安捷伦GCMS培训资料(高级培训).pdf

1 Author：DengYun GC MS Interface Data System 气相色谱/质谱基础 2 Author：DengYun 常用的气路连接图 主供 气体 氦气 HP 6890 脱氧管 脱水管 开关阀 二级减压阀 主供气 开关阀 气路连接气路连接 3 Author：DengYun 须使用GC 专用铜管或不锈钢管。 塑料管会渗透O2和其它污染物。还可能会释放其它可被检测到的 干扰物。 管子使用前先用溶剂冲洗，载气吹干。 根据工厂的推荐，每用完3瓶气，应更换过滤器，以防止发生气体 的污染。 每隔一定时间，应对所有外加接头进检漏（大约每隔 4-6个月)。 管路和净化器管路和净化器 减压阀和流量控制器减压阀和流量控制器 载气必须通过控制形成恒定的压力和恒定的流量。上下游控制器压 差保持1公斤以上。 根据所用的柱类型，载气压力应在60-100psi (大孔径柱即取60， 细孔径柱即取 100)。 推荐管线压力推荐管线压力 4 Author：DengYun 质谱常用术语 丰度（相对丰度、绝对丰度） 质荷比 (m/z) 基峰 分子离子 母离子、子离子 同位素峰5101520253035404550556065707580859095 100 105 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000 5500 6000 6500 7000 7500 8000 8500 9000 9500 85 41 56 100 67 27 CH3 O 5 Author：DengYun M/Z Abundance 82 166 182 303 50100150200250 1000000 Scan 32 (5.281 min): ALKDEMO.D M/Z Abundance 82 166 182 303 50100150200250 1000000 Scan 33 (5.289 min): ALKDEMO.D M/Z Abundance 82 166 182 303 50100150200250 1000000 Scan 34 (5.297 min): ALKDEMO.D M/Z Abundance 82 166 182 303 50100150200250 1000000 Scan 35 (5.305 min): ALKDEMO.D Time Abundance 5.255.265.275.285.295.305.315.32 5.33 2000000 4000000 6000000 8000000 TIC: ALKDEMO.D 32 33 34 35 31 36 30 总离子色谱 6 Author：DengYun 分子离子 在纯化合物质谱中，作为分子离子的必要但非充分的 条件： 它必须是谱图中最高质量的离子 它必须是奇电子离子 它与谱图中高质量区的重要离子的差应是合理的碎片 丢失 7 Author：DengYun 总离子流图的构成 总丰度总丰度 = 638,444 (3.892, 638444) 8 Author：DengYun 12 50 100 150 200 250 300 11109 87 6 Time minutes Mass daltons 质谱数据是三维的 9 Author：DengYun 质谱仪 Outlet Quadrupoles Quadrupoles 离子源离子源 质量分析 器 质量分析 器检测器检测器 * Ion formation and collimation Ion separation and speciation High Vacuum Pump Mechanical Pump Ion detection and amplification 样品导入样品导入 真空系统真空系统 Vacuum Manifold 10 Author：DengYun 提供足够的平均自由程 提供无碰撞的离子轨道 减少离子-分子反应 减少背景干扰 延长灯丝寿命 消除放电 增加灵敏度 为什么为什么MSMS需要真空需要真空 11 Author：DengYun 电子电离（EI） 化学电离（CI） 快原子轰击（FAB） 场电离与场解析（FI，FD） 电喷雾电离（ESI） 大气压化学电离（APCI） 电离技术简介 12 Author：DengYun 