罔软海绵酸( O k a d a i ca c i d ，O A ) 、鳍藻毒素 ( D i n o p h y s i s t o x i n s ，D T X s ) 、蛤毒素( P e n c t e n o t o x i n s ，P T X s ) 和虾夷扇贝毒素 ( Y e s s o t o x i n s ，Y T X s ) 等。其中O A 和D T X s 可导致人们发生严重的胃肠功能紊乱， 出现腹泻、呕吐和腹痛等中毒症状。尽管O A 和D T X s 并无显著的急性毒性效应， 且迄今为止尚没有发生中毒死亡事件，但其能够抑制蛋白磷酸酶的活力，致使蛋 白过磷酸化，是一类潜在的肿瘤促进因子，其长期毒性效应值得关注。P T X s 不会 造成消费者急性中毒，能够引起肝损伤，在强碱条件下分子结构易被破坏。Y T X s 对心肌细胞有毒害作用，对细胞磷酸二酯酶具有激活作用。 贝类的贝毒素污染不仪影响了消费者的健康，而且造成了我国贝类产品的出 口受限，已受到有关贸易国的严重关注。本研究主要建立了贝类中腹泻性贝毒素 的液相色谱串联质谱( H P L C M S M S ) 测试方法，并形成农业行业标准：测试了 黄海胶州湾海区贝类中腹泻性贝毒素的组成成分和含量水平；研究了该海区腹泻 性贝毒素的组成成分、含量水平和时I 、日J 动念变化规律；最后，进一步探讨了该海 区腹泻性贝毒素的产毒藻源。 贝类中腹泻性贝毒素的液相色谱串联质谱测试方法的建立。以甲醇提取贝类 样品中的腹泻性贝毒素，提取液浓缩后经S t r a t a I M X 固相萃取( S P E ) 柱净化处理， 处理液用H P L C M S M S 测定。结果表明，O A 和P T X 2 的检测线性范围为1 - 3 0 0 n g m L ，检出限分别为3g g k g 和2l r t g k g ，定量限分别为1 0p k g 和6 “k g 。当添 加水平为1 0g g k g 、5 0g g k g 、1 6 0g g k g 时，O A 的方法回收率为7 9 4 0 9 2 2 9 ： 当添加水平为6p g k g 、3 0i t g k g 、1 6 0g g k g 时，P T X - 2 的方法回收率为8 2 4 4 1 0 0 4 。该检测方法可同时检测O A 和P T X 2 ，具有较低的检出限和较高的准确度，可 满足我国对该类贝毒素的检测要求。 栉孔扇贝( C h l a m y s f a 鹏，f ) 、紫贻贝( M y t i l u se d u l i s ) 、长牡蛎( C r a s s o s t r e ag i g a s ) 和菲律宾蛤仔( R u d i t a p e sp h i l i p p i n a r u m ) 样品中腹泻性贝毒素含量的测定。2 0 0 9 年1 月至6 月分别在该海区采集上述贝类，检测发现，上述贝类中存在P T X 2 ， I I 上海海洋人学硕十学位论文 最高浓度为9 5g g k g ，最低在方法定量限( 6g g k g ) 以下，最高浓度仅为我国法 定限量值( 2 0 0g g k g ) 的5 ；上述贝类中存在O A ，但其含量较低，浓度在方法 定量限( 1 0I _ , g k g ) 以下。 黄海胶州湾海区腹泻性贝毒素的特征及其变化规律研究。运用主动吸附的方 法( S o l i dp h a s ea d s o r p t i o nt o x i nt r a c k i n g ，S P A T T ) 从海水中提取腹泻性贝毒素，然 后利用H P L C M S M S 测定提取物中毒素的成分和含量。研究发现，在我国黄海胶 州湾海区，存在软海绵酸( O A ) 和蛤毒素( P T X 2 ) ，其浓度范围分别为0 3 8 7 4 n g g 和0 7 6 5 3 - - 2 2 8 9n g g 。经检测分析，海水中蛤毒素含量在2 0 0 9 年6 和7 月份 已处于较高水平，自7 月2 3 同起丌始下降，7 月3 lR 降至最低水平，后又出现波 动：从6 月l8 同至7 月2 3 同海水中软海绵酸浓度处于较低的水平，7 月3 l 同丌 始升高。研究海区海水温度与海水中毒素含量的相关性发现，当海水水温处于 1 9 2 2 1 5 时，海水中P T X 一2 的含量较高，而O A 的含量较低；当海水水温处于 2 1 5 2 6 3 时，海水中P T X 一2 的含量降低，而O A 的含量升高。该研究不仅全面 剖析了该海区贝类毒素的存在特征，同时也为制定合理的贝类收获期提供依据。 腹泻性贝毒素的产毒藻源探讨。利用抽滤超声振荡法处理水样，用O 4 5g m 醋酸纤维滤膜过滤，用N i k o nE 8 0 0 显微镜观察滤膜上的微藻，并拍摄微藻图片。 研究表明，该海区存在小球藻、圆筛藻、浮动弯角藻、锥形多甲藻、渐尖鳍藻、 圆形鳍藻等浮游生物。