DNA重组技术的基本工具(人教赵).ppt

,DNA重组技术的基本工具,复习：,DNA分子的结构：（磷酸二酯键）基因概念：基因在染色体上排列特点：基因的功能：基因的结构：,基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出符合人们需要的新的生物类型和生物产品。又叫做DNA重组技术。,（一）基因工程的概念,基因拼接技术或DNA重组技术,生物体外,基因,DNA分子水平,定向地改造生物的遗传性状，产生人类需要的基因产物,剪切,拼接,导入,表达,基因重组,一种限制酶只能识别一种特定脱氧核苷酸序列；并在特定位点切割。,一.限制性核酸内切酶“分子手术刀”,（二）基因工程的基本工具,1、来源：,2、种类：,3、作用：,主要是原核生物,4000种。,4、作用实质：,断开磷酸二酯键,5、结果：,切割位点,和之间,和之间,未端类型,平末端,粘性末端,要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？,要切两个切口，产生四个黏性末端。,被同一种限制酶切断的几个来源不同的DNA是否具有相同的黏性末端？,两个不同的的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。,被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端。,二.DNA连接酶“分子缝合针”,1.作用：,把两条末端之间的缝隙“缝合”起来，恢复断开了的磷酸二酯键。,2.来源,大肠杆菌中分离的E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端T4噬菌体中提取的T4DNA连接酶两种末端都可以连接,3.DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？,（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。,（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。,此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。,三、基因进入受体细胞的载体”分子运输车”,、作用：将外源基因导入受体细胞,、特点（条件）,1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存,2、有适宜的限制性内切酶酶切位点，最好是对多种限制性内切酶有单一切点,3、具有标记基因，便于进行筛选,4.对受体细胞无害,、常用的运载体：,质粒（最常用）、噬菌体的衍生物和动植物病毒等,质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。,识别特定脱氧核苷酸序列，并在特定位点切割（实质：断裂磷酸二酯键）,在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）同种限制酶B.两种限制酶同种连接酶D.两种连接酶,练习,注意：要用同一种限制酶切取目的基因和运载体，并用DNA连接酶连接。,不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNA,D,练习,双基练习：,一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出符合人们需要的新的生物类型和生物产品。又叫做DNA重组技术。二、DNA重组技术的基本工具1.限制性核酸内切酶-”分子手术刀”(1)主要来源:从原核生物中分离出来的.(2)特点:能够识别DNA特定的核苷酸序列,切开,两个_之间的_.(3)DNA末端:限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式:_和_.2.DNA连接酶-”分子缝合针”作用:将双链DNA_,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_.,3.基因进入受体细胞的载体-”分子运输车”(1)载体的种类质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并具有自我_能力的双链_DNA分子;噬菌体的衍生物;_.(2)载体的特点能够在细胞内_;有一个或多个_切割位点,便于供源DNA的插入.具有_基因,供重组DNA的鉴定和选择.,假如目的基因导入