猪呼吸道疾病综合征

2 5 e 努J o u r n a A o f G u! n g z 生 A g r i c . aI d B I S 学 ci ence 年 s 月 . , 2 0 0 6 文章编号:1 0 0 8 - 3 4 6 4 ( 2 0 0 6 )增一 0 1 6 7 - 0 5 猪呼吸道疾病综合征 李曦，符芳，童光志 ( 中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨，1 5 0 0 0 1 ) 摘要:流行病学及现地调查表明，猪呼吸道病综合征 ( P R D C )是一种多因子性疾病，它是由病毒、细 菌、不良的饲养管理条件及易感猪群等综合因素相互作用而引起的疾病综合征;实验研究从另一方面表明 P R D C与猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒2 型、猪肺炎支原体有紧密的相关性，这四种 病毒是原发原因。因此， 建立迅速的、 多重的、 高通量的检测方法是防止该病发展而造成严重危害的首要前 提，完善诊断手段将成为它的有效防治措施。 关键词: 猪呼吸道病综合征;多因子;诊断 中图分类号:5 8 5 8 . 2 8文献标识码:A P o r c i n e r e s p i r a t o r y o l i s e a s e c o mp l e x L I X i ，F U F a n g ，T O N G G u a n g 一 z h i ( D i v i s i o n o f S w in e I n f e c t io u s D i s e a s e s , N a t io n a l K e y L a b o r a t o r y o f V e t e r in a r y B io t e c h n o l o g y , H a r b i n V e t e r i n a r y R e s e a r c h I n s t it u t e , C h i n e s e A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c ie n c e ， h a r b in 1 5 0 0 0 1 ， C h i n a ) A b s t r a c t : E p i d e m i o l o g y a n d i n v e s t i g a t i o n o n t h e s p o t i n d i c a t e t h a t P o r c i n e R e s p i r a t o r y D i s e a s e C o m p l e x ( P R D C )i s m u l t i - f a c t o r i a l d i s e a s e ，i t c o n t a i n s c o m p r e h e n s i v e f a c t o r s v i r u s , u n h e a l t h y r a i s e d m a n a g e m e n t c o n d i t i o n a n d s e n s i t i v e s w i n e r y a n d s o o n ， w h i c hi n t e r a c t i n g b a c t e r i u m, e a c h o t h e r c a u s e d i s e a s e c o m p l e x ; F r o m t h e o t h e r， e m p i r i c a l s t u d y i n d i c a t e t h a t P R D C t i g h t l y a s s o c i a t e s w i t h p o r c i n e ( P C V2 ) r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y v i r u s( P R RS V ) a n d PRDC s w i n e i n f l u e n z a v i r u s ( S I V) p o r c i n e ci r covi ruses i s p r o mp t , a n d m y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e ， mu l t i p l e , h i g h一f l u x d e t e c t i o n canp r e v e n t t h e c a u s e o f t h e s e v i r u s d e v e l o p m e n t o f t h i s . Th e r e f o r e ， e s t a b l i s h e d d i s e a s e . c o n s u mma t e d i a g n o s i t i c m e a n s w i l l b e p r e v e n t e d t h i s d i s e a s e . K e y w o r d :P o r c i n e R e s p i r a t o r y D i s e a s e C o m p l e x ( P R D C ) ; m u l t i - f a c t o r ; d i a g n o s i s 猪呼吸道病综合征 ( P o r c i n e R e s p i r a t o r y D i s e a s e C o m p l e x , P R D C ) 是一种由不固定的、 多因子病 原共同引起的猪呼吸道病综合征。 