微生物标本处理及药敏试验.ppt

微生物标本处理及药敏试验,广东医学院附属医院检验科,细菌室各种标本处理,1、细菌室标本接收后应及时处理：为什么？,细菌室各种标本处理,所有细菌室标本均要求2小时内送到细菌室进行处理。痰标本：不及时处理可导致痰液中的肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶现象而死亡。另外，痰液标本在室外放置过久，会导致口腔的杂菌生长和病人体内定植菌生长过快，而影响结果的准确性。,细菌室各种标本处理,血培养：采血后2小时内不及时放进血培养仪培养会导致假阴性。另外，采血后禁止将血培养瓶置4保存。,细菌室各种标本处理,无菌液体（包括脑脊液、胸腹水、心包积液、脓液和关节液等）：由于脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌对外界环境抵抗力很低，对寒冷和干燥均敏感，如不及时接种，病原菌可能死亡，导致培养阴性。,细菌室各种标本处理,尿液标本：由于尿液标本采集容易受到外生殖道正常菌群污染，而且尿液是细菌的最好培养基，因此，采集标本后应在2小时内处理完毕，否则置4冰箱保存，时间不能超过8小时。,细菌室各种标本处理,生殖道分泌物：由于淋球菌离体后，很快会自溶死亡；另外，生殖道标本采集容易污染外生殖道的正常菌群，如果不及时接种，会由于这些正常菌群大量繁殖，导致结果假阳性。,细菌室各种标本处理,大便标本：由于志贺菌属对理化因素抵抗力较弱，对酸性环境也较敏感，在粪便中由于其他菌属产酸可使本菌属的细菌在数小时内死亡。另外，霍乱弧菌对热，干燥，日光和酸均很敏感，同样离体后不及时处理，则容易死亡。,细菌室各种标本处理,常见标本接种及培养,痰培养结果判读,痰培养结果判读,痰培养结果判读,痰培养结果判读,细菌结果发出时间,细菌结果发出时间。一般标本的培养+药敏时间：34天。血液标本：7天(有菌生长即电话报告)。真菌培养+药敏：3天。,纸片扩散法（K-B）药敏试验,纸片扩散法（K-B）药敏试验,纸片扩散法（K-B）药敏试验,纸片扩散法（K-B）药敏试验,纸片扩散法（K-B）药敏试验,怎样才能做到正确选用抗菌药物进行药敏试验,抗菌药物分类（一）内酰胺类A、青霉素类抗生素1、青霉素G：主要使用在链球菌、脑膜炎双球菌、螺旋体、梭状芽孢杆菌等的感染。对葡萄球菌及许多革兰阴性菌如大肠杆菌等大多耐药（产生各种-内酰胺酶灭活青霉素G)。2、半合成耐酶青霉素（甲氧西林、苯唑西林等）：主要使用于产青霉素酶的葡萄球菌感染。3、半合成广谱青霉素：因对各种-内酰胺酶的稳定性差，临床使用逐渐减少。氨苄西林：对肠球菌、李斯特菌属优于青霉素阿莫西林：作用较氨苄强，常用HP治疗。哌拉西林：主要用于绿脓杆菌及肠杆菌科。主要作用革兰氏阴性杆菌的青霉素：美洛西林、替卡西林等。,B、头孢菌素类抗生素一代头孢菌素对G+菌（除肠球菌、MRSA外）有良好作用，G-菌作用差对-内酰胺酶稳定性差常用品种：头孢氨苄，头孢唑啉，头孢拉定头孢唑啉用于外科手术切口感染预防,二代头孢菌素兼顾G+及G-菌（铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、沙雷菌、枸橼酸杆菌、MRSA、肠球菌等无效）-内酰胺酶稳定性增加常用品种头孢呋辛、头孢克罗、头孢丙烯、头孢孟多（有肾毒、出血）,三代头孢菌素G-菌作用强，尤其是肠杆菌科细菌、奈瑟菌属、流感杆菌均有强大抗菌活性，但对G+作用大多较差，对肠球菌耐药。