犬传染性肝炎的诊断与防治

第六届理.会第二次会议盆教学专业委员会2 0 0 6 年会议论文集 备特异性抗P D - L 1 / P D - L 2 单抗或其可溶性抑制因子， 对P D - L 1 / P D - L 2的作用进行阻断， 以增强 C T L杀伤癌细胞的功能 ;或者将编码 P D - L 1 / P D - L 2的基因重组进病毒载体，设 计抗原特异性病毒载体疫苗 。而对肿瘤进行免疫干预性治疗。 六、展望 自B 7 家族的第一个成员B 7 - 1 发现至今已 有 1 0多年。此间，人们对控制T h 前体细胞 分化机制的了解不断深入。在T C R传导的第一信号存在时， B 7 - 1 和B 7 - 2 分子与T细胞上 C D 2 8 分子作用， 可活化T 细胞， 使之增殖、 分泌I L - 2 , I L - 4 , I F N - y 和T N F - a等多 种细胞 因子， 上调C T L A - 4 分子在T 细胞上的表达。 C T L A - 4 分子与B 7 - 1 和B 7 一分子的结合， 可 拮抗C D 2 8 分子介导的协同刺激作用，抑制初次免疫应答，防止T细胞过度活化。B 7 协同 刺激分子及其相应受体结合所产生的信号在调节 T细胞活化及效应性细胞因子分泌中起重 要作用， 具有负性调节作用的协同刺激分子对免疫应答的适度进行、 防止自 身免疫疾病的发 生具有重要作用。进一步研究这些分子的生物学作用将有助于全面理解 T细胞活化异常所 致疾病的发病机制， 为增强肿瘤病人的免疫机能， 诱导移植耐受及控制自 身免疫性疾病等提 供了新的治疗策略，具有重要的经济价值和社会意义。 参考文献略 犬传染性肝炎的诊断与防治 刘燕玲 衰宝 任文涉 ( 吉林大学农学部实 验动物中心 长春，吉林 1 3 0 0 6 2 摘 要:由犬 传染性肝炎病毒 ( C A V - I) 引 起的疾病在犬、 孤、熊等动物中 有很强的致病性.犬传染性肝 炎 病毒主要引 起犬 传染 性肝炎 和熊、 孤脑炎. 该病毒广泛分布于 全世界， 是对犬 业、毛皮动物养殖业危害 最大 的 疫 病 之一 本 文 主u 淋 .C A V - I 的 流 行 状况 、 诊 断 及 免 疫 作 一简 介. 关键词:犬 传染性肝炎;诊断;免疚;防治 犬 传染 性肝炎 病毒( I n f e c t io u s c a n in e h e p a t it i s v i r u s , I C H V ) 又名罗巴 斯病 病毒( R u b a r th d i s e a s e v ir u s ) , 1 9 8 4 年夏 咸柱等在我国首次分离出 犬传染性肝炎病毒， 证明 我国 犬中 也有 该病毒的感染。 犬传染性肝炎病毒呈二十面体立体结构， 无囊膜。 其基因组为单分子的、 线 状双链D N A结构，长3 6 -3 8 k b 。末端有一个共价相联的5 5 k u 终端蛋白 ( T P ) ，末端蛋白 与病毒的感染性有关， 存在末端蛋白的病毒D N A可使其感染性提高1 0 0 倍。 犬传染性肝炎 病毒通过其纤突球部与敏感细胞膜上的 特异性受体结合后，即 开始了 感染过程。 川 犬腺病毒有两种类型: 其I 型为犬传染性肝炎病毒， 其I I 型为单纯引起呼吸道病变而不 引起肝炎的腺病毒， 即A 2 6 株 ( 多伦多A 2 6 / 6 1 ) o I 型和I I 型可用红细胞凝集范围不同血来 区分，I 型可以凝集人“ O ， 型血细胞和豚鼠红细胞，而I I 型只能凝集人“ 0 ,， 型红细胞。