猪脂肪沉积相关基因研究进展

猪脂肪沉积相关基因研究进展 高士争刘永刚 ( 云南农业大学云南省动物营养与饲料重点实验室，昆明6 5 0 2 0 1 ) 摘要猪脂肪过度沉积和肉品质降低是现代养猪生产中面临的主要问题，因此降低猪体脂进度沉积、提 高内品质是目前国内外动物营养学研究的重点。近年来，随着动物营养学与其他学科的交叉研究尤其是分子 生物学技术在动物营养学研究中的应用，人们已逐渐认识到猪体内脂肪的沉积，除营养因素和体内代谢调节的 作用外。一些相关的功能基因发挥着重要的控制作用。本文就近年来猪脂肪沉积相关功能基因的研究进展进行 综述。 关键词脂肪代谢内品质功能基因猪 动物脂肪的沉积是一系列复杂的生理生化过程，在此过程中营养物质在组织中的代谢与转化起着 至关重要的作用，并受到多种因素的调节，营养和神经内分泌系统在脂肪沉积过程中起着重要作用。 脂肪沉积的生物学基础是脂肪组织的发生、脂肪细胞的分化与增殖，这些生物学基础是由相关基因的 时空特异性表达控制的，营养和环境因素通过调节基因的表达而影响脂肪沉积的形成。目前大量的研 究对动物脂肪沉积基因的多态性或表达水平与脂肪沉积的相关性进行了研究，但缺乏对相关功能基因 的表达调控及基因网络解析的深入研究。因此，深入开展脂肪沉积相关功能基因的研究，对揭示脂肪 沉积发生和形成的分子基础、阐明其营养代谢调控的机理、进而通过营养措施调控脂肪沉积具有重要 科学意义。 1猪脂肪沉积相关重要功能基因 1 - 1 心脏脂肪酸结合蛋白基因 1 9 9 7 年，荷兰科学家G e r b e m 矗以，首先分离鉴定了猪的心脏脂肪酸结合蛋白基因( h e a r t 鼬t y i db i n d i n gp m t e i n ，H F A B P ) ，该基因位于猪的6 号染色体上，由上游调控区域、3 一非转录区和 4 个外显子组成，其表达产物约1 5 k D a 大小。参与细胞内代谢、长链脂肪酸的转运、细胞的分化与增 殖等。 目前对猪H F A B P 基因的遗传效应研究较多。G e r b e m 拼以( 1 9 9 1 ) 用限制性内切酶H i I 】fI 、 H m 和M s p1 分别对8 5 0 b p 和7 0 0 b p 两个猪H F A B P 基因片段进行酶切分析发现，该基因存在多 态性位点，关联分析表明该基因不同基因型个体间肌内脂肪含量及背膘厚显著差异，位于与脂肪沉积 相关的数量性状遗传位点( 伽乙) 区域内，认为是与脂肪沉积相关的一个候选功能基囡。庞卫军等 ( 2 0 0 5 ) 利用P c R R n t 分子标记技术对杜洛克猪、长白猪、大白猪、内江猪、荣昌猪、汉江黑猪、 汉中白猪、八眉猪和野猪H F A B P 基因5 一上游区和第二内含子区的遗传变异进行检测，并用最 小二乘模型分析H F A B P 基因对猪肌内脂肪( i n t e l a l m u w l e f a t ，I M F ) 含量的遗传效应，发现H F A B P 基因可显著提高猪I M F 含量。李长龙等( 2 0 0 6 ) 对梅山猪、苏太猪和杜x 长x 大猪H F A B P 基因多态性分布及多态性与肌内脂肪和背膘厚的相关性研究发现，H F A B P 基因的多态性分布在不 同猪种间存在极显著的差异，这种差异可能是产生珊F 含量或背膘厚不同的主要原因之一；连锁分 析表明，H F A B P 基因多态性与I M F 含量呈显著相关性，但与背膘厚无显著相关性，说明H F A B P l 】7 籀营养与饲嚣 研究进展 基因多态性可应用于提高猪I M F 含量而不影响背膘厚的分子育种实践中。 猪H F A B P 基因的组织表达水平与其脂肪沉积密切相关，日粮营养水平对该基因的表达有重要 调控作用。