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蛋白水解酶活力测定,一、原理1、蛋白水解酶的概念专门催化蛋白质的肽键水解,生成游离的氨基酸和短肽的一类酶。2、酶活力的定义一定条件下(温度,pH,底物浓度等),酶催化某一化学反应的能力。其大小可用反应速度来表示。因此酶活力的测定也就是酶催化反应速度的测定。,蛋白水解酶活力测定,3、蛋白水解酶活力单位的定义在40及pH7.0条件下以酪蛋白为底物,每min水解产生1ug酪氨酸的酶量为一个活力单位。4、本实验的测定原理,酪蛋白,胰蛋白酶,短肽,蛋白质等,三氯乙酸,短肽,Folin-酚乙试剂,蓝色物680nm处具特征光吸收,OD值与肽含量(即酶活力)成正比,可据此进行比色测定。,过滤,蛋白水解酶活力测定,二、操作方法1、酪氨酸标准曲线的制作,参P1122、蛋白水解酶活力测定三、实验结果及处理1、制作酪氨酸标准曲线2、酶活力的计算由样品中测得的光密度(A)值,从酪氨酸标准曲线上查出相当于酪氨酸的质量(ug),即可按下式计算酶活力:,蛋白水解酶活力测定,Up:蛋白水解酶的活力单位数A:查得相当于酪氨酸的质量(ug)f:酶液的稀释倍数,
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