对病 犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的I 型和I I 型犬腺病毒D N A进行多聚酶链式反应 ( P C R ) 检测， 根据扩增产物的大小不同， 可以将两型明显分别开来， 犬腺病毒 毒I I 型为 同源性。 I 型为5 2 0 b p ， 犬腺病 1 0 3 0 b p ， 且通过试验发现I 型和I I 型 病毒两者在引 物及其他区 域均有一定 程度的 、犬传染性肝炎流行状况及危害 本病在全世界范围内都有发生. 不分季节、性别和品种。各年龄段犬都有发生，以幼犬 发病最为多见。 该病毒是哺乳动物中致病性最强的一种病毒， 可引起犬的一种急性、 败血性 传染病， 死亡率很高。 近几年来在我国的黑龙江、 广西、北京等地都有病例发现。且发病范 围广泛: 包括鳌犬、 家养宠物犬等。 一般在感染后的2 一1 2 天死亡， 死亡率为2 5 %- 4 0 %0 主要的病理解剖变化是:肝脾肿大，有血样腹水，胆囊壁水肿，肠系膜淋巴结充血和肿胀。 组织学变化: 包括肝中心叶坏死和核内 包涵体， 肾 小球内沉积有免疫复合物。 现该病缺乏特 文献综述 异性治疗措施。 二、临床特征 患传染性肝炎的犬，按其症状可分为最急性、急性、慢性和不显 ( 无症状)型四型。 最急性病例见于流行初期，病犬出 现呕吐、腹痛、腹泻症状后数小时内即死亡。 急性症状的病犬初期表现怕冷， 精神轻度沉郁， 并且有水样鼻液和眼泪等症状，高热达 4 1 0C ，并持续2 - 6 天，体温曲线呈马鞍形变化。以后渴欲明显增加， 甚至出现两前肢浸入水 中狂饮，这是本病的特征性症状，呕吐白 沫，腹泻，粪便带血，尿深黄。血凝不良。口 腔、 齿酿出血或并随病程的进展而出现呼吸和脉搏增数，呼吸困难，干咳，胸部听诊有摩擦音， 全身无力、 食欲不振、 肝区有轻微的压痛、 按压剑突表现有剧烈痛感等各种症状， 在急性症 状后期， 可见有贫血、黄疽、咽炎、扁桃体炎、淋巴结肿大，血样检测可见白细胞减少和血 凝时间延长; 特征性症状还表现在眼睛上， 角膜混浊， 其特点是由中心向四周扩散，常在 1 - 2 天内为浅蓝色膜所覆盖， 轻者2 -3 天后可不治而愈， 重者可造成角膜穿孔， 即所谓的“ 蓝 眼” 病变。并伴有水肿、眼睛半闭， 流有大量浆液性分泌物。如不及时治疗通常在两三天内 死亡。 慢性型病例见于流行的后期， 病犬仅见轻度发热， 食欲时好时坏， 便秘与腹泻交替， 此 类病犬死亡率较低但生长发育缓慢， 且有可能成为长期排毒的传染来源。 有的病犬狂躁不安， 边叫边跑，可持续2 -3 天。 不显 ( 无症状)型 :无临床症状，但血清中有特异抗体。 三、临床诊断方法 ( 一) 病毒分离和血清学诊断 特异性诊断主要依靠病毒分离和血清学诊断。 病毒分离是用发病初期的血液、 扁桃体棉拭子或死亡动物的肝、 脾乳剂接种犬肾原代或 继代细胞，由于毒株和接毒剂量的不同，细胞病变最早的出现于接毒后3 0 小时，而有的需 待6 -7 天才能见到。随后即可应用补体结合试验检测细胞培养物中的病毒抗原。应用中和 试验， 更可进一步鉴定病毒的型， 以人工感染动物的特异免疫血清作为抗体， 应用这种抗体 作补体结合试验，还可检出急性病犬肝脏以及血清和腹水中的病毒抗原。 血清学诊断是用组织培养液做抗原进行补体结合试验， 或用浓缩的感染细胞培养物为抗 原作琼脂扩散试验，检测血清抗体。在作中和试验和血凝抑制试验 ( 用人的 O型血细胞) 时有人建议应用间隔 1 4 天的双份血清，以 抗体效价提高1 倍以上者作为该症感染的阳性指 标。 实验室检查病犬血液， 会发现白 细胞减少到2 5 0 0 -3 0 0 0 个/ m m ， 淋巴细胞3 6 个左右， 血凝时间延长，尿中出现蛋白和胆红素。 二)荧光抗体检测 应用荧光抗体技术， 可以直接检测组织切片、 触片或感染细胞培养物中的病毒抗原。 