初步确认，此海域中O A 和P T X 2 的产毒藻源为渐尖鳍藻。 关键宇：腹泻性贝毒素，软海绵酸，蛤毒素，液相色谱串联质谱法，主动吸附 上海海洋人学硕十学位论文 T h eP r o f i l e sa n dS e a s o n a lV a r i a t i o no fD i a r r h e t i cS h e l l f i s hP o i s o n i nt h eJ i a o z h o uB a yY e l l o wS e a ( C h i n a ) A b s t r a c t D i a r r h e t i cs h e l l f i s hp o i s o n i n g ( D S P ) p r o d u c e db yd i n o f l a g e l l a t ea r eam o r e c o m m o nt y p eo fa l g a et o x i n s T h ec o m p o n e n t si n c l u d eo k a d a i ca c i d ( O A ) ， d i n o p h y s i s t o x i n s ( D T X s ) ，p e n c t e n o t o x i n s ( P T X s ) a n dy e s s o t o x i n s ( Y T X s ) ，e t c A m o n g t h o s et o x i n s ，O Aa n dD T X sc a nl e a dt os e r i o u sg a s t r o i n t e s t i n a ld y s f u n c t i o n ，d i a r r h e a ， v o m i t i n ga n da b d o m i n a lp a i n ，e t c A l t h o u g hO Aa n dD T X sd on o th a v es i g n i f i c a n t l y a c u t et o x i ce f f e c t s ，a n dn op o i s o n i n gi n c i d e n t sh a v eh a p p e n e dS Of a r , t h e yc a ni n h i b i t p r o t e i np h o s p h a t a s ea c t i v i t y , a n dm a k et h ep r o t e i n ss u p e r p h o s p h o r y l a t e d T h e ya r ea c l a s so f p o t e n t i a lt u m o rp r o m o t i n gf a c t o r s S ot h el o n g t e r mt o x i ce f f e c t so ft h o s e t o x i n s a r ew o r t hc o n c e r n i n g P T X sc a nn o tc a u s ea c u t et o x i cp o i s o n i n gt oc o n s u m e r s ，b u tt h e y c a nm a k ei n t e s t i n u mt e n u ei nw a t e ra n dt h e i rm o l e c u l a rs t r u c t u r e sa r ee a s i l yd a m a g e di n a l k a l ic o n d i t i o n s Y T X sh a v ea na d v e r s ee f f e c to nt h ec a r d i a cm u s c l e S h e l l f i s hp o i s o n i n gh a sp o t e n t i a lh a r z a r dt os h e l l f i s hc o n s u m e r s T h i sp r o b e l mi s a l s oab l o c kt os h e l l f i s hi n t e r n a t i o n a lt r a d ef o rC h i n a I th a sa t t r a c t e ds e r i o u s l yc o n c e r n f r o mc o u n t r i e sw h i c hh a v eb i gi n t e r n a t i o n a lt r a d ew i t hC h i n a T h i ss t u d ye s t a b l i s h e da d e t e r m i n a t i o nm e t h o