P R D C的病原是多因子的， 且不同的养殖场引起发病的病原也各有差 异。1 9 9 8 年， 在英国夏明翰召开的第十五届国际猪病会议 ( I P V S )上出现 “ 1 8 2 0 周龄墙” ， 2 0 0 0 年 以后， 在世界范围内， 猪呼吸道病综合征 ( P R D C )的概念被广泛接受， 并由于其日益严重的危害而引 起重视 ， 。 收稿日期: 鑫金项目: 作者简介: 2 0 0 6一 0 9一1 5 ; 国家科技攻关项目 修回日期:2 0 0 6 - 0 9 - 2 5 . ( 2 0 0 5 B A7 1 1 A1 0 ) 。 李曦 ( 1 9 6 9 一 ) ， 女， 辽宁抽岩人，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所副研究员，博士; E - m a i l : l i x i _ l i x i 2 0 0 4 Y a h o o . c o m. c n . 通讯作者 :童光志 ，研究员， 博士生导师; E - m a i l ; g z t o n g p u b l i c . h r . h l . c n . 广西农业生物科学第 2 5卷 1 猪呼吸道病综合征临床表现、病理变化 猪呼吸道病综合征主要暴发于8 - 2 6 周龄的猪， 发病率为2 5 %-6 0 %， 死亡率为2 0 0 0 9 0 0 0 。 临 床表现主要为精神沉郁，厌食，出现严重的腹式呼吸，气喘急促，呼吸困难，发热，咳嗽、眼分泌物 增多及结膜炎症状 z 7 0 急性发病的猪体温升高， 突然死亡， 大部分急性发病后仍然存活的猪会呈现慢性 症 状， 病 猪 生 长 缓 慢、 停 滞、 清 度， 死亡 率、 任 猜 形成比 例 升 高。 急 性 耐 过 猪 作为 病 原携 带 者， 在 猪 舍内 造 成区 城 流 行 哺 乳 仔 猎 感 率 后 管理条件较差，绪 群 密 度 过 大， 则 易 出 娜 娜 困难和神经症状，死亡率较高。另外，如果饲养 发病率和临床表现则更为严重。 发 病 猪 均 表 现 出 不 同 程 皮 、 不同 类 W A 肺 炎 症 状 . 由 于 病 原 不 同 或 引 起 疾 病 的 主 要 病 原 不 同 ， 发 病猪表现出不同程度、 不同类型的肺炎变化， 6 -1 0 周龄的保育猪剖检可见弥换性间质性肺炎以及淋巴 结的广泛肿大， 肺出血、 硬变 ( 不能姜缩的橡皮肺橡)和花斑样病变 ( 斑驳状到褐色) ， 个别肺有化脓 灶，病猪肺部有不同程度的混合感染， 有些病猪有广泛性多发性浆膜炎 ( 胸腔、腹腔很多纤维蛋白渗 出， 并造 成 粘 连) ， 有 些 肺部病变与 猪 支 原体 肺炎相 类 似， 除 肺部出 现 病变 外， 小部分 病 猪可 见肝 肿大 出血、淋巴结、肾、膀胧、喉头有出血点， 部分猪出现末端紫色。1 -3 周龄发病的哺乳仔猪剖检可见 心、肝、肺有出血性病变。 2 . 1 猪呼吸道病综合征的病原 引起猪呼吸道病综合征病原的现地调查结果分析 2 . 1 . 1 P R D C 猪呼吸与繁殖综合征病毒( P R R S V ) ， 猪流感病毒( S I V ) ， 猪肺炎支原体( 码1c o p l a s m a 勺o p n e u m o n i a e , MH ) ，多杀性巴氏杆菌 ( P a s t e u r e l l a m u l t o c i d a , P M) ， 猪国环病毒2 型 ( P C V - 2 ) ， 副 猪型嗜血杆菌 ( H a e m o p h i l u s p a r a s u i s , H P ) ， 猪胸膜肺炎放线杆菌 ( A c t i n o b a c i l l u s p l e u r o p n e u m o n i a e , A P P ) , 支气管败血波氏杆菌 ( B o r d e t e l l a b r o n c h i s e p t i c a , B B ) 根据美国学者通过对现地收集的病料 进行的流行病学调查I l l ， 自1 9 9 3 年至1 9 9 6 年， 对伊阿华州的具有P R D C症状的猪进行病原学检测， 结 果发现，P R R S V, S I V, MH均呈逐年上升趋势。在4 年间MH, S I V阳性数增加3 倍，P R R S V增加 了6 倍。 