对氨基苯甲酸酯类和酰苯胺类局麻药物的分析

,对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析,局部麻醉药（localanaesthetics),简称为局麻药局麻药是指在用药局部能暂时地，完全和可逆性地阻断神经的冲动和传导，在意识清醒的条件下，使局部的痛觉和感觉消失的药物。,局麻药的作用机制是：稳定细胞膜，降低细胞膜对Na+的通透性，阻断Na+通道，阻滞Na+内流，阻止神经细胞动作电位的产生而抑制冲动、传导。,局麻药是怎样阻断Na+通道，阻滞Na+内流的？胺基在细胞膜内侧与Na+通道闸门的磷脂结合形成横桥关闭Na+通道。,局麻药在体内以两种形式存在，而两种形式存在受PH的影响。,为防止局麻药的吸收及延长局麻药的作用时间，常在局麻药液中加入少量肾上腺素。,五种局部麻醉方法1.表面麻醉（surfaceanaesthesia）2.浸润麻醉（infiltrationanaesthesia）3.传导麻醉（conductionanansethesia)4.蛛网膜下腔麻醉（subarachnoidalanaesthesia）,又称脊髓麻醉或腰麻（spinalanaesthesia)5.硬膜外麻醉（epiduralanaesthesia）,临床常用药物,利多卡因：作用比普鲁卡因快、强而持久，安全范围较大，能穿透粘膜，可用于各种局麻方法。临床主要用于传导麻醉和硬膜外麻醉。还可用于抗心律失常。普鲁卡因：最常用，亲脂性低，不易穿透粘膜，只作注射用药。一般不用于表面麻醉。应避免与磺胺类药物同时应用。丁卡因：局麻作用强，有收缩血管作用。毒性增加，一般不用于浸润麻醉。布比卡因：作用比利多卡因强，持续时间长，用于浸润麻醉、传导麻醉、硬脊膜外腔麻醉。,芳胺类药物的分析,芳胺类药物分为两类,芳伯氨基未被取代,芳伯氨基被酰化,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质,（一）基本结构与典型药物,苯佐卡因,盐酸普鲁卡因,盐酸丁卡因,盐酸普鲁卡因胺,1.芳伯氨基特性：重氮化偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。,（二）主要理化性质,水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸丁卡因外水产物为对丁基苯甲酸外，上述均为对氨基苯甲酸。,弱碱性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的侧链，故具有弱碱性。,4.其它特性：因结构中有芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。,二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物,盐酸布比卡因,盐酸利多卡因,对乙酰氨基酚（扑热息痛）,醋氨苯砜,1.水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸水解后显芳伯氨基的特性反应。注意空间位阻的影响。2.水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋酸乙酯香味。,（二）主要化学性质,3.酚羟基特性：对乙酰基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸水解有酚羟基，可与FeCl3发生显色反应，可相互区别。4.弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可相互区别。非水滴定法5.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。,生物碱沉淀剂,（1）碘化汞钾试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成白色或淡黄色沉淀。（2）碘化铋钾试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成桔红色沉淀。（3）碘化钾碘试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成棕红色沉淀。（4）硅钨酸试剂：在酸性溶液中与生物碱反应生成灰白色沉淀。（5）磷钼酸试剂：很灵敏，在中性或酸性溶液中与生物碱反应生成鲜黄色或棕黄色沉淀。,三、鉴别试验,（一）重氮化-偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。,Ar-NH2,HCl,NaNO2,重氮盐,OH-,-萘酚,橙黄猩红色,直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺、盐酸氯普鲁卡因,间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜,利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。,丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N亚硝基化合物的乳白色沉淀。,示例8-1苯佐卡因和盐酸普鲁卡因的芳香第一胺类鉴别试验：取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/l亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,（二）与三氯化铁反应,对乙酰氨基酚+FeCl3,蓝紫色化合物,1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。,（三）与金属离子反应,盐酸利多卡因的鉴别方法:取本品0.2g，加水20ml溶解后，取溶液2ml，加硫酸铜试液0.2ml与碳酸钠试液1ml，即显蓝紫色；加三氯甲烷2ml，振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。,2.羟肟酸铁盐反应基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。,3.