do fD S Pi ns h e l l f i s hb yl i q u i dc h r o m a t o g r a p h y - t a n d e mm a s s s p e c t r o m e t r y ( H P L C - M S M S ) ，w h i c h w o u l df o r m u l a t eat e s t i n gs t a n d a r do ft h e M i n i s t r yo fA g r i c u l t u r e T h ec o m p o n e n t s ，c o n c e n t r a t i o n o fD S Pi ns e a w a t e ra n d s h e l l f i s hs a m p l e sf r o mJ i a o z h o ub a yw e r es t u d i e d T h es e a s o n a lv a r i a t i o no fD S Pi nt h i s s e aa r e aw a sa n a l y z e d T h er e s o u r c e so ft o x i ca l g a ew h i c hp r o d u c eO A a n dP T X sw e r e i n v e s t i g a t e d T h ed e t e r m i n a t i o nm e t h o do fO Aa n dP T X 一2i ns h e l l f i s hb yH P L C M S M Sw a s e s t a b l i s h e d T o x i n si ns h e l l f i s hs a m p l e sw e r ee x t r a c t e dw i t hm e t h a n 0 1 T h ee x t r a c tw a s c o n c e n t r a t e da n dc l e a n e du po nS t r a t a I M Xs o l i dp h a s ec o l u m n s T h et r e a t i n gs o l u t i o n w a st e s t e db yH P L C M S M S I nt h i ss t u d y t h el i n e a r i t yo fO Aa n dP T X 一2w e r ei nt h e r a n g ef r o m1t o3 0 0p g k g T h ed e t e c t i o nl i m i t so fO A a n dP T X 一2w e r e31 a g k ga n d2 g g k g ，a n dt h eq u a n t i t a t i v el i m i t sw e r e10g g k ga n d6g g & g ，r e s p e c t i v e l y F o rm u s c l e I V 上海海洋人学硕十学何论文 s a m p l e st h er e c o v e r i e so fO A w e r er a n g i n gf r o m7 9 4 0 t o9 2 2 9 a tt h ec o n c e n t r a t i o n o f10p g k g 5 0 _ t g k ga n d16 0g g k g T h er e c o v e r i e so fP T X 一2w e r er a n g i n gf r o m8 2 4 4 t o10 0 4 a tt h ec o n c e n t r a t i o no f6 t g k g ，3 0r t g 瓜ga n d16 0r J ，g k g T h ed e t e c t i o n m e t h o dc o u l dd e t e r m i n eO Aa n dP T X 2a tt h es a m et i m ew i t hah i g hd e t e c t i o nl i m i ta n d a c c u r a c y ，w h i c hc o u l ds a t i s f yt h er e q u i r e m e n t so fs h e l l f i s ht o x i ns u p e r v i s i o n T h ec o n t e n t so fP T X 2a n dO Ai nC h a m y sf a r r e r i ，M y t i l u se d u l i s ，C r a s s o s t r e a g i g a sa n dR u d i t a p e sp h i l