u 等( 2 0 0 7 ) 通过对猪脂肪和肌肉组织H F A B P 基因m R N A 表达量的差异研究发现， H F A B P 基因m R N A 表达量受脂肪组织和肌肉组织中的脂肪细胞的生长发育诱导而上调。由于H F A B P 基因表达与日粮能量水平都与脂肪沉积有密切关系，关于日粮能量水平调控猪H F A B P 基因 表达的研究还未见报道，M a m 矗o L ( 2 0 0 2 ) 通过对鼠长期饲喂高脂肪食物进行研究。发现小鼠的脂 肪及肌肉组织中H F A B P 基因表达量下调，导致脂肪的利用率降低，脂肪沉积加速。因此，有必要 对猪日粮不同能量水平调控H F A B P 基因的表达的模式以及该模式下脂肪沉积的规律进行研究。另 外，过多的蛋白质摄入也会促进机体将蛋白质脱氨基作为能量物质使用，加速脂肪沉积因此，也有 必要研究对猪日粮不同蛋白水平调控H F A B P 基因的表达的模式以及该模式下脂肪沉积的规律。 1 2 脂肪组织脂肪酸结合蛋白基因 脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白( a d i p o c y t ef a 仕y i d b i n d i n gp r o t e i nA F A B P ) 可能参与脂肪细胞 中甘油三酯的生成。1 9 9 8 年，同样由荷兰的G e r b e m 矗以，对猪A F A B P 基因进行克隆与测序，发 现该基因定位于猪的第4 号染色体上，包括上游调控区、4 个外显子、三个内含子和下游非编码区。 研究表明A F A B P 具有以下功能：( 1 ) 通过与过氧化物酶增殖体激活受体的互作参与子宫黏膜细胞 的凋亡；( 2 ) 活体内脂肪细胞型脂肪酶结合蛋白的降解导致脂肪中的非饱和脂肪酸的溢出及和脂肪 酸相关的糖类的优先利用；( 3 ) 调节气管的过敏性炎症反应，证明脂肪酸代谢与哮喘有关；( 4 ) 在 巨噬细胞中表达影响胆固醇的运输，与脂肪沉滞性动脉硬化症的形成及炎症反应有关；( 5 ) 与激素 敏感脂肪酶高度的亲和性，促进脂肪分解。 对猪A F A B P 基因遗传效应的研究表明，猪的A F A B P 基因第1 个内含子内有一个微卫星序 列，不同猪种间具有多态性，A F A B P 基因微卫星序列的遗传变异与I M F 含量有关，A F A B P 各基 因型之间I MF 含量差异显著，相差将近1 ，猪A F A B P 基因可作为影响I M F 含量的候选基因 ( G e r b e 等，1 9 9 8 ) 。G e r b e l l s 酊以( 2 0 0 1 ) 研究还发现，A F A B P 基因的m R N A 的表达水平与I M F 含量显著相关。 对A F A B P 基因表达的调控研究发现，地塞米松可以诱导A F A B P 基因表达的上调( A b d e l w a h a b 耐甜，2 0 0 7 ) ；E d d y 以以( 2 0 0 4 ) 报道蝙蝠的冬眠低温状态可以诱导棕色脂肪中A F A B P 基因 4 倍量的上调表达，促进脂肪运输与分解。但是，关于猪的营养水平对A F A B P 基因表达的调控研 究还未见报道。 1 - 3 肥胖基因 肥胖基因( o b e ”g e n e ，o b ) 于1 9 5 0 年首次在小鼠上被发现，为常染色体上隐性遗传，包括上游 调控区、2 个外显子、1 个内含子和下游非编码区，猪的定位于第1 8 号染色体上。该基因正常的表达 产物称为瘦蛋白( k 埘n ) 。最早的研究报道k p l i n 对动物体能量平衡产生巨大影响，k p t i n 表达及分 泌量的增加会显著降低动物的体重和采食量，显著加强机体能量的分解代谢及产热反应。