电子电离（EI） e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e e ee e e e e e e e e e ee FILAMEN T M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M+. M+ . M+. M M M M M M M M M MM M MAGNET MAGNET M M M M M M M M 13 Author：DengYun REPELLER FILAMENT ee ee e e e e e M M M M M + . M+. F F + . 1 2 M e e ee ee e e e e e e e e e e e e e e ee 电子电离（EI） 14 Author：DengYun 化学电离（CI） 工作原理：离子-分子反应即：反应离子与样品分子相遇，质子亲和势强者占有质子 电离室压力：0.5 torr 调谐目标：反应气丰度比 甲烷I29/I170.2 异丁烷I57/I431 氨I35/I180.05 1 Author：DengYunAuthor：DengYun Agilent5975NMSD开机操作 1、打开载气（He）控制阀，设置分压阀压力至0.5MPa； 2、打开计算机，进入Windows XP系统； 3、打开6890NGC、5975MSD电源，等待仪器自检完毕； 4、在计算机桌面双击“仪器 1”，进入MSD化学工作站； 5、在 “真空”菜单中，观察真空泵状态； 6、20分钟后，观察离子源、四极杆温度； 7、1-2小时后，观察空气、水的状态； PC桌面的图标 PC桌面的图标 2 Author：DengYunAuthor：DengYun 观察真空泵状态 1、在 “视图 ”菜单，选择“调谐和真空控制”进入调谐与真空控制界面； 2、在“真空”菜单中选择“真空状态”，观察真空泵运行状态； 如果仪器真空泵配置为分子涡轮泵，状态显示涡轮泵转速Turbo Pump Speed应很快达到100Percent， 否则，说明系统有漏气，应检查侧板是否压正、放空阀是否拧紧、柱子是否接好；如果仪器真空泵配 置为扩散泵，状态显示压力Pressure应达到100mToor左右，否则，说明系统有漏气，应进行上述检查 。 3 Author：DengYunAuthor：DengYun 观察离子源、四极杆温度 1、在 “视图 ”菜单，选择“调谐和真空控制”进入调谐与真空控制界面； 2、在“参数”菜单中选择“编辑MS温度”，观察离子源、四极杆温度； 3、观察离子源、四极杆温度的实际值是否l达到设定值，如果达到了，说明质谱温度已经准备好。 4 Author：DengYunAuthor：DengYun 观察空气、水的状态（一） 1、在 “视图 ”菜单，选择“调谐和真空控制”进入调谐与真空控制界面； 2、在“参数”菜单中单击“手动调谐”，进入编辑质谱参数； 3、在更多参数单击调谐参数 4、在采集参数中，将质量数 1设为69、质量数 2设为28、质量数3设为18，单击“OK”。 5 Author：DengYunAuthor：DengYun 观察空气、水的状态（二） 单击扫描，质谱进行扫描分析，完毕后单击停止，停止扫描操作。 观察28、18对69的相对丰度，如果氮气28/6910%，水18/6920%说明质谱真空状态已经准备 好。 。 点击MS关闭。 6 Author：DengYunAuthor：DengYun 回忆开机操作过程 打开He气； 打开计算机； 打开GC、MSD电源； 进入MSD化学工作站； 观察真空泵状态，分子涡轮泵很快达到 100Percent，扩散泵压力应很快达到 100mToor左右。 观察观察离子源、四极杆温度的实际值 是否达到设定值。 观察空气、水的状态，氮气28/6910%， 水18/6910 %69峰高 通过 Manual Tune/Repeat Profile 检查泄漏部位: 氩-质量数 40 二氧化碳 - 质量数 44 真空故障排除 Slide #19 Author：dengyun 水和空气检测 Slide #20 Author：dengyun 离子源分解图和部件 毛细管柱插口 离子源壳体 离子源加热组件 推斥极 推斥极绝缘环 推斥极绝缘环 灯丝 离子聚焦 拉出极柱体 拉出极平板 透镜绝缘体 入口透镜 Slide #21 Author：dengyun 清洗离子源程序清洗离子源程序 所有真空室内的操作须戴不掉毛的手套所有真空室内的操作须戴不掉毛的手套 从工作站中诊断与真空菜单/diagnostics/power-on temps将离子源和四极杆温度设为0 ,拆 卸离子源 用专用绿色砂纸或三氧化二铝粉（用无水乙醇混成糊状）打磨除灯丝及螺丝外的金属零件表 面，特别注意离子轨道内各部分。 