从流行病监测数据可见， 在1 9 9 3 年至1 9 9 6 年间， 美国伊阿华州的农场中的猪呼吸道综合征的 主要原发病原为P R R S V, S I V与MH的混合感染。 据Y o u n g K i C h o i 等 3 的研究报道， 在美国中西部猪场中， 对于具有呼吸道症状的发病猪进行病原 检 测， 在2 8 7 2 个病例中， 仅1 1 . 8 %的病例检测为单一病原感染， 而8 8 . 2 %的病例中可以检出2 种或 2 种以上的病原。 其中不同病原的阳 性率分别为: P R R S V ( 3 5 . 4 %) , P o s t e u r e l l a m u l t o c i d a ( 3 1 . 6 %) , M y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e( 2 7 . 0 %) ，Si V ( 2 2 . 2 0 0 ) ，H a e m o p h i l u s p a r a s u i s( 2 2 . 0 %) ，P C V - 2 ( 1 8 . 601 8 . 6 %) ，A c t i n o b a c i l l u s p l e u r o p n e u m o n i a e( 1 8 . 2 %) ，B o r d e t e l l a b r o n c h i s e p t i c a( 8 . 0 0 0 ) ，P R C V ( 1 . 5 %) 。 在美国中西部农场的病原检测结果表明， P R D C是由多种病原相互作用的结果， 且是病毒与 细菌共同作用的结果，其中P R R S V在P R D C中具有重要作用。 2 . 1 . 2 P R D C P C V - 2 , P R R S V， 猪细小病毒 ( P P V) , S I V, P M, MH 另据报道， 在韩国对于1 0 5 只表现P R D C症状的猪只进行病原学调查， 结果发现， 8 0 . 9 写为P C V - 2阳性， 6 2 . 8 %为P R R S V阳性， 5 7 . 1 %为P P V阳性，1 3 . 3 %为猪流感阳性。多病原共感染的占7 6 . 2 0 o 。其中，P C V - 2 与P a s t e u r e l l a m u l t o c i d a 共感染的3 8 例，占4 4 . 7 0 0， P C V - 2 与肺炎支原体MH共感染的3 3 例，占3 8 . 8 0 0 。在韩国 农场对P R D C猪只进行的病原学调查结果表明，P R D C为病毒与细菌共同作用的结果，且其中P C V - 2 具 有 重 要 作 用 闭 。 2 . 1 . 3 P R D C 猪呼吸道冠状病毒 ( P R C V ) , S I V 自澳大利亚的4 4 个猪群中的2 5 3 头表现猪呼吸 道综合征的育肥猪中， 针对抗S I V , P R C V , P R R S V抗体进行血清学检测， 其中， 抗S I V抗体阳性率 2 4 . 5 %， 抗P R C V抗体阳性率6 3 . 6 %， 抗P R V抗体阳性样品1 份， 抗P R R S V抗体阳性率为。 1 5 3 。 根据 该研究中的抗体监测结果， 可以推测， 在澳大利亚的猪场中， 具有猪呼吸道综合征的猪群中， P R C V分 布较为广泛，抗体阳性率最高，与呼吸道综合征具有更为重要的相关性，但仍然缺乏病毒检测试验的 增刊李曦等:猪呼吸道疾病综合征 证据。 另外， 美国的分离株P R C V - A R 3 1 。 接种试验猪， 没有临床的呼吸道症状， 仅在3 , 5 , 1 0 , 1 5 D P I 出现呼吸道微损伤 s 3 。因此， 在呼吸道综合征的研究中， 不同的P R C V毒株， 其毒力及致病性还有待 进一步研究。 2 . 1 . 4 P R D C 其他病原 P R V可以通过鼻子的呼吸接种病毒， 引起呼吸道症状 7 ， 且与MH , S I V 共同成为猪呼吸道综合征的风险因子 8 3 ; 在南非、 英国等地， P C MV被证明是与猪呼吸道病相关的病 原 9 3 。 另外， 还有一些机会感染菌， 如链球菌、 巴氏杆菌、 沙门氏菌等业已证明是与猪呼吸道综合征相 关的病原。其中，机会菌的感染是与猪只的引人、饲养管理及环境因素密不可分的。 2 . 2 引起猪呼吸道病综合征病原的实验研究分析 2 . 2 . 1 P R D C -P R R S V, S I V, P R C V P R R S V动物实验感染表明， 仅P R R S V并不会引起发病或 不表现临床症状 + 1 ， 但是当与其他的病毒或细菌混合感染时则会出现严重的发病 1 0 。将P R C V , P R R S V , S I V接种试验猪， 仅S I V接种后试验猪出现急性呼吸道症状和肺损伤 1 1 。 另外， 将P R R S V , P R C V, S I V以及P R R S V - .P R C V和P R R S V - S I V分别接种于1 0 周龄试验猪， 结果发现， 单独的P R R S V 感染仅引起猪只出现一过性发热， 没有呼吸道症状; P R C V感染仅呈现亚临床症状; S I V感染表现为持 续1 d的发热及中度呼吸困难。 