最新研究还 表明：( 1 ) o b 基因的基因型显著影响生长性状；( 2 ) o b 基因限制黄体的生成阶段；( 3 ) 0 b 基因在 妊娠期的下丘脑与垂体中的m R N A 表达量发生改变；( 4 ) o b 基因m R N A 表达量在大白猪中比二花脸 猪高；( 5 ) o b 基因促进卵母细胞的成熟。 猪o b 基因的遗传学研究表明，脂肪型猪与瘦肉型猪在o b 基因的R n P 带型上存在明显差异，在 所有瘦肉型猪中都存在一条4 3k b 的带，脂肪型猪存在一条3 5 I 【b 的带，不同品种猪0 b 基因的基因 型存在差异，o b 基因位点的多态性关联分析表明，o b 基因是影响猪脂肪蓄积的主效基因之一( 戴茹 娟等，2 0 0 0 ) 。0 l i v e i md 口f ( 2 0 0 6 ) 研究表明，o b 基因的多态性与猪采食量、饲料转化效率、平均 日增重等显著相关。 c h e n 西以( 2 0 0 6 ) 通过对生长猪饲喂不同能量水平的日粮来研究饲料能量水平对k nm R N A 的影响，结果发现饲料能量水平对0 b 基因的表达没有显著影响。但是，A n h e r 甜吐( 2 0 0 5 ) 通过给 1 1 8 辅约报告 鼠饲喂高能量饲料发现，L e p t i n 基因表达急剧上调。C h e n 矗。f 的研究结果显然和A r c h e r 矗口t 的研 究结果不一样。因此有必要就能量水平对o b 基因表达的调控进行深入研究。z h o ud 以( 2 0 0 4 ) 对二 花脸和大白猪的8 个生长时段k p 6 nm R N A 的表达差异进行了分析，母猪L e p t i nm R N A 的表达量比公 猪高，二花脸k 州n m R N A 的表达量比大白猪高，猪L e p n nm R N A 的表达量随年龄而升高，说明o b 基因表达受品种、性别和年龄的影响。G 0 v o I l i 甜以( 2 0 0 5 ) 发现胰岛素能够提高0 b 基因表达，在饥 饿状态下o b 基因表达量较养分充足状态下低。这些研究表明猪o b 基因表达受多种外界因素的调控， 各种因素的影响程度也不一样。目前关于猪日粮蛋白水平对0 b 基因表达的调控研究还未见报道。 1 4 黑素皮质激素一4 一受体基因 黑索皮质激素一4 一受体( M e l o c o n i n 一4 一m c e p t o r ，M c 4 R ) 是动物下丘脑腹内侧核分泌的一类 肽类物质，是G 一蛋白偶联超家簇的一个成员，为跨膜受体，它可以与瘦蛋白( k p 曲) 、神经肽Y ( N e u r o p e p t i d e Y ，N P Y ) 、a 一黑素细胞刺激激素( A l p h a m e l 明0 c y t e s t i m I l l 撕n gh o m o n e ，a M S H ) 等一起调节动物体重和采食量，减少动物的采食量，增加能量的消耗，抑制体重的增加。该基因包括 上游调控区、1 个外显子和下游非编码区。猪的M C 4 R 基因尚未定位，但研究表明M C 4 R 基因与猪第 1 号染色体上的个数标记明显连锁。 猪M c 4 R 基因的遗传学研究表明，M c 4 R 基因第7 跨膜结构功能域的一个高度保守区内发生了一 个错义突变( o A ) ，由此产生了1 铀I 酶切位点的改变。刘桂兰等( 2 0 0 0 ) 利用梅山猪、大白猪的 生长肥育性状、胴体性状、肉质性状并结合M C 4 R 基因该位点进行相关分析，发现M c 4 R 基因与猪胸 腰椎间膘厚、臀部膘厚、平均背膘、眼肌宽度、眼肌面积和皮率呈显著性相关。