用水仔细冲洗 分析纯无水乙醇清洗两次 将所有离子源部件（包括未打磨的部件）放入洁净烧杯，分析纯无水乙醇超声波清洗两次， 每次10分钟 放于洁净烧杯，置于GC柱温箱内，将炉温设为20C（使风扇不停转动）约20分钟 组装，确认无短路，放回。插好各部件电线 抽真空（确认泵工作正常）。1小时后将温度升至正常状态 调谐 本章将学到: 如何设置并调试定量数据 如何编辑定量结果 如何产生定量报告 定量数据分析 步骤 3: 查找限定离子 步骤 2: 保留时间窗口内查找目标离子 步骤 1: 在信号窗口内查找峰积分 化学工作站定量概念 分析标准物 分析未知物 建立标准曲线 由曲线计算含量 Response Amount Std 1 Unknown Unknown amt Unknown response Std 2 定量过程 连同校正表下载方法文件. 下载第一个标准数据文件 选择 Calibrate / Set Up Quantitation. 设置定量数据资料 选择Calibrate / Set Up Quantitation. 定量数据资料表 参考峰窗口：用于内 标 非参考缝窗口：用于 其它化合物 相关窗口：允许目标 离子与限定离子的保留 时间之差 默认值+/-：峰起点与 终点须在此范围内 浓度单位 内标浓度 是否用RTE积分 选择Calibrate / Set Up Quantitation. 参考峰窗口：用于内 标 非参考缝窗口：用于 其它化合物 相关窗口：允许目标 离子与限定离子的保留 时间之差 默认值+/-：峰起点与 终点须在此范围内 浓度单位 内标浓度 是否用RTE积分 用于设置 RTE 积分参数 用于保存当前 RTE 积分参数 用于加载，修复，保存 RTE积分参数 RTE 积分参数 峰起点与终 点丰度差与 峰高相比 基线位置。 分离相邻两 峰的最少扫 描次数 基线落下或切线 峰位置（顶 点或峰重心 最小峰面积 最多峰数目 RTE积分文件扩展名为 .P 单击 Insert Above 输入化合物 输入化合物 (续) 内标指令 用于: 增加新级别 级别再校正 删除级别 更新校正表 1。 10。000 1。 10。000 再校正 分别选择对浓度和保留时间是否再校正 分别对浓度和保留时选择再校正的方式（取代或平均） 选择再校正的级别 选择Recalibrate 化合物信息 - 第 1页 化合物信息 - 第 2页 化合物信息 - 第 3页 校正曲线 校正曲线 自动定量数据库 定量报告选项 “MultiView” 窗口结果演示 交叉定量 1. 选择 Method/Edit Method. 2. 选定Quant Report 3. 选定报告格式和目的地 4. 保存方法! 自动生成定量报告 数据采集 采集方法 调谐文件 GC 参数 MS 参数 注射器参数 定性分析 选择检索 检索策略 报告选项 对自动产生的报告中 检索的结果进行检查 定量分析 积分选择 积分参数文件 定量资料库 报告规格 检查自动产生的定量报告 方法流程 本章将学到: 如何设置并调试定量数据 如何编辑定量结果 如何产生定量报告 定量数据分析 步骤 3: 查找限定离子 步骤 2: 保留时间窗口内查找目标离子 步骤 1: 在信号窗口内查找峰积分 化学工作站定量概念 分析标准物 分析未知物 建立标准曲线 由曲线计算含量 Response Amount Std 1 Unknown Unknown amt Unknown response Std 2 定量过程 连同校正表下载方法文件. 下载第一个标准数据文件 选择 校正校正/ 设定定量设定定量. 设置定量数据资料 定量数据库设置. 定量数据资料表 参考峰窗口：用于内 标 非参考缝窗口：用于 其它化合物 相关窗口：允许目标 离子与限定离子的保留 时间之差 默认值+/-：峰起点与 终点须在此范围内 浓度单位 内标浓度 是否用RTE积分 选择Calibrate / Set Up Quantitation.