而双重感染， P R R S V - P R C V引起猪只持续9 d的发热并伴有连续的呼 吸困难、 咳嗽; P R R S V - S I V引起发热和呼吸道症状 1 2 3 。 来自比利时的实验研究表明， 单一的病毒感染， 如P R R S V或S I V并不会引起猪呼吸道综合征， 只有当病毒发生混合感染时， 才会呈现猪呼吸道综合征 状。 2 . 2 . 2 P R D C - MH, P C V - 2 , P R R S V 猪肺炎支原体 ( M y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e , MH) 是引起 地方性猪肺炎的病原， 也是猪呼吸道病综合征的重要病原之一 1 3 3 。 在表现地方性肺炎症状的死亡猪只 中，3 0 0 0 .8 0 %可以检测到肺炎支原体。其传播主要是由于接触到呼吸道分泌物，很少发生空气传播 感染。 典型特症为具有较高的发病率， 临床表现为慢性、 散发的咳嗽。 美国伊阿华州立大学O p r ie s s n i g 等 1 3 在MH与P C V - 2 的混合感染的实验研究中， 将6 7 只试验猪随机分成4 组: 组1 为对照组， 组3 , 4 分别单独接种MH , P C V - 2 ， 组2 猪只在4 周龄时气管接种MH、 6 周龄鼻腔接种P C V - 2 。 双重感染的 猪呈现中度呼吸道症状，肉眼可见肺严重损伤， P C V - 2 仅引起细微的肺、淋巴结的损伤， MH引起支 气管淋巴结增生C 1 3 3 。 结果表明， 二者共同作用可以引起猪呼吸道综合征， 且MH增强了P C V - 2 对肺及 淋巴结的损伤。 D e s r o s i e r s 等 “ 的试验通过细胞因子的变化来检测MH与P R R S V对于猪只的影响， 进一步探讨猪 呼吸道病综合征发病机制。试验检测了3 组数据:白介素I L - 1 0 , I L - 1 2 和Y 一 干扰素。无论是单一病原 感染还是P R R S V - MH混合感染， 在肺泡巨噬细胞及支气管分泌物中， 3 个指标均有增加。 感染1 0 d后 1 0 D P I , 混合感染较单一病原感染组试验猪的I L - 1 2 和Y - 干扰素指标增高， 2 8 D P I I L - 1 2 的m R N A和 I I . - 1 0 的蛋白均有所增加， 4 2 D P I I L - 1 2 在混合感染组仍然保持上升，当P R R S V于肺部时， Y 一 干扰素 明显增加。 尽管I L - 1 2 的m R N A持续上升， 但是I L - 1 2 蛋白可能会干扰机体免疫系统清除P R R S V。 这 可以解释P R R S V持续存在以及混合感染会加重肺炎的现象。这一实验研究为探讨猪呼吸道综合征的 病因间相互作用以及致病机制提供了信息。 综上所述， 引起猪呼吸道病综合征的病原为多病因的 ( 主要包括猪繁殖与呼吸综合征病毒P R R S , 猪流感病毒S I V, II 型猪圆环病毒P C V - 2 、猪呼吸道冠状病毒P R C V和猪伪狂犬病毒P R V、细胞巨化 病毒P C M V 、 肺炎支原体以及多种细菌) 、多变化的 ( 不同的猪场病原不同) 、相对随机的 ( 由于猪场 的管理、猪群的饲养、猪的免疫状态) 。而其对猪群所造成的危害又是日 益严重且不容忽视的。因此， 积极的预防该病的发生，就成为现今养猪业较为重要的课题。 3 猪呼吸道病综合征的防治 近年来，随着现地猪病发生的复杂化，人们对猪病的认识也逐渐转变为多元化。特别是对于猪呼 吸道病综合征危害的认识、发现，不断地补充了新的、与猪呼吸道病综合征相关的病原 ( 例如，呼吸 道冠状病毒， 繁殖与呼吸障碍综合征病毒和圆环病毒) 。 现有的诊断技术 ( 例如， 免疫组化， P C R ) 提 广西农业生物科学 第 2 5 卷 高了 检测病原的速度和准确性。 一旦涉及的病原被确认， 人们可以采取相应的对策， 如管理、 药物、 疫 苗等来快速的减小损失，控制或消除亚临床症状。因此，应用相应的诊断技术，对特定猪场的具有呼 吸道症状的发病猪进行病原的快速、准确地检测及监测，适时掌握发病趋势，明确引发病原是及时控 制P R D C最为有效的方法。 但是， 仅仅是单一的针对某种病原进行检测或是逐一的诊断， 如首先分离病毒P R R S V, S I V, P C V - 2 ， 然后分别通过I F A , R T - P C R - P R C V, R T - P C R - S I V、 套式P C R - MH检测单个病原 3 1 。 这样的 诊断对于该病的及时、准确、全面的定性都是不利的，也不会从根本上解除该病的威胁。因此，为了 全面的提高检测病原的速度、准确性和全面性， 对于该病的诊断也应该是迅速的、多重的、高通量的。 建立迅速、多重、高通量的检测方法是防止该病发展而造成严重危害的首要前提。只有快速确定感染 某一猪场猪群的特定病原，其防治 ( 如疫苗的使用、药物的治疗)以及针对性的管理就成为有的放矢 和有所作为。 