i p p i n a r u mw e r et e s t e d T h eh i g h e s tc o n c e n t r a t i o no fP T X 2 w a s9 5p g k g w h i c hw a s5 o fC h i n e s el e g a ll i m i t2 0 0p g k g O Aw a sf o u n db u ti t s c o n c e n t r a t i o nw a sl e s st h a nt h eq u a n t i t a t i v el i m i t s T h ep r o f i l e sa n di t ss e a s o n a lv a r i a t i o no fD S P i ns e a w a t e rf r o mJ i a o z h o ub a yw e r e s t u d i e d As o l i dp h a s ea d s o r p t i o nt o x i nt r a c k i n gm e t h o dw a st a k e nt os a m p l eD S Pf r o m s e a w a t e r T h ec o m p o n e n ta n dc o n t e n t r a t i o no fe x t r a c t e dt o x i n sw e r ed e t e r m i n e db y l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y - m a s ss p e c t r o m e t r y O Aa n dP T X 一2w e r ef o u n d i nt h es e aw a t e r O Aw a sd e t e c t e da tc o n c e n t r a t i o n sr a n g i n gf r o m0t o3 8 7 4n g g P T X - 2w a sd e t e c t e da t c o n c e n t r a t i o n sr a n g i n gf r o m0 7 6 5 3t O2 2 8 9n g g I nJ u n ea n dJ u l y2 0 0 9 ，t h el e v e l so f P T X 2i ns e aw a t e rw e r eh i g h F r o m2 3 mJ u l y , t h el e v e l so fP T X - 2w e r ed e c r e a s i n g T h e l e v e l so fP T X 2w e r el o wO n31mJ u l y T h el e v e l so fO A w e r el o wf r o m18 “J u n et o2 3 仇 J u l y T h el e v e l s o fO Aw e r ei n c r e a s i n gf r o m31 恤J u l y T h er e l a t i o n s h i pb e t w e e n t e m p e r a t u r ea n dt h ec o n c e n t r a t i o no f t o x i n si ns e aw a t e rw e r ef o u n d W h e nt h es e a w a t e r t e m p e r a t u r ew a sb e t w e e n19 2t o2 1 5 t h el e v e l so fP T X 一2i ns e aw a t e rw e r eh i g h ， b u tt h el e v e l so fO Ai ns e aw a t e rw e r el O W W h e nt h es e a w a t e rt e m p e r a t u r ew a s b e t w e e n21 5t o2 6 3 t h el e v e l so fP T X 2i ns e aw a t e rw e r el o w , t h el e v e l so fO A i n s e aw a t e rw e r eh i g h T h ec h a r a c t e r i s t i c so fD S Pi n t h ew a t e r sw e r ea n a l y z e d c o m p r e h e n s i v e l y , o nt h eo t h e rh a n d ，t h eb a s i sw a sp r o v i d e dt om a k es h e l l f i s hh