小鼠的苯急性吸入毒性试验的分析

.小鼠的苯急性吸入毒性试验的分析摘要：目的掌握毒理学动物实验的动物分组方法；了解急性毒性试验剂量组距的确定方法及各染毒剂量的计算；掌握寇式法计算急性毒性参数LD50的方法；学会对化学物进行急性毒性评价及分级。方法随机选取昆明种的，健康的，初成年的，性成熟的，体重介于18至25g的小鼠雌雄各半共70只，按照随机区组法将小鼠分成6个实验组，1个对照组，每组雌雄各半共十只，然后按照公式确定每个组的染毒剂量，对照组不染毒，观察120min，记录不同染毒剂量下各时段小鼠的中毒反应，最后统一分析。结果 苯具有急性毒性，中毒表现：兴奋症状、抑制症状（闭眼、侧卧），呼吸急促转衰弱，除低剂量组外每组都应该有小鼠死亡运用。改良寇氏法公式得LC50=1.848，故LC50=70.47103mg/l；s=0.0193(LD50的标准误)；LD50 95%CI（可信区间）=（70.45103，70.50103）mg/L。结论：LC50为70.47103mg/l，属于低毒毒物关键词：苯；急性毒性；LD50；随机分组；改良寇式法前言：苯在常温下为一种高度易燃，有香味的无色的液体，为一种有机化合物，也是组成结构最简单的芳香烃。苯有高的毒性，也是一种致癌物质。它难溶于水，易溶于有机溶剂，本身也可作为有机溶剂。苯也是石油化工的基本原料，苯的产量和生产的技术水平是一个国家石油化工发展水平的标志之一苯具有的环系叫苯环，是最简单的芳环。苯对人体有许多危害，比如：1造血的损害作用；2致癌、致畸作用；3.苯致DNA、RNA损伤的基因毒性；4.职业暴露人群遗传损伤效应。苯对人体中毒可分为急性和慢性中毒。本研究旨在了解其急性毒性试验剂量的相关计算以及操作。（一）材料与方法：1.昆明种小鼠：雌雄各半，70只；2.动物天平：2只；3.染号液：饱和结晶紫（紫色）、饱和苦味酸（黄色）乙醇溶液；4.静式染毒罐：60L 7个；5.随机数字表试验方法：1.试验动物选择与处理：选择健康、初成年，性成熟的昆明种小白鼠70只（沈阳医学院实验中心提供），1725g，雌雄各半，分别按性别称重，编号。预实验得出LD0与LD100，LD50的计算方法符合改进寇氏公式的条件，随机分组，分6个剂量组和一个NS组，每组10只。编号方法：采用不同颜色标记法，即黄色代表个位，蓝色代表十位，以此类推，只是让出11、22、33号.，避免混淆。分组方法：随机区组法，将两性别分别按体重从小到大排序，按每组动物数划分为n个区组（如每组10只动物，就划分为10个区组），每区组动物数与组数相等；然后每只动物选取一个随机数字，用组数n去除随机数字得余数，按余数将动物分到各组：0A组；1B组；2C组；3D组；4E组；5F组；6G组 以此类推。按上述原则线条不重复数字分组，遇重复数字分到其余各组。2.确定染毒剂量：按照于是结果求出对数组距i=（logLD100-logLD0）/（组数-1）求出各组染毒剂量及加样量。a=CL/d*1000*x其中a为加苯量（ml）；C为染毒剂量（mg/L）；L染毒罐容积（L）；X为苯的纯度；d为苯的质量体积比。组别对数剂量染毒剂量（ml）加苯量（ml）A1.5333.942.28B1.63643.252.90C1.74255.213.71D1.84870.474.73E1.95489.956.04F2.060114.827.71G3.染毒观察：按各组设计剂量加入苯，塞紧胶塞。开动风扇，观察2小时。4.受试物：国药集团化学试剂有限公司生产的分析纯液态苯，比重为0.89g/ml，纯度99.5%,5.观察指标：观察小鼠最早死亡时间和数量及染毒期间小鼠的中毒症状，用改良寇氏法计算出LD50，进行毒性分级。