肠癌B7-H1表达的临床意义及作用机制.ppt

肠癌B7-H1表达的临床意义及作用机制,研究背景,肿瘤微环境,A.还原论者认为肿瘤是由一群单纯的肿瘤细胞聚集而成的B.肿瘤是由肿瘤细胞和肿瘤基质构成的，肿瘤基质主要包括成纤维细胞、各种免疫细胞和新生血管上皮细胞等细胞类型。,肿瘤浸润免疫细胞几乎囊括了宿主免疫系统的所有成分：T淋巴细胞，B淋巴细胞，巨噬细胞，树突状细胞，肥大细胞等，形成一个肿瘤局部微环境下的免疫系统。其中的淋巴细胞成分被定义为肿瘤浸润性淋巴细胞（Tumorinfiltratinglymphocytes，TIL）,巨噬细胞被定义为肿瘤相关性巨噬细胞（Tumorassociatedmacrophagel，TAM）。,肿瘤微环境和免疫细胞,协同刺激分子和协同刺激信号,双信号B7/CD28超家族TNF/TNFR超家族协同刺激分子及其受体介导的信号途径在T细胞的活化和行使功能过程中发挥重要作用，正成为对临床疾病进行免疫干预最有希望的手段之一。,人B7-H1基因定位于9p24。属于免疫球蛋白超家族。其开放阅读框编码290个氨基酸由胞外IgV、IgC结构域、疏水性跨膜结构域、及胞内区组成。胞外段与B7-1、B7-2具有较高的同源性，分别达到20、15。B7-H1蛋白广泛表达于APCs，活化T、B细胞，巨噬细胞及一些非淋巴样组织。B7-H1通过与T细胞上的受体PD-1结合，负性调控免疫应答。,B7-H1分子概况,B7-H1分子概况,研究内容,1、分析人结直肠癌中B7-H1分子表达及T细胞的浸润情况2、探讨B7-H1信号对肿瘤浸润T细胞的作用机制,结直肠癌的发展过程,第一部分,人结直肠癌中B7-H1分子的表达及T细胞的浸润情况,实验方法,肠癌标本的收集及资料统计（收集结直肠癌标本112例）,免疫组化检测B7-H1的表达、CD3+T细胞及CD8+T细胞的浸润情况,结合患者临床病理参数进行相关性分析和生存分析,标本来源,标本取自2003年1月至2003年12月在苏州大学附属第四医院接受结肠直肠癌切除手术的112名患者的组织蜡块，收集患者的病理资料。所有病例经HE染色读片、病理诊断确认为结肠癌或直肠癌。患者年龄29-85岁，中位年龄62岁，所有患者术前均未接受放疗或化疗。同时选取10例癌旁正常组织作为正常对照。采用已确认B7-H1免疫组化染色阳性的乳腺浸润性导管癌组织作为阳性对照组织，采用扁桃体组织作为CD3抗体和CD8抗体免疫组化染色的阳性对照组织。,一、B7-H1分子在结直肠癌及正常组织中的表达,实验结果,肠癌组织中B7-H1分子的表达水平显著高于临近正常切端组织。（P0.001）,二、B7-H1在肠癌的表达情况和肠癌患者临床病理因素的相关性,三、B7-H1的表达与患者预后的关系,肠癌组织中B7-H1分子的表达水平与患者的临床预后显著相关，且B7-H1高表达的患者生存率显著低于低表达的患者。（P0.05）,四、CD3+T细胞、CD8+T细胞在肠癌组织的浸润与患者预后的关系,CD3+T细胞在肠癌组织浸润程度和肠癌患者的总体生存率密切相关，CD3+T细胞浸润高的患者其生存率较CD3+T细胞浸润低的患者升高（P0.01）。,五、肠癌CD3+T、CD8+T细胞的浸润情况和患者临床参数的相关性,六、肠癌CD3+T、CD8+T细胞的浸润程度与B7-H1分子表达水平的相关性,第一部分小结,1、B7-H1分子在肠癌组织中的表达显著高于正常组织，并且与肿瘤部位和Dukes分期显著相关；2、生存分析显示，肠癌患者的预后与B7-H1分子的表达水平呈负相关，与CD3+T细胞的浸润程度呈正相关，而与CD8+T细胞的浸润程度无显著相关性；3、B7-H1分子的表达水平与CD3+T细胞的浸润程度呈负相关；,第二部分,B7-H1信号对肿瘤浸润T细胞及其亚群的影响,实验方法,分析肿瘤患者外周血和组织中的T细胞亚群,及组织中Tregs与B7-H1的相关性,构建SW480/B7-H1+/-细胞，并与外周血CD4+T细胞共培养,检测刺激前后调节性T细胞（Tregs）的功能改变,一、肿瘤患者外周血和组织中的T细胞亚群,肿瘤患者外周血中T细胞总数比例较健康人变化不大，肿瘤组织中浸润的T细胞有所下降，但仍占浸润淋巴细胞总数的67.1，表明T细胞依然是抗肿瘤免疫应答的主要效应细胞。而无论在肿瘤患者外周还是组织中，CD4+T/CD8+T细胞比例均发生了倒置，同时CD4+CD25+Tregs比例也都较正常人显著上升。,实验结果,二、肿瘤浸润淋巴细胞中调节性T细胞（Tregs）与肿瘤细胞B7-H1的关系,三、SW480/B7-H1和SW480/Mock细胞上B7-H1分子和GFP报告基因的表达,四、肿瘤B7-H1信号促进CD4+Tregs的诱导产生,五、肿瘤B7-H1信号促进CD4+T细胞分泌TGF-和IL-10,第二部分小结,1、肠癌患者的组织及外周血中的Tregs比例都较正常人显著上升；2、成功构建了肠癌转基因细胞株SW480/B7-H1+/-；3、在CD3单抗和TGF-的共同作用下，SW480/B7-H1可诱导Treg的产生。,全文总结,1、肠癌组织较正常组织显著高表达B7-H1分子，且与患者的肿瘤部位和Dukes分期显著相关，提示B7-H1在肠癌的发生发展过程中起着重要的作用。2、肠癌组织中B7-H1的表达水平与CD3+T细胞的浸润程度呈负相关，且两者都与患者的预后显著相关，提示B7-H1分子可能通过下调肿瘤微环境中的浸润性T淋巴细胞，从而介导了肿瘤免疫逃逸。3、体外实验结果表明，B7-H1分子对Tregs的产生具有诱导作用，提示B7-H1还有可能通过诱导产生抑制性