大多数-内酰胺酶高度稳定常用品种：头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢甲肟、头孢唑肟、头孢地嗪、头孢哌,四代头孢菌素比三代头孢菌素抗菌谱更广，活性更强。-内酰胺酶稳定更强。对G+球菌作用增强，对阴沟、枸橼酸杆菌强常用品种：头孢匹罗、头孢吡肟,头孢菌素类抗生素作用特点,非典型内酰胺类1、头霉素类：抗需氧菌作用与头孢菌素类似；对厌氧菌作用强；适用于需氧、厌氧的混合感染，如盆腔、腹腔、妇科感染。常用有：头孢西丁、头孢美唑、头孢替坦、头孢米诺。2、碳青霉烯类：抗菌谱最广，抗菌作用最强；对嗜麦芽窄食单胞菌及洋葱假单胞菌（伯克霍尔德）、黄杆菌等作用差。常用品种：亚胺培能、美洛培能、帕尼培能（克蓓宁）。3、单环类：对G-菌包括绿脓有强效，对G+菌、厌氧菌无效。主要品种：氨曲南。4、氧头孢烯类：拉氧头孢、氟氧头孢5、内酰胺酶抑制剂：克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦，如阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦。,（二）氨基糖甙类：常用有庆大霉素、丁胺卡那、妥布霉素和奈替米星等。属杀菌药，对G-菌有强效对部分G+菌（葡萄球菌）有效，对链球菌、肠球菌无效。对厌氧菌无效水溶性好，性质稳定。某些品种对结核及分枝杆菌有效。,（三）喹诺酮类是近年来发展最快的化学合成抗菌药物，作用于细菌的DNA旋转酶。对G+，G-菌均有较强的作用，对厌氧菌也有一定的作用。,喹诺酮类第一代：萘丁酸、吡哌酸.因副作用大已基本淘汰。第二代：诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星左旋氧氟沙星。用于肠道感染。第三代：司巴沙星、托氟沙星、加替沙星、格帕沙星。对肺炎球菌等革兰阳性菌活性增大。第四代：曲伐沙星、莫西沙星、克林沙星对革兰阳性菌和厌氧菌具强的活性大,喹诺酮类的适应证1.最适合用于肠道感染：如伤寒、痢疾、霍乱。2.对布氏杆菌、军团菌、结核杆菌也有效。3.对绿脓杆菌感染有效。一、二代喹诺酮对革兰阳性球菌无效，对厌氧菌、奴卡菌无效，对MRSA不如万古霉素。三、四代喹诺酮对革兰阳性球菌和厌氧菌有效,（四）大环内酯类,为快速抑菌药，对G-、G+菌抗菌活性不强。主要使用在内酰胺抗生素无效的非典型病原体：支原体、衣原体、军团菌、弯曲菌、某些厌氧菌、奴卡菌、分枝杆菌和弓形体等。,其他抗菌药物磷霉素：是化学合成的广谱抗生素、作用于细胞壁合成的早期，很少引起过敏。与-内酰胺类、氨基糖苷类有协同增效作用。万古霉素（去甲万古霉素）对G+菌有强效，对G-菌无效。替考拉宁：新的糖肽类抗生素，半衰期长（27-37h），一天一次给药，仅用于G+菌感染。,林可霉素类：林可霉素、克林霉素等：骨关节组织中浓度较高为其特点。但透过血-脑脊液屏障的能力差，脑组织浓度低。小于4岁儿童慎用，主要作用于G+菌。多粘菌素类：多粘菌素B，主要作用于G-菌。,四环素类1、由于目前常见致病菌对四环素类耐药现象严重，仅在病原菌对本品敏感时，方有应用指征。2、主要适用于支原体肺炎、衣原体感染、立克次体病、布氏杆菌病、霍乱、回归热。3、因影响影响牙齿和骨发育，8岁以下小儿、孕妇、乳妇禁用,不同抗菌药物的抗菌谱,抗菌药物G(+)球菌G(-)杆菌非典型菌大环内酯类+-+-内酰胺类+-氟喹诺酮类(新)+,细菌耐药性,MRSA和MRCNS的定义MRSA：耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌。MRCNS：耐甲