a r v e s t i n g d a t ei no r d e rt oa v o i d et o x i nc o n t a m i n a t i o n T h ei n v e s t i g a t i o no ft h er e s o u r c e so ft o x i ca l g a ew h i c hp r o d u c eO A a n dP T X sw a s d o n e W a t e rs a m p l e sw e r et r e a t e dw i t hf i l t e r - s u p e r s o n i co s c i l l a t i o nm e t h o da f t e rb e i n g f i l t e r e db y0 4 5L L mc e l l u l o s ea c e t a t em e m b r a n ef i l t e rm e m b r a n e ，m i c r o a l g a ew a s o b s e r v e da n dp h o t o g r a h e db yN i c k o nE 8 0 0m i c r o s c o p e C h l o r e l l a ，C o s c i n o d i s c u s r a d i a t u s E u c a m p i az o o d i a c R s ，P e r i d i ? n i u m c o n i c u m ，D i n o p h y s i sa c u m i n a t a a n d D r o t u n d a t aw e r ef o u n di nt h es e a w a t e r T h eD a c u m i n a t aw h i c hp r o d u c e dO A a n d P T X 2c o u l dc o n f i r m e V 上海海洋人学硕+ 学位论文 K e yw o r d s ：D i a r r h e t i cs h e l l f i s hp o i s o n ，O k a d a i ca c i d ，P e c t e n o t o x i n s ，L C M S M S ； P o s i t i v ea b s o r p t i o n V I 上海海洋人学硕十学位论文 目录 文献综述l 0 1 研究背景2 0 1 1 我国贝类产业状况2 O 1 2 影响我国贝类产业发展的主要问题2 0 2 贝毒素概述一3 0 2 1 贝毒素的定义3 0 2 2 贝毒素的分类3 0 3 腹泻性贝毒素研究进展5 0 3 1 腹泻性贝毒素的理化性质5 0 3 2 腹泻性贝毒素的毒理学特性6 0 3 3 腹泻性贝毒素的产生机理7 0 3 4 腹泻性贝毒素的来源7 0 3 5 腹泻性贝毒素的分布8 0 3 6 腹泻性贝毒素在各种贝类中的含量8 0 4 腹泻性贝毒素的检测技术8 0 4 1 免疫测定法9 0 4 2 高效液相色谱法9 0 4 3 高效液相色谱串联质谱检测法1 0 0 4 4 毛细管电泳法1O 0 4 5 胶束毛细管电动色谱1 0 O 4 6 小鼠生物测定法1 0 0 5 腹泻性贝毒素相关法规1 1 0 5 1 欧美国家的法规h 1 1 0 5 2 腹泻性贝毒素的限量标准1 l 0 6 研究目的、意义和研究内容1 3 0 6 1 目的和意义1 3 0 6 2 研究内容13 第一章 腹泻性贝毒素液相色谱串联质谱测试方法的建立1 4 1 1 材料与方法1 5 1 1 1 仪器与设备1 5 1 1 2 试剂15 1 1 3 样品的处理1 5 1 1 4 高效液相色谱一质谱分析16 1 1 5 标准曲线的绘制1 7 1 2 结果1 7 1 2 1 线性范围18 1 2 2 检出限和定量限18 1 2 3 回收率及变异系数2 4 1 2 4 定性3 2 1 2 5 选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量3 2 上海海洋人学硕十学位论文 1 2 6 实际样品测定3 2 1 3 讨论3 3 1 3 1 提取与净化条件3 3 1 3 2 固相萃取柱的选择3 4 1 3 3 方法的检出限和定量限3 4 1 4 小结3 4 第二章栉孔扇贝、紫贻贝、长牡蛎和菲律宾蛤仔样品中O A 和P T X 2 的测定3 6 2 2 贝类样品的采集3 7 2 3 样品的检测3 7 2 4 结果3 7 2 4 讨 仑3 8 2 4 1 胶州湾四种贝类对O A 和P T X 2 的富集能力3 8 2 4 2 贝类中O A 和P T X 2 的含量特征3 9 2 5 小结3 9 第三章胶州湾海区腹泻性贝毒素的特征及其变化规律研究4 0 3 1 材料与方法4 0 3 1 1 仪器与设备4 0 3 1 2 试剂4 1 3 1 3 实验方法4 1 3 2 结果4 3 3 2 1P T X 2 和O A 标准物质溶液质谱分析4 3 3 2 2 海水中O A 和P T X 2 质谱分析4 4 3 2 3 海水中O A 和P T X 2 的含量4 5 3 2 4 实验期问海水水温4 8 3 3 讨 仑5 0 3 3 1H P 2 0 大孔吸附树脂对O A 和P T X 2 的吸附及净化处理5 0 3 。