实验结果：染毒后小鼠出现不同程度中毒症状大致表现为：兴奋症状：痉挛，乱跑、乱窜、反射亢进、管状尾；抑制症状：软弱无力、运动迟缓、闭眼、侧卧；呼吸由缓慢变为深浅；高剂量组出现症状较早且明显，随后出现抽搐，更严重者死亡，剂量越低出现的死亡数越少，低剂量组一般不出现死亡。兴奋症状抑制症状呼吸症状死亡时间乱跑、乱蹿搔抓、尖叫反射亢进软弱无力运动迟缓步态蹒跚缓而深频而浅张口呼吸最早死亡时间只数等管状尾痉挛闭眼、蜷缩侧卧、反射消失（二）各组动物死亡情况（实验记录）表1 静式吸入染毒2h小鼠死亡情况组别剂量（mg/l）动物数死亡数死亡率(p)存活率（q）pqA33.9410001.00B43.2510001.00C55.2110001.00D70.471060.60.40.24E89.951090.90.10.09FG114.821010100（三）LC50的计算：因改良寇氏法实验设计要求，因A和B组动物死亡数相同，故A组不参加计算。按改良寇氏法公式计算：m=Xki(p0.5) sm=ipq/n m：LD50（i：对数组距；Xk：最高剂量的对数值；q：存活率=1-p；n=每组动物数）代入数据计算得，LD50=70.47103mg/l，可信限为（70.45103，70.50103）mg/l。根据我国农药急性毒性分级标准（吸入2h），苯为低毒物质。（四）、结果评价与建议：研究苯的急性毒性有利于了解其急性毒性作用与机制，但是温度会影响其挥发性，影响毒作用，通过对苯的研究，了解了苯的急性毒性的危害，提高对苯急性毒性的认识，了解到苯属于低毒物质，但是在以后的学习和生活还是应积极建立预防和控制苯中毒，减少苯带来的危害，提高生活质量。在今后的学习生活中，提高对苯急性和慢性中毒的防范意识，提高自我保护能力。（五）、讨论苯在常温下为一种高度易燃，有香味的无色的液体。同时，苯有高的毒性，也是一种致癌物质。由于苯的挥发性大，暴露于空气中很容易扩散。人和动物吸入或皮肤接触大量苯进入体内，会引起急性和慢性苯中毒。有研究报告表明，引起苯中毒的部分原因是由于在体内苯生成了苯酚。 苯对中枢神经系统产生麻痹作用，引起急性中毒。重者会出现头痛、恶心、呕吐、神志模糊、知觉丧失、昏迷、抽搐等，严重者会因为中枢系统麻痹而死亡。少量苯也能使人产生睡意、头昏、心率加快、头痛、颤抖、意识混乱、神志不清等现象。摄入含苯过多的食物会导致呕吐、胃痛、头昏、失眠、抽搐、心率加快等症状，甚至死亡。吸入20000ppm的苯蒸气5-10分钟便会有致命危险。 长期接触苯会对血液造成极大伤害，引起慢性中毒。引起神经衰弱综合征。苯可以损害骨髓，使红血球、白细胞、血小板数量减少，并使染色体畸变，从而导致白血病，甚至出现再生障碍性贫血。苯可以导致大量出血，从而抑制免疫系统的功用，使疾病有机可乘。有研究报告指出，苯在体内的潜伏期可长达12-15年。 妇女吸入过量苯后，会导致月经不调达数月，卵巢会缩小。对胎儿发育和对男性生殖力的影响尚未明了。孕期动物吸入苯后，会导致幼体的重量不足、骨骼延迟发育、骨髓损害。 对皮肤、粘膜有刺激作用。国际癌症研究中心(IARC)已经确认为致癌物。参考文献1 邢江;纪德华;姚丽英;罗艳春;姚丁等.含苯等有机溶剂的装饰胶急性中毒后继发脑损害.中华神经科杂志. CAS CSCD 2013年第46卷第2期 111-111页.共一页.2 林莉 ;宁琼 ;李建英等. 急性苯的硝基化合物中毒的报告. 中国医疗前沿.2011年第6卷第19期 77-77页,共2页.3 周善范;刘林根. 苯化学物污染环境引起的急性中毒事件调查. 浙江预