根 据反应结果可判断感染病毒的情况。 四、临床治疗方法 ( 一)抗病毒 病初大量注射传染性肝炎高 免血清， 每只犬 按2 -3 m 1吨 体重皮下或肌肉 注射， 连 用3 天，可有效缓解临床症状。但对特急性病例和发病中后期无效。 ( 二) 对症治疗 静脉滴注葡萄糖、电解质液体及三磷酸腺昔、 辅酶A ， 对本病康复有一定的作用。 也可 用大青叶、 板蓝根、 维生素C 、 维生素B ,: 进行肌肉 注射。 全身应用 抗菌素及磺胺类药物防 止继发 感染。 对贫血严重的 犬， 可输全血， 间隔4 8 小时以1 7 m 1/ k g 体重的 量， 连续 输血3 次。为防止继发感染，投与广谱抗生素，以静脉滴入为宜。 出现角膜混浊， 一般认为是对病原的变态反应， 多可自 然恢复。 若病变发展使前眼房出 第六届理事会第二次会议盛教学专业委员会2 0 0 6 年会议论文集 血时，用3 %-5 % 碘制剂 ( 碘化钾、碘化钠)、水杨酸制剂和钙制剂以3 : 3 : 1 的比例混合 静脉注射， 每日1 次， 每次5 -1 0 m l , 3 -7日 为1 个疗程。 或肌肉注射水杨酸钠， 并用抗生 素点眼液。注意防止紫外线刺激，不能使用糖皮质激素。 对于表 现肝炎 病状的犬， 可按急 性肝炎 进行治 疗。 葡醛内 酷5 - 8 m g / k g 体重肌注， 每日 1 次， 辅酶A 5 0 - 7 0 0 U / 次， 稀释后静滴。 肌昔1 0 0 - 4 0 0 m g / 次口 服， 每日2 次。 核糖核酸6 m 留 次肌注，隔日l 次，3 个月为 1 个疗程。 ( 三) 也可采用中西医结合， 对症施治。 治疗方法: ( 1 ) 中药以泻肝火利湿热为治疗原则。 方用龙胆泻肝汤。 本方是治疗肝胆湿 火所引起的疾病的有效方剂之一。方组: 龙胆草6 克，柴胡4 克，桅子4 克，黄答4 克， 当归3 克，生地4 克， 木通3 克，车前3 克，泽泻3 克， 灸甘草4 克。( 1 0 千克以上的病犬 药量酌加) 。 加水适量煎至1 0 0 0 毫升。 另加口服补液盐 ( O R S ) 灌服。 每天 1 剂， 连用5 天。 ( 2 )西药以对症和支持疗法为治则。选用以下药物:复方生理盐水 2 0 0 - 5 0 0毫升、5 0 % 葡 萄糖4 0 毫升，A T P I 支，辅酶A , V C , V B 6 、先锋霉素各 1 支，混合静注，每天 1 次，连 用3 - 5 天。 同时肌注或口服肝泰乐以保肝利胆; 肌注V B 1 2 防止组织渗血和出血。 每天 1 次， 连用5 天。出现角膜混浊现象采用氯霉素眼药水和普鲁卡因青霉素少许混合点眼。 ( 3 ) 也可 皮下注射鱼腥草注射液， 具清热解毒抗感染的功效，, 2 次/ d ;皮下注射安痛定， 解热镇痛, 2 次/ d ; 皮下注射泻痢停，2次/I d ;同时加强营养， 采用猪血和肉 丁蒸 制后饲喂犬， 对治疗贫血有很好的 疗效。 五、预防方法 防止盲目由国外及外地引进犬， 防止病毒传入， 患病后康复的犬一定要单独饲养， 最少 隔离半 年以 上。 对此病虽 有多 种 怡疗方法， 但无特效药， 主要重在免疫预防。自 然感染的 发 病犬， 免疫期长达5 年之久。 可见人工接种疫苗是防治本病的根本方法。 早期人们选用感染 犬的脏器制成的C A V I 福尔马林灭活苗进行免疫，取得了一定的效果，后来主要以细胞培 养毒代替感染动物组织生产灭活苗。 然而无论是脏器灭活苗还是细胞培养灭活苗， 都存在免 疫用量大、 免疫期较短的缺点， 这就限制了灭活苗的使用。 其次是通过康复或经疫苗接种的 母犬以哺乳的形式将母源抗体传给子犬。 