3 2 海水中O A 和P T X 2 的组分特征5 1 3 3 3 海水中O A 和P T X 2 的浓度变化特征5l 3 3 4 影响海水中P T X 2 和O A 含量的因素6 4 3 4 小结6 6 第四章 腹泻性贝毒素的产毒藻源探讨：6 7 4 1 材料与方法6 7 4 1 1 材料6 7 4 1 2 方法6 7 4 2 结果与讨论6 8 4 2 1 抽滤超声振荡法6 8 4 2 2 产毒浮游植物的显微观察6 8 4 2 3 不同藻类与D S P 毒素的关系7 0 4 3 小结7 0 结 仑7 1 参考文献7 2 致谢7 8 2 上海海洋人学硕十学仲：论文 文献综述 随着生活水平的提高，人们对优质水产品的需求不断增加。扇贝、贻贝、牡 蛎等甲壳类海洋食品营养丰富，深受人们的喜爱。而且，这些品种也同渐成为重 要的水产品国际贸易品种。我国贝类养殖业发展迅速，养殖规模不断扩大，养殖 产量迅猛增加。2 0 0 8 年，贝类总产量达到1 1 2 2 5 6 力吨，占世界贝类生产总量的 6 0 以上I lJ 。中国已成为世界上贝类养殖大国。但是，近年来，由于环境污染严重， 赤潮发生的频繁和强度增大，养殖水域中各种有毒藻类增多，滤食性贝类、草食 性鱼类摄食这些藻类而富集毒素，这些贝类和鱼类又通过食物链直接地或者间接 地把毒素传递到海洋N g L 动物、海鸟和人类，给人类及其它生物造成了巨大的健 康隐患。因此，藻类及其毒素已成为海洋食品安全工程关注的焦点。 在海洋中，大部分微藻是无毒的，只有少部分微藻具有毒性。而有些微藻在 它们生命周期的大部分阶段是无毒的，在某些阶段会产生毒素。在全世界4 0 0 0 多 种海洋浮游藻中，约有2 6 0 余种能形成赤潮，其中7 0 多种能产生毒素。某些藻类 的大量出现可使海水变红，成为赤潮。而某些藻类虽然产生毒素，但并不使海水 变色，这与产毒藻的种类及海水中藻的密度有关。数千年来，人类已知有毒藻类 可以造成人类疾病，最早关于有毒藻爆发的文献记录可见圣经中：“河水全部变 成红色，鱼类死亡，埃及人不能饮用河中水”。 在我国的多数海区均发现了有毒藻类。这给养殖贝类造成了严重的食品安全 隐患，对人类健康和养殖业形成了潜在的威胁。一旦发生贝类受毒素污染，必须 采用相应的安全管理措施，包括关闭贝类养殖区，停止采集，发命禁止食用相关 海区贝类的公告等。在经过检测、确认毒素降低或消除后方可开放贝类养殖区， 允许贝类上市。 贝毒素的污染不仅仅是中国当自订所面临的水产品安全问题，也是全世界共同 面临的问题。监控海水中贝类毒素、揭示贝类毒素的特征和含量是关系到水产品 安全的重要的基础研究。同时，也对保障我国水产品的质量，保护消费者健康， 维持养贿业的持续发展以及增强我国水产品在国际市场上的竞争力等都非常重 要，具有重要的社会意义和经济意义。 上海海洋人学硕十学何论文 O 1 研究背景 0 1 1 我国贝类产业状况 我国属于世界贝类养殖大国，随着科学研究和养殖技术的不断发展，贝类养 殖已经成为沿海地区海水养殖业的支柱之一。2 0 0 8 年，贝类总产量达到1 1 2 2 5 6 力吨，占世界贝类生产总量的6 0 以上。养殖产量1 0 5 8 1 8 力吨，占贝类总产量的 9 4 3 。牡蛎、扇贝、蛤、贻贝、蛏、蚶和鲍等。其中牡蛎产量3 3 5 万吨，蛤3 0 5 8 力吨，扇贝1 1 3 7 万吨，占养箔贝类总产量的7 1 3 。近年来，我国水产品出口 贸易取得了举世瞩目的成就。2 0 0 7 年我国贝类出口2 9 7 力吨，创汇9 4 亿美元。 同比分别增长1 7 和3 8 t2 | 。目前，贝类主要出口国家为美国、同本、韩国，出 口贝类主要是鲜活贝类、加工冷冻品，以及小包装的调制品。 然而，我国水产品大量出口的同时也遇到了前所未有的困难和挑战。自1 9 9 7 年7 月1 日以来，欧盟一直禁止我国贝类进入欧洲市场。1 9 9 9 年，欧盟水产品考 察团对中国贝类卫生控制方面的评估报告中建议中国“官方贝类控制计划”从海 区分类到产品出口必须付诸实施；要求至少6 个月海区分析资料的官方分析结果 和评估。目前我国的贝类还无法出口欧盟。美国明确要求只有取得“国家贝类卫 生计划( N S S P ) ”的国家或地区以及经过认可的海域和企业方可向美国出口生的贝 类。目前，中国还无法向美国出口生的贝类产品。发达国家利用技术措施限制我 国水产品进入国际市场，使得水产品出口形势步履维艰。