m 酣以( 2 0 0 6 ) 和M e i d m e r 钟耐( 2 0 0 6 ) 通过对猪M c 4 R 基因多态性的研究也表明，M c 4 R 基因型与猪的生长、瘦 肉率、采食量和脂肪沉积显著相关。 A ”h e rd 甜( 2 0 0 5 ) 通过给鼠饲喂高能量的日粮发现，M c 4 R 基因表达量急剧上调，采食量减 少，增加能量的消耗，这表明M “R 基因表达受饲料能量水平的调控。但是对猪在这方面的研究还未 见报道。 1 5 过氧化物酶增殖体激活受体 基因 过氧化物酶增殖体激活受体一1 ( p 明硝目o m 6p 砒f e 哪钟一a “v a 忙d 础：e p 咐一g 帆m ，P P A R l ) 属 于转录因子的核激素受体超家族，可与类维生素A 类x 受体( R x R ) 结合成异源二聚体，调控脂肪 细胞的分化及多种基因的转录。该基因包括上游调控区、6 个外显子、5 个内含子，猪的P P A R T 基因 尚未定位。同时，该基因是一个重要的脂肪细胞分化调节因子，与肥胖症、糖尿病、脂肪沉滞性动脉 硬化症、癌症的发生等具有重要关联，该基因的转录本具有多种剪切体，编码不同的亚型。 猪P P A R l 基因的遗传学研究表明，P P A R l ：在脂肪组织高丰度表达，而在骨骼肌仅有低水平表 达；P P A R m 却在多种组织表达，除脂肪组织外，其他组织如脾脏、外周血淋巴细胞、肝脏及骨骼肌 中均有表达；P P A R 的表达仅限定在巨噬细胞和大肠。3 种亚型由于组织分布的不同，可能在体内 发挥不同的作用。 z 1 g 时越( 2 0 0 6 ) 在鸡的饲料中添加共轭亚油酸后发现，共轭亚油酸能显著诱导H ，A R l 基因 的上调表达。s a l c u 诅脚以( 2 0 0 6 ) 在鼠的饲料中长期添加类维生素A 后发现，在采食量不变的情况 下鼠P P A R l 基因的表达显著下调，白脂肪组织和棕色脂肪组织减少。z o m d 耐以( 2 0 0 6 ) 给鼠长期 注射血管紧张素阻抑物后发现，脂肪细胞的体积变小和P P A R l 基因的表达显著上调。猪P P A R l 基 因表达的营养漏控方面的研究还未见报道。 1 6 激素敏感脂肪酶基因 激素敏感脂肪酶( H o r I n o n e s e n s i t i v eh p a 8 e ，H s L ) 是一种脂肪分解酶，参与机体贮藏的甘油三 酯和脂肪酸水解反应，调节机体能量的动态平衡。1 9 9 2 年，G u 甜以，将猪的H S L 基因定位于第6 号染色体上，猪H S L 基因的c D N A 序列和全长的D N A 序列也被克隆和测序( c h o u d h 盯群越，1 9 9 2 ； H a 幽t zd 缸1 9 9 2 ) 。该基因包括上游调控区、9 个外显子、8 个内含子和下游非编码区。 1 1 9 猪营养与饲料研究进展 猪H s L 基因的遗传学研究表明，对P i g M a p 参考家系进行H s L 基因的P C R R F 和P c R S S c P 多态性分析，结果发现内含子7 的1 1 6 4 b p 1 1 6 7 b p 区段有一处A l u I 多态性位点；在外显子8 上存在 一个颠换，即G T ，并引起相应的G 1 u A 8 p 的氨基酸改变( H a I b 汜酣n L ，1 9 9 9 ) 。杨再清等人于 1 9 9 6 年以混系和单系长白育肥猪为研究材料，发现单系长白猪血浆中c A M P 、H s L 和F F A ( 游离脂肪 酸) 分别比混系高3 2 8 5 ( P O 0 5 ) 、7 4 1 和2 3 4 1 ，证明通过c A M P 调控H s L 对猪脂肪沉积 的作用具有明显的品系差异。