气相色谱法测定食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾及注意事项.pdf

Jul. 2016 CHINA FOOD SAFETY 79 分析与检测 食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山 梨酸、山梨酸钾的测定原理 食品试样酸化后，利用苯甲酸、 山梨酸易溶于乙醚的性质，用乙醚将 食品中的苯甲酸、山梨酸提取出来， 在气相色谱仪上进行分离测定，根据 标准曲线求出食品中苯甲酸、苯甲酸 钠、山梨酸和山梨酸钾的含量。 试剂 乙醚：不含过氧化物；石油醚： 沸程 3 0 6 0 ；盐酸；无水硫酸钠； 盐酸（1 1 ）：量取 1 0 0 m L 水，一 边摇动，一边缓缓加入 1 0 0 m L 盐酸， 混匀，冷却至室温备用。氯化钠酸性 溶液（4 0 g / L ）：称取 4 . 0 g 氯化钠， 加水溶解，并定容至 1 0 0 m L ，然后加 数滴盐酸（1 1 ）酸化。 气相色谱仪检测条件 色谱柱：固定液 A T 添加剂玻璃毛 细柱，柱长 1 5 m ，内径 0 . 5 3 m m ，液 膜厚度：1 . 0 0 m ；柱温：1 5 0 、 汽化温度：2 5 0 、检测温度 2 6 0 。 制备标准曲线系列 苯甲酸、山梨酸溶液标准物质 食品防腐剂苯甲酸溶液标准物质， 标准值 1 . 0 0 m g / m L 。 食品防腐剂山梨酸溶液标准物质， 标准值 1 . 0 0 m g / m L 。 制备苯甲酸、山梨酸混合标准使用液 分别准确吸取 0 . 4 m L 苯甲酸溶液 标准物质和 0 . 4 m L 山梨酸溶液标准物 质混合置于 1个 1 0 m L 容量瓶中，用 石油醚 _乙醚 ( 3 1 ) 混合溶剂稀释 至刻度，此标准混合使用液含苯甲酸 或山梨酸为 4 0 g / m L 。以此类推，再 分别准确吸取 0 . 8 、1 . 2 、1 . 6 、2 . 0 m L 和 2 . 4 m L 苯甲酸溶液标准物质和山梨 酸溶液标准物质，混合后置于一组 1 0 m L 容量瓶中，用石油醚 _乙醚 ( 3 1 ) 混合溶剂稀释并定容至刻度，混匀备 用。盖好瓶塞，防止溶剂挥发造成浓 度变化， 同时控制实验室温度为2 0 。 此标准混合使用液系列中，苯甲 酸或山梨酸的浓度分别为 4 0 、8 0 、 1 2 0 、1 6 0 、2 0 0 g / m L和 2 4 0 g / m L 。 同时，准备一个试剂空白使用液。 试样提取 （1 ）将试样预先混合均匀，备用。 （2 ）无水硫酸钠于 1 3 0 电热恒 温干燥箱中干燥 3 0 m in ，取出后于干 燥器中冷却至室温，备用。 （3 ）在万分之一电子天平上，于 2 5 m L 带塞量筒中准确称取 2 . 5 0 g 预 先混合均匀的试样，精确至 0 . 0 0 0 2 g 。 平行测定2 次， 因此平行称取试样2 份。 （4 ）分别于试样中加 0 . 5 m L 盐酸 （1 : 1 ）酸化、摇匀，第一次加入 1 0 m L 乙醚，盖好量筒塞，振摇 1 m in ， 静置 1 5 m in ，用吸管将上层乙醚提取 液吸入一个 1 2 5 m L 分液漏斗中，盖好 分液漏斗塞。第二次于酸化的试样中 加入1 0 m L 乙醚， 按照上述提取方法， 重复提取一次，合并乙醚提取液于分 液漏斗中。第 3 次于酸化的试样中加 入 5 m L 乙醚，再按照上述方法提取第 3 次，合并 3 次提取的乙醚于 1 2 5 m L 分液漏斗中。 （5 ）于提取的乙醚溶液中加入 5 m L 氯化钠酸性溶液（4 0 g / L ），洗涤乙 醚提取液，静置 1 5 m in ，分层，弃去 下层氯化钠酸性溶液。然后于提取的乙 醚溶液中再加5 m L 氯化钠酸性溶液 （4 0 g / L ），重复洗涤 1次，静置 1 5 m in ， 分层，弃去下层氯化钠酸性溶液。 （6 ）于干燥漏斗中放好滤纸，在 滤纸上加入事先干燥的无水硫酸钠 5 g ，将乙醚提取液缓缓放入，将无水硫 酸钠脱水后的乙醚滤入 2 5 m L 容量瓶 中，用乙醚定容至刻度，混匀。 （7 ）用单标线吸量管准确吸取 5 m L 乙醚提取液于 5 m L 带塞试管中， 置于 4 0 水浴上挥干，用单标线吸量 管准确加入2 m L 石油醚-乙醚( 3 1 ) 混合溶剂。 测定 依次分别进样 2 L 苯甲酸、山梨 酸标准混合使用液于气相色谱仪中，分 别测得标准系列苯甲酸、山梨酸的峰面 积，同时进样试剂空白使用液。以浓度 为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，分 别绘制苯甲酸、山梨酸标准曲线。 同时进样 2 L 试样提取液，分别 测得山梨酸和苯甲酸的峰面积，与标 准曲线比较定量。平行试样，分别进 样测定。 结果计算 试样中苯甲酸或山梨酸的含量按 式（1 ）进行计算。 1000 12 1000 22 A x V m V = （1 ） x 试样中苯甲酸或山梨酸的含 量，m g / k g ；A 试样提取液中苯甲酸 或山梨酸的质量，g ；2 加入石油 醚 -乙醚 ( 3 : 1 ) 混合溶剂的体积，m L ； 2 测定时进样的体积，L ；m 试样 的质量，g ；V 1 测定时吸取乙醚提取 液的体积，m L ；V 2 试样乙醚提取液 的总体积，m L 。 注意：计算结果保留3 位有效数字。 实验中的注意事项 检测结果换算的注意事项 （1 ） 144.12 1.18 122.12 = 所以换算系数是 1 . 1 8 。即实验结 果以苯甲酸钠报出时应乘以 1 . 1 8 。 （2 ） 150.13 1.34 112.13 = 所以换算为山梨酸钾的换算系数 是 1 . 3 4 。 （3 ） 试样制备时， 要充分混合均匀， 以防止样品不均匀造成检测结果偏差。 （4 ）样品中苯甲酸、山梨酸提取 环节，若样品丢失，或者提取液遗漏， 会导致实验结果偏低。 （5 ）提取样品中苯甲酸、山梨酸 所用有机溶剂乙醚极易挥发，实验室 温度要控制在2 0 ， 在