所以，从源头控制贝类 毒素污染，保障贝类产品的食用安全性，打破发达国家的贸易壁垒，是亟待解决 的问题，具有重大的经济效益和社会效益。 0 1 2 影晌我国贝类产业发展的主要问题 目前影响我国贝类产业发展的主要问题有：养殖贝类良种的培育；养贿结构 和布局不合理：养殖病害频发；产业综合效益亟待提高；贝类产品存在安全隐患【3 J 。 而影响我国贝类安全生产的主要因素有：贝毒素，化学污染物，重金属以及有害 微生物等。 目前出口水产品加工企业所实施的H A C C P 体系基本控制了生产环节所引入 的以致病性微生物为代表的生物危害。物理危害也比较容易控制，比如采用金属 探测器基本可以避免会属的危害发生，采用光照、手摸等方法可以避免鱼刺、玻 璃等物理危害。贝毒素和化学危害是最难控制的危害，也是目前影响我国水产品 2 上海海洋人学硕十学位论文 出口的主要原因。 0 2 贝毒素概述 O 2 1 贝毒素的定义 众所周知，水产品中某些毒素与海洋中的有毒藻有关。所谓贝毒素是海洋中 的微藻所产生的一类具有毒性的生物活性物质的总称。它们不是由贝类自身产生， 而是由其它海洋微生物在贝类中积存形成，由于毒素本身不是藻细胞基础代诩 所 必须的物质，所以很多毒素被认为是藻类代谢的次级产物。由于这些毒素通常是 通过海洋贝类或鱼类等生物媒介造成人类中毒，因此这些毒素常被称作贝毒或鱼 毒。 0 2 2 贝毒素的分类 0 2 2 1 按临床中毒症状分类 人们由于食用含有毒素的贝类而造成的临床中毒症状有麻痹、腹泻、记忆缺 失和神经麻木等。传统上，根据临床中毒症状，毒素被相应地划分为五大类：麻 痹性贝毒素( P a r a l y t i cS h e l l f i s hP o i s o n ，P S P ) 、腹泻性贝毒素( D i a r r h e t i cS h e l l f i s h P o i s o n ，D S P ) 、记忆缺失性贝毒素( A m n e s i cS h e l l f i s hP o i s o n ，A S P ) 、神经性贝毒素 ( N e u r o t o x i cS h e l l f i s hP o i s o n ，N S P ) 和西加鱼毒素( C i g u a t e r aF i s hP o i s o n ，C F P ) ( 其 比较见表O 1 ) 。其中P S P 和D S P 是我国海洋赤潮生物中最为常见的两种贝毒素。 0 2 2 2 产生D S P 情况 近年束对我国部分海区贝毒素的调查显示【4 1 ，辽东湾、胶州湾等海域D S P 的 存在比较普遍。在胶州湾海域发现了D S P 的“肇事藻”之一渐尖鳍藻( D i n o p h y s i s a c u m i n a t a ) ；1 9 9 7 年秋至1 9 9 8 年春，广东海域多次赤潮发生期I 日J 的几种优势赤潮 藻类中也有利玛原甲藻( P 厂D 加c P 肋r “聊，f 胁口) 和具尾鳍藻( D f 门叩枷括c a u d a t e ) 1 5 】；中国 黄海、东海和南海均发现有具尾鳍藻【6 1 。到目前为止，尚未见人类因中腹泻性贝毒 而致死的报道，但它的分布范围广、发病率高，几乎所有发达国家都在本国海域 发现和检出了本类毒素。腹泻组分O A 及其衍生物一D T X 1 和D T X 3 还是肿瘤促 进因子，同时具有遗传毒性，可引致D N A 加合物的形成【7 1 。由于其潜在的药理作 用、生物活性和毒理机制，O A 被列入十大海洋生物毒素之列【8 1 。 表O 1 几种贝毒素的比较 上海海洋人学硕十学何论文 涡鞭毛藻、 作用丁N a + 3 0 m m 肺嘴膳感 肌肉觫媲、呼 脚素登黑。黧点一：妻篙羔雾誓纛篡 沟藻、塔马全球海域阻断神经及 。 ( P S P ) 尔原膝沟 肌肉细胞 颈部。手指和脚趾 麻痹引起的死 藻等N a + 内流 有针刺感头晕、亡发生于进食 加争人尔 软海绵酸_ 手I l3 0m i n 剑儿小时 腹泻性贝毒素 鳍藻属和 岸、亚洲、 鲭藻素抑制后，发现出现恶 慢性接触可能 智利、新西 会引起消化系 ( D S P ) 原甲藻属 兰以及欧洲蛋白磷酸酶心、呕吐、腹泻和磊兰毒“。 沽性 腹部疼撕等症状 一此地区 记忆缺失性贝 3 5 h 斤恶心、呕 毫拟菱形藻加拿人、欧作川丁- 神经 系 属洲和新两兰 递质受体 吐、腹泻、腹部瘁 ( A S P ) 挛 美国佛罗里 神经性贝毒素 达海岸、墨 短凯伦藻 ( N S P ) 两哥湾、欧 洲和新撕兰 作川- f N a + 通道伉点5 ， 诱导N a + 内 流 3 6 h 后感觉寒 冷、头疼、腹泻、 肌肉无力、关节 痫、恶心、呕吐 作川1 - N a + 症状发生在吃鱼 西加鱼毒素 太平洋和人鼍道位点5 斤1 2 2 4 h ，腹泻、 冈比甲藻诱导N a + 内 ( C T X ) 两洋 流，活化腹部疼痂、恶心、 一 呕吐 C 一+ 通道 对疼痛的反应 力降低，头晕 眼花、精神混 乱、短期记忆