吴桢方在1 9 9 8 年通过分析猪H s L 基因的P c R R F L P 和P c R s s C P 多 态性，进一步证实了A l u I 酶切位点的存在，经H s L 和S S c P 多态性与猪生产性状的方差分析，认为猪 H s L 等位基因N 为背膘向下选择的有利等位基因( z l l a n g 眦以，2 0 0 5 ) 。 Z l l a n g 甜口L ( 2 0 0 6 ) 通过研究断乳后不同饲料构成对高脂膳食大鼠体脂含量及脂肪组织中H s L 基因表达的影响发现，断乳后喂饲高不饱和脂肪酸的大鼠白色脂肪组织H S L 基因表达水平持续升高， 可以降低高脂膳食大鼠的体重、体脂含量，明显改善血糖异常，抑制肥胖形成。w i n z e ud 以 ( 2 0 0 3 ) 通过对大鼠高脂膳食饲喂转向低脂膳食饲喂后发现，H s L 基因表达水平上调了1 0 倍，同时 伴有甘油三酯的下降。对猪H s L 基因表达的营养调控研究尚未见报道。 1 - 7 脂蛋白脂酶基因 脂蛋白脂酶( 1 i p o p r o t e i nU p a 8 e ，L P L ) 的二聚体，具有甘油三酯水解酶的功能和配体介导脂蛋白 的摄取功能，该基因的严重突变导致I 型高脂蛋白血症，少数的极端突变会导致脂蛋白代谢的严重紊 乱。猪u L 基因由G u 和H a r b 洫( 1 9 9 2 ) 采用原位杂交的方法定位于染色体1 4 q 12 一q “4 。猪的u L 基因包括上游调控区、1 0 个外显子、9 个内含子和下游非编码区。L P L 是由4 4 8 个氨基酸残基组成的 糖蛋白，在实质细胞的粗面内质网合成酶的前体，属于无活性酶，糖基化后才转化成活性u L 酶。 活性m 以同源二聚体形式存在，L P L 活性还受营养因素( 如葡萄糖) 、激素( 如胰岛素) 、基因变 异等调节( V i o n 哪吐，2 0 0 1 ) 。0 嘴甜越于1 9 9 4 年用离体的大鼠脂肪细胞做实验，发现胰岛素能增 加L P L 的合成率和m R N A 的水平。 猪L P L 基因的遗传学研究表明，用人u ) L 基因的c D N A 探针检测到了挪威长白猪基因组E c o R I 、H a e 、M s pI 和P s tI 位点的R F L P 多态性，并且检测到了M s pI 位点的复等位基因多态性 ( H a r b i 乜矗以。1 9 9 2 ) 。吴桢方在1 9 9 8 年利用P C R S s C P 技术对猪u 吧基因的多态性分析发现，在 5 非翻译区，脂肪型猪种梅山猪和通城猪表现出A A 、A B 、B B 三种等位基因型，在两品种猪中等位 基因A 、B 的频率各自分别为O 7 6 、O 2 4 和o 7 7 、o 2 3 ；瘦肉型猪品种长白和大白则表现出C C 、 C D 、D D 三种基因型，其等位基因C 、D 的频率分别为0 7 6 、O 2 4 和0 7 2 、0 2 8 。z h g 酣吐 ( 2 0 0 5 ) 对L P L 基因的第3 、5 内含子测序并进行比对，发现多处S N P ，同时与性状进行关联分析， 发现该基因多处s N P 与脂肪沉积有关。 L ud 以( 2 0 0 7 ) 通过添加锰的饲料饲喂肉鸡研究锰元素对肉鸡脂肪沉积和相关基因表达的效 应，发现锰元素可以有效减少腹部脂肪沉积，同时降低L P L 基因表达。用含共轭亚油酸饲料饲喂地 鼠，发现地鼠的L P L 基因表达显著降低，脂肪合成酶表达量显著上升( z a b a l a “以，2 0 0 6 ) 。P a r k 甜 甜( 2 0 0 5 ) 用含桑葚、韩国红参、氯美扎酮药物的饲料饲喂老鼠，肝脏与脂肪组织中P P A R l 和L P L 的表达上升，血糖和血脂下降。