根据诊断结果确定综合防治措施: ( 1 ) 根据诊断结果， 针对明确的原发性病毒感染， 结合各猪场的实际情况， 选择合适的疫苗和免疫 程序， 应用相应疫苗进行免疫接种， 防止病毒传播而造成危害: 在母猪分娩前按计划完成猪P R R S 、 猪 流感、猪伪狂犬、猪瘟等疫苗的注射工作， 使母猪处于较高的免疫状态，继而，初生仔猪可以获得母 源抗体， 形成天然被动免疫; 仔猪接种猪喘气病疫苗， 可在仔猪1 周龄和3 周龄时， 分别注射支原体灭 活疫苗，以提高猪群免疫力; ( 2 ) 对引入的猪只及农场内的猪群进行病原扫描、 诊断、 筛查， 完善饲养管理措施: 坚持自 繁自 养 的原则，防止购人隐性感染猪;从分娩、保育、到生长育成均严格采用 “ 全进全出”的饲养方式;提 供猪群不同时期各个阶段的营养需要，保持猪群合理、均衡的营养水平;保持合理的饲养密度，有效 地控制猪呼吸道病; 减少猪群转栏和混群的次数， 减少各种应激因素， 使猪群生活在一个舒适、 安静、 干燥、卫生、洁净的环境;加强猪舍通风对流，保持舍内空气的新鲜度，降低氨气浓度;避免继发细 菌感染而引起的呼吸道病发病率，通过消毒最大程度地控制病原的传播; ( 3 ) 根据诊断结果， 明确治疗药物: 主要针对特定猪场的特定的细菌感染， 采用合理、 有效的抗生素 治疗， 定期进行抗生素药敏试验， 筛选出敏感药物， 对猪肺炎支原体和其他细菌感染进行预防和治疗。 参考文献: H U L S E N J . My c o p l a s m a a n d P R D C . S e m i n a r w o r k i n g g r o u p m e d i c i n e o f t h e p i g i n c o o p e r a t i o n w i t h b o e h r i n g e r i n g e l h e im J . T i j d s c h r D i e r g e n e e s k d , 2 0 0 2 , 1 2 7 ( 2 3 ) : 7 3 1 一 7 3 2 . O P R I E S S N I G T, T H A C K E R E L , Y U S , e t a l . E x p e r i m e n t a l r e p r o d u c t i o n o f p o s t w e a n i n g m u l t i s y s t e m i c w a s t i n g s y n d r o m e i n p i g s b y d u a l i n f e c t i o n w i t h M y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e a n d p o r c i n e c i r c o v i r u s t y p e 2 J . V e t P a t h o l ， 2 0 0 4 , 4 1 : 6 2 4一 6 4 0 . C H O I Y K, G O Y A L S M, J O O H S . R e t r o s p e c t i v e a n a l y s i s o f e t i o l o g i c a g e n t s a s s o c i a t e d w i t h r e s p i r a t o r y d i s e a s e s i n P i g s E J . C a n V e t J , 2 0 0 3 , 4 4 ( 9 ) : 7 3 5 一 7 3 7 . K I M J , C H U N G H K, C H A E C . A s s o c i a t i o n o f p o r c i n e c i r c o v i r u s 2 w i t h p o r c i n e r e s p i r a t o r y d i s e a s e c o m p l e x J . V e t J , 2 0 0 3 , 1 6 6 ( 3 ) : 2 5 1 一 2 5 6 . N O WO T N Y N, MO S T L K, MA D E R B A C H E R R， e t a l . S e r o l o g i c a l s t u d i e s i n A u s t r i a n f a t t e n i n g p i g s w i t h r e s p i r a t o r y d i s o r d e r s J . A c t a V e t H u n g , 1 9 9 4 , 4 2 ( 2 一 3 ) : 3 7 7 一 3 7 9 . H A L B U R P G， P A U L P S , V A U G H N E M， e t a l . E x p e r i m e n t a l r e p r o d u c t i o n o f p n e u m o n i a i n g n o t o b i o t i c p i g s w i t h p o r c i n e r e s p ir a