病毒特异的免疫球蛋白也可提供大约三周的暂时性 被动免疫， 这对于刚刚感染病毒或可能受到感染的动物采用免疫血清进行紧急预防注射的方 法尤其有用。疫病一旦发生，为保护良 种小犬可考虑采用。下面介绍一下疫苗的研究状况: 一) C A V- I 弱毒苗 C A V- I 弱毒苗是将分离的病毒株，在狗肾细胞上连续传了 5 1代后制备的， 此苗的优点 是:免疫性很好，1 1天即可产生免疫力。缺点是:接种的动物从尿中排毒，且排出的病毒 经狗传四代后弱毒可反祖为强毒。 后来O ff 将这种狗肾细胞驯化的弱毒株再经猪肾细胞多次 传代后克服这种反祖现象。但这种苗会引起犬的蓝眼病和局部间质性肾炎，且从尿中排毒。 而且，许多学者发C A V- I 疫苗免疫的犬也会发生C A V- I I 的感染。 ( 二) C A V- I I 弱毒苗 早期人们从一患犬传染性喉气管炎的犬体内分离的C A V I I Ma n h a tt a n 株， 在狗肾细胞上 培养了1 4 代， 又在猪肾细胞上传了3 0 代， 用于犬的C A V免疫试验， 证明用C A V- 1 1 进行犬 腺病毒的免疫， 不但可同时保护动物抵抗犬I 型腺病毒和犬1 1 型腺病毒的感染， 而且发现犬 I 型腺病毒弱毒苗的缺点可以得到克服。 这表明犬 I 、I I 型腺病毒在免疫原性上有密切的关 系，目前世界上所用的犬腺病毒的疫苗都以1 1 型腺病毒的代替犬 I 型腺病毒的。 ( 三)C A V口服疫苗 1 9 8 9 年S u m m e r 用C A V M a n h a tt a n 株 ( 此株在狗肾 细胞上培养了1 6 代， 又在猪肾 细胞 上传了3 0 代) ， 对貉、狐、烷熊等野生动物进行了C A V口服免疫研究，结果表明这些动物 对通过诱饵口 服C A V - I I 苗能产生免疫应答。 后来， 范泉水通过试验也证明了C A V - I I S Y 株通过口服或饵料的途径可对犬进行免疫， 这一研究为犬口 服联合疫苗以及犬1 1 型腺病毒为 载体的口服狂犬一腺病毒重组苗的研究奠定了基础。 文献缤述 ( 四)签因工程疫苗 犬腺病毒弱毒株具有良 好的免疫原性与稳定的遗传性，并且包括E 3 区在内的基因背景 已 基本查清， 国内 外正进行以犬腺病毒弱毒株为载体的狂犬病病毒、 肠炎病毒以及犬温热病 毒基因重组疫苗的 研究。 研制基因 苗在选取载体时， C A V - I I 比C A V I 有更多的 优点。 “ ， 近年来， 南京警犬研究所研制的犬传染性肝炎氢氧化铝灭活疫苗， 对预防本病有良 好的 免疫效果。1 . 5 - 2 月龄的犬，以1 5 天的间隔接种2 次灭活苗，每次1 毫升，至少可获6 个 月的免疫力，对犬有良好的安全性，无任何局部和全身反应。 参考文献略 转移因子在家畜疫病防治中的应用 韩书祥 ( 大连三仪公司技术服务部辽宁大连) 转移因子 ( T F )是机体内白细胞中有免疫活性的T淋巴 细胞所释放的一种能够转移免 疫致敏信息的因子，它能够特异地将供体某一细胞免疫的功能转移给受体，激活 T细胞， 增强机体细胞免疫和体液免疫， 诱导干扰素和白 细胞介素一 2的产生， 非特异性地增强受体免 疫功能， 是一种新型免疫激发剂，广泛用于动物病毒病，细菌病、真菌病、寄生虫病等的防 治。 一、 T F 的主要特点 T F分子量小，无毒，无抗原性，不引起过敏反应， 可超越种系界限应用等优点。由于 T F 无种属特异性，即人T F 可能治疗动物性疾病， 动物的T F 可以用于人。因而根据细胞来 源不同又 有不同 种类的T F ， 如人转移因 子( H - T F ) 、 猪 转移因 子( P - T F ) 、 牛 转移因 子( B - T F ) . 羊转移因 子