也有研究表明给大鼠突然提供高脂肪的食物会显著增加总热量的摄人 和脂肪的沉积，以及增加脂肪组织u l L 的活性与降低肌肉组织【凡的活性。这些研究表明L P L 基因 表达受营养因素调控，但对猪u 吧基因的营养调控研究尚未见报道。 2 猪脂肪沉积潜在相关的新基因 随着分子生物技术的发展，越来越多的与猪脂肪沉积有潜在相关的重要基因被发现，这些基因包 括一些蛋白质编码基因，如羧肽酶( c a r h x y p e p d d a E ，c p e ) 基因，脂肪酸去饱和酶2 ( f a t 【ya c i d d e s a t u r a 孵2 ，F A D s 2 ) 基因，醛酮还原酶1 c l ( a l d 0 一k e t or e d u c t a s e h l I i 】yl ，眦m b e rc 1 ，A K R l c l ) 基因，c A M P 依赖的蛋白激酶调节亚单位睥( c A M P d e p e n d e l I lp m t e i nk i T 培舶，r e g I l l a 协r ys u b 曲i tb e 忸 1 2 0 辅约报告 2 ，P R K A R 2 B ) 基因等；也包括一些不编码蛋白质的功能位点即Q T L ，如肌内脂肪Q T L ( I n t m m u s c u l a rf a t ，I M F ) ，皮下脂肪重Q T L ( s l l b c u t a n e o u sf a tp a dw e i 灿，Q r L ) ，脂肪重Q 1 1 L ( t o t a lf a tp a dm a s 8 ， Q T L ) 等，目前对这些新基因与猪脂肪沉积的关系尚缺乏深入研究。本文仅就目前研究较多的几个基 因进行简单介绍。 2 1 羧肽酶基因 c o i n 盯以( 2 0 0 5 ) 研究人的羧肽酶( c a r b y p e p l i d a E ，c p e ) 基因时发现，一些遗传修饰因 子与c p e 互作影响体重、肥胖及高血糖症。目前猪的c p e 基因的c D N A 序列已经分离出来( H r e i d a m d o t 血甜以。2 0 0 7 ) 且定位于第8 号染色体上。但是，该基因对猪脂肪沉积的遗传效应及营养调控方 面的研究还未见报道。 2 2 脂肪酸去饱和酶2 基因 脂肪酸去饱和酶2 ( f a t t ya c i dd e 蛆t u r a s e2 ，F A D s 2 ) 通过引入脂肪酰基的碳双键调节不饱和脂肪 酸，据o k a d a 税以( 2 0 0 6 ) 报道该基因能够减少肥胖小孩血浆中精氨酰琥珀酸的含量和降低去饱和 酶一8 6 的活性，同时还与多烯脂肪酸的合成有关。该基因对猪脂肪沉积的遗传效应及营养调控方 面的研究还未见报道。 2 3 醛酮还原酶l C l 基因 醛酮还原酶1 c 1 ( a l d 0 一k 咖r e d u c t 日s e 血I l i l y1 ，m e m b e rc l ，A K R l c l ) 以N A D H 或N A D P H 为 辅基或辅酶催化醛酮转化成相应的醇。B l o u i n 矗以( 2 0 0 5 ) 报道，A K R l c l 在腹部脂肪中的高丰度 表达与女性的肥胖有关。猪的A K R l c l 已经被定位于第l o 号染色体( N o e m d 刮，2 0 0 6 ) ，该基 因对猪脂肪沉积的遗传效应及营养调控方面的研究还未见报道。 