t o r y c o r o n a v ir u s i s o l a t e A R 3 1 0 J . J V e t D ia g n I n v e s t ， 1 9 9 3 , 5 ( 2 ) : 1 8 4 一 1 8 8 . G I L L E S P I E R R, H I L L M A, K A N I T Z C L , e t a l . I n f e c t i o n o f p i g s b y A u j e s z k y s d i s e a s e v i r u s v i a t h e b r e a t h o f i n t r a n a s a l l y in o c u l a t e d p ig s J . R e s V e t S c i , 2 0 0 0 , 6 8 ( 3 ) : 2 1 7 一 2 2 2 . MA E S D, D E L U Y K E R H, V E R D O N C K M， e t a l . R i s k i n d i c a t o r s f o r t h e s e r o p r e v a l e n c e o f D 为 +c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e , p o r c i n e i n f l u e n z a v i r u s e s a n d A u j e s z k v S d i s e a s e v i r u s i n s l a u g h t e r p i g s f r o m f a t t e n i n g p i g h e r d s J . Z e n t r a l b l V e t e r i n a r m e d B , 1 9 9 9 , 4 6 ( 5 ) : 3 4 1 一 3 5 2 . 一IJ工esJ ，10乙 rjr.J 门IJFwe习 丹J.吐 厂LFL |习一!J 亡db rLlesL 一!J: ，声下只 一ILlesL 增刊李曦等:猪呼吸道疾病综合征1 7 1 T H A C K E R E L , H A L B U R P GR O S S R F , e t a l . M y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e p o t e n t i a t i o n o f p o r c i n e r e p r o d u c t i v e a n d r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s - i n d u c e d p n e u m o n i a J . J C l i n Mi c r o b i o 1 , 1 9 9 9 ， 3 7 : 6 2 0 一 6 2 7 . MA D S E N M L , N E T T L E T O N D , T H A C K E R E L , e t a l . T r a n s c r i p t i o n a l p r o f i l i n g o f M y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e d u r in g ir o n d e p l e t io n u s in g m ic r o a r r a y s J . 众 ic r o b io lo g y , 2 0 0 6 ， 1 5 2 ( 4 ) : 9 3 7 一 9 4 4 . V A N R E E T H K， V A N G U C H T S， P E N S A E R T M. I n v i v o s t u d i e s o n c y t o k i n e i n v o l v e m e n t d u r i n g a c u t e v i r a l r e s p i r a t o r y d is e a s e o f s w i n e : t r o u b l e s o m e b u t r e w a r d i n g J V e t I m m u n o l I m m u n o p a t h o l ， 2 0 0 2 ， 8 7 ( 3 一 4 ) : 1 6 1一1 6 8 . ，IJFeel -11U工.