创新科技项目结题报告书 1

项目类别项目批准号附件1 华南农业大学大学生科技创新活动项目结题书项目名称： 一种新的犬类副黏病毒分离与鉴定 申 请 人：梁淑慧 张元福 所在院部：兽医学院 专业年级：动物医学2002级 联系电话： 38675489 指导教师: 贺东生 职称：副教授 立项日期： 二 五 年 四 月 六 日结题日期： 二 六 年 四 月 三 日华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心 填 表 说 明 一、 填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。 二 、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报大学生科技创新活动项目指导中心。三 、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；四级标题四号仿宋，用“”标示。示例：一、XXXX课题立项与研究的目的意义（一）XXXX课题立项与研究的目的的意义1、XXXX课题立项与研究的目的意义XXXX课题立项与研究的目的意义四、如表格不够，可以加附页。一、简表项目简况项目名称一种新的犬类副黏病毒分离与鉴定 项目类别A、文科类； B、理科类；申请经费3000元起止年月2005年6月2006年5月项目组成员姓 名性别出生年月年级专业班级所在学院上学年综合测评分项目中的分工本人签字梁淑慧女1984年7月动物医学2002级4班兽医学院73.70病毒生物性状测定张元福男1983年9月动物医学2002级3班兽医学院67.40病毒生物性状测定指导教师情况姓名贺东生性别男学位博士职称副教授研究方向兽医传染病学授课名称兽医传染病学，分子生物学实验技术，分子病毒学专题 等项目简介以往的报道中，犬副黏病毒包括犬副流感病毒2型(Canine parainfluenza virus 2，CPMV)和犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)。但是，在前期创新研究中，我们从犬分离到一种新的副黏病毒，它与新城疫血清有强烈反应（1：128）；与CDV反应很弱；经PCR检测，其有与新城疫病毒有相同的F片段，而且试验证明它对鸡有致病作用，这些特性不是CPMV和CDV所具有的，初步鉴定为犬的一种新型副粘病毒，可能是新城疫病毒的变种。国内缺乏对这种新病毒的研究，本项目对这种犬类新型副黏粘病毒的特性进行深入研究，包括鸡胚培养特性、组织培养传代、电镜形态学观察、红细胞凝集谱、核甘酸测序、毒力测定、动物感染等，研究成果将揭示我国一种新的犬副黏病毒，填补国内空白，为该病的预防和控制奠定坚实的基础，具有重大的应用前景。二、项目研究的内容与方法（一）研究基本内容：1、一种新的犬类副黏病毒繁殖的关键技术突破：通过鸡胚不同部位培养、不同细胞系培养和根据病毒繁殖的生化特性利用各种理化因素对病毒处理培养，形成一套成熟的流感病毒繁殖技术。2、一种新的犬类副黏病毒特性研究：电镜形态学观察、红细胞凝集谱、核甘酸测序、毒力测定、动物感染等。3、一种新的犬类副黏病毒流行情况的调查：利用血清学技术进行检测（HA试验和HI试验），初步分析目前犬中该病毒的分布和流行情况。（二）实施方案：1、病毒的培养：利用SPF鸡胚不同部位培养进行传代。2、样品的采集：广州为主，不同品种的犬。3、红细胞凝集谱：收集的组织液与1%鸡红细胞做血凝试验，并与不同动物，包括犬、牛、猫、兔子的红细胞做血凝试验。4、病毒毒力测试：对本动物进行发病试验，增加在小白鼠，兔等实验动物身上进行发病试验。5、电镜形态学观察：取第2代培养的组织液0.1ML，直接应用电镜技术（electromicroscopy, EM），经磷钨酸负染后电镜观察。 6、基因测序：运用现代的基因检测技术对该病毒进行检测，得出其基因序列并和犬副流感病毒2型(Canine parainfluenza virus 2),犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的基因序列比较，得出病毒变化的规律。三、项目研究过程与资料查阅情况（一）项目研究过程1、利用SPF鸡胚不同部位培养进行传代；2、在广州的几个动物医院采不同品种犬血，分离血清 ，利用血清学技术进行检测（HA试验和HI试验），初步分析目前犬中该病毒的分布和流行情况。3、通过红细胞凝集谱、病毒毒力测试、电镜形态学观察、基因测序等测定其生物学特性。（二）资料查阅情况1、使用中国期刊网、数字图书馆、百度等网络资源搜索与研究项目相关的文章、论文88篇；2、从学校图书馆借阅了动物病毒学、细胞培养技术、实用实验操作技术等本；3、从学院资料室查阅相关论文5篇。四、预期成果 1、经过一年时间的试验过程，通过鸡胚不同部位培养，探索出了一套成熟的病毒繁殖技术。2、获得该病毒的各项生物学特性，阐明其种间、种内变异规律，为该病的防制奠定基础。3、在全国性的学术会议及国家级学术期刊上发表论文12篇。4、培养优秀本科毕业论文12人次。五、经费预算1、实验材料费：包括实验动物、血清、营养液、SPF鸡胚、DNA序列测定等：7000元2、离心管、注射器等实验消耗性材料及交通费等：5000元总经费预算：1.2万元其中：申请学校经费3000元；不足的由指导老师主持的省攻关课题“犬猫流感病毒的流行病学调查”（2004-2005）资助经费中补助六、申请人对该项目研究工作完成后的认识总结项目开展过程中我们遇到了很多困难，在指导老师和师兄师姐的鼓励和帮助下，我们克服了重重困难，还是完成了当初预定项目计划的大部分，取得了一定的成果，测得其生物学特性；还在采集到的分血清中，没有发现该病毒的抗体，充分说明了这是一种新的类副黏病毒，现拟在全国核心专业期刊上发表论文1篇；培养了较高水平的本科毕业论文1-2篇。在过去的一年里，我们自己亲手接种鸡胚、收集病毒、采血分离血清、攻毒等操作，我们学到了很多，特别是实际操作能力得到很大提高。在鸡胚的各种接种方法中，一定要掌握方法和实际的多操作才能熟练完成。同时，整个的试验过程也使我们深刻地体会到科研项目的研究远远比我们当初想象的艰辛，令我们感受到了科学研究道路的坎坷、曲折。现在我们的项目研究初有成果，学校创新课题已经告一段落，我们要衷心感谢给予我们这次项目实验大力支持的指导老师、研究生师兄师姐和实验室的工作技术人员。七、指导教师对学生申报、项目开展及经费预算的具体意见 国内对犬副粘病毒的研究极其缺乏，该项目组从广东各地采集了大量样本进行病毒分离。在前期创新工作中分离到1株病毒株，初步鉴定为犬类副粘病毒，可能是新城疫病毒的变种。对该病毒的生物学特性进行了深入的研究，病毒在胚培养特性、组织培养传代、电镜形态学观察、红细胞凝集谱、毒力测定、动物感染等方面，研究成果将揭示我国一种新的犬类副黏病毒，填补国内空白，为该病的预防和控制奠定坚实的基础