2 4c A M P 依赖的蛋白激酶调节亚单位B 2 基因 c A M P 依赖的蛋白激酶调节亚单位p 2 基因( c A M P d 8 p e n d e n tp r o t e i nk i n a s e ，陀g L I h t o r ys l l b u 曲 b e t a2 ，P R K A R 2 B ) 和c A M P 应答元件结合蛋白1 互作并且抑制其转录活性，对敲除P R K A R 2 B 的小 鼠的研究表明，P R K A R 2 B 在调节能量平衡及肥胖中起重要作用。猪的P R K A R 2 B 基因还未见报道。 综上所述，目前国内外对猪脂肪沉积相关基因的研究偏重于功能基因的克隆与定位、蛋白质生物 功能的鉴定、多态性分析及功能关联分析上。但是，猪脂肪沉积是多基因控制的性状，随着越来越多 的与脂肪沉积相关新基因和新的Q r L 的发现，人们逐渐认识到猪脂肪沉积调控机制的复杂性。猪脂 肪沉积是多个基因构成的基因网络作用的结果，同时猪脂肪的沉积还取决于遗传、环境和营养因素三 个方面的互作，在研究这些与脂肪沉积相关基因和Q T L 同时，我们也应该从基因网络解析与营养调 控的角度来探讨猪脂肪沉积的规律及其调控的分子机制。 参考文献 1 戴茹娟，李宁，吴常信猪肥胖基因c D N A 的克隆与分析遗传学报2 0 0 0 ，”：2 9 0 2 9 7 2 李长龙，潘玉春H F A B P 、M c 4 R 、A D D l 基因多态性在3 个猪群中分布及其与肌内脂肪和背膘的相关研究遗 传2 0 0 6 ，2 8 ：1 5 9 1 6 4 3 刘桂兰猪脂肪沉积相关候选基因M o R M c 4 R 和I c F 2 的遗传效应研究硕士论文华中农业大学，2 0 0 2 4 刘建忠转基因小鼠乳腺表达人瘦蛋白的研究博士学位论文华中农业大学，1 9 9 9 5 庞卫军，杨公社8 个猪种和野猪H F A B P 基因分子标记与I M F 含量的关系农业生物技术学报2 0 0 5 ，6 ：7 3 3 7 3 8 6 A l l l l m b o hc 蚰dm 脚l 蚰R F 1 协D N Ap o l y m 呻h i 咖i nt h el i p 叩o 眦i I ll i p 拍eg e n e 明dt I l e i r 船s o c j a t i 蚰w i t l l f a c t 咐陀I a t e d t oc 舡d i o v a 眈I d 盯d i 吲配J o 叫l a lo f U p I dR e B 曲T c h 1 9 9 3 ，3 4 ：4 2 1 4 2 8 7 A r c h 盯z A ，R a y 地r D v ，D u n c 蛐J s ，B e l lL M ，M e 亿e rJ BI n h 硐u 曲0 I l0 fah 讪一即e 。盯d i e I 船u l e I yu p r e ；1 1 1 a t h y p o - t l I 山“co a h 坨蚰d 岫p h e t 且I l l i n e 一陀g I d a t e d 咖而P t ，M 0 4 R 埘db r 0 啊a d j p o t I s 叫e 帅。唧l i l l gp 州e i n 一1g e n ee x - p 瑚B i o n i n I I l 山s p r 8 9 I l e D 丑w l e y 啊慨JN e 郫d o c r i I l o L2 加5 1 7 ( 1 ) ：1 0 一1 7 8 瑚伽i n K ，B l 肌c h e t t es ，m c h a r dc ，D I l p o n tP ，L u u n eV ，T c h e m o f 九E 即酊叽卸da c 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