上 臼ll 1 2 J V A N R E E T HK， N A U WY N C K H, P E N S A E R T M. D u a l i n f e c t i o n s o f f e e d e r p i g s w i t h p o r c i n e r e p r o d u c t i v e r e s p i r a t o r y s y n d r o m e v i r u s f o l l o w e d b y p o r c i n e r e s p i r a t o r y c o r o n a v i r u s o r s w i n e i n f l u e n z a v i r u s : a c l i n i c a l v i r o l o g i c a l s t u d y 1 3 O P R I E S S N I G T, J . V e t Mi c r o b i o l , 1 9 9 6 , 4 8 ( 3 一 4 ) :3 2 5 一 3 3 5 . s y n d r o me 2 0 0 4, 4 1 t o p i g s T H A C K E R E L， Y U S , e t a l . E x p e r i m e n t a l r e p r o d u c t i o n o f p o s t w e a n i n g m u l t i s y s t e m i c w a s t i n g b y d u a l i n f e c t i o n w i t h M y c o p l a s m a h y o p n e u m o n i a e a n d p o r c i n e c i r c o v i r u s t y p e 2 J . V e t P a t h o l ， ( 6 ) :6 2 4 E 1 4 D E S R O S I E R S R . 一6 4 0 . D i a g n o s i s a n dc o n t r o l o f 1 9 9 7 : 3 3 3 sw i ne r e s p i r a t o r y d i s e a s e s C / / P r o c e e d i n g s o f t h e A m e r i c a n As s o c i a t i o n o f S wi n e P r a c t i t i o n e r s ，一3 4 4 . ( 责任编辑梁健) ( 上接第1 6 6页) A P P A R A O K B , T O T E Y S M. C l o n i n g a n d s e q u e n c i n g o f b u f f a l o m a l e - s p e c i f ic r e p e t i t i v e D N A: S e x i n g o f I n - V it r o d e v e l o p e d b u f f a l o e m b r y o s u s i n g m u l t i p l e x a n d n e s t e d p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t io n J . T h e r i o g e n o l o g y ， 1 9 9 9 ， 5 1 :7 8 5一 7 9 7 . P AGE D C, MO S HE R R, S I MP S ON a f i n g e r p r o t e i n J . C e l l ，1 9 8 7 ， E W e t a l . T h e s e x - d e t e r mi n a t i o n r e g i o n o f t h e h u ma n Y c h r o mo s o me e n c o d e s 5 1 : 1 0 9 1 一 1 P E I P P O J , H UH T I N E N M， K O T I L A I NE N T, 1 0 5 e t a l . S e x d i a g n o s i s o f e q u i n e p r e i m p l a n t a t i o n e m b r y o s u s i n g t h e 幻司月 1土，111 rLLL工esL p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n J . T h e r io g e n o l o g y , 1 9 9 5 ， 4 4 : 6 1 9 一 6 2 7 . 徐亚欧， 唐榕. P C R 扩增Z F Y 及Z F X 基因对奶牛的性别鉴定 J . 西南民族学院学报: 畜牧兽医版， 1 9 9 3 , 1 9 ( 1 ) : 1一3 . S I N C L A I R 冬H , B E R T A P , H A W I A N S J R , e t a l . A g e n e f r o m t h e h u m a n s e x d e t e r m i n in g r e g io n e n c o d e s p r o t e i n w i t h h o m o l o g y t o a c o n s e r v e d D N A m o t i f J . N a t u r e ，1 9 9 0 , 3 4 6 : 2 4 0 一 2 4 6 . K O O P M A N P , G U B