与汞离子反应,盐酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2,黄色,对氨基苯甲酸酯H2NO3+Hg(NO3)2,红色或橙黄色,1.盐酸普鲁卡因的鉴别,(四)水解产物反应,盐酸普鲁卡因的鉴别方法取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10%氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀(普鲁卡因)；加热，变为油状物(普鲁卡因)；继续加热，发生的蒸气(部分普鲁卡因水解，生成溶于水的对氨基苯甲酸钠，以及挥发性的二乙氨基乙醇)能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失(全部水解，生成可溶于水的对氨基苯甲酸钠)后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀(对氨基苯甲酸)。此沉淀能溶于过量的盐酸。,2.苯佐卡因的鉴别,苯佐卡因+NaOH,乙醇,乙醇+I2+NaOH,CHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）,(五)制备衍生物测熔点,1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因,5、制备衍生物测定熔点,盐酸丁卡因,（ChP2010、USP34-NF29、BP2010、JP15）,取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80干燥后，熔点约为131。,2.硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因,6、紫外吸收光谱特征,取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含0.40mg的溶液，照紫外-可见分光光度法测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸光度分别为0.530.58与0.430.48。,【示例8-2】盐酸布比卡因（ChP2010）,(六)紫外特征吸收光谱法,Chp2010在规定的浓度测定max例如：盐酸布比卡因0.4mg/ml;max=263nm;271nmA=0.530.58；0.430.48再例如：盐酸普鲁卡因胺5g/ml;max=280nm,7、红外吸收光谱,图8-1盐酸普鲁卡因的红外吸收图谱(氯化钾压片),四、特殊杂质检查,1、盐酸普鲁卡因(对氨基苯甲酸),杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇,结果导致注射液变黄、疗效下降、毒性增加,原料药及注射用灭菌粉末中杂质限量：0.5%注射液中杂质限量：1.2%,检查方法：,HPLC杂质对照品法,固定相：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(6832)检测波长：279,系统适用性试验：,理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0,外标法以峰面积计算,(二)盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和光解产物的检查,4-氨基-2-氯苯甲酸原料药不得过0.625%注射剂不得过3.0%,（一）亚硝酸钠滴定法Ar-NH2;Ar-NHCOR;Ar-NO2均可采用此法ChP2010中的苯佐卡因；盐酸普鲁卡因、注射用盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片注射液可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。,五、含量测定,1.原理：,Ar-NHCOR+H2O,Ar-NH2+RCOOH,H+,Ar-NH2+NaNO2+2HCl,Ar-N2+Cl-+NaCl+2H2O,加入无机酸HX的作用,使芳胺溶解和NaNO2生成HNO2与芳胺作用生成重氮盐酸过量取决于芳胺的碱性，碱性越弱，过量越多。,NaNO2,1mol氨基重氮化需要1mol的NaNO2（微过量），否则引起自偶合。加入速度过慢，引起自偶合。加入速度过快，HNO2分解。,测定主要条件：,(1)加KBr增加反应速度,重氮化的反应历程为：,NaNO2+HCl,HNO2+NaCl,HNO2+HCl,NOCl+H2O,KHCl,KBr+HCl,HBr+KCl,HNO2+HCl,NOBr+H2O,KKBr,KHBr比KHCl大300倍,生成NOBr量大得多加快反应速度,(2)加过量HCl加速反应：重氮化速度加快；重氮盐在酸性介质中稳定（酸不足时，重氮盐会分解，温度越高分解越快）；防止生成氨基偶氮化合物（一种不可逆的自偶合反应，使重氮盐的质量变差，影响反应进行，降低偶合收率）。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl一般摩尔比为Ar-NH2:HCl=1:2.56。,(3)室温条件下滴定:温度高反应速度快；每升高10加快2.5倍,太高,可使Ar-N2+Cl-+H2O,Ar-OH+N2+HCl,(4)滴定管尖端插入液面下滴定,示例8-5盐酸普鲁卡因的含量测定：取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法，在1525，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl。,永停滴定法：铂铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流通过，电流计指针指零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中遂有电流通过，此时电流计指针突然偏转，并不再回复，即为终点。外指示剂法：*常用碘化钾淀粉糊剂或指示液(教材上没有)，滴定到达终点时，稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘遇淀粉即显蓝色,3.指示终点的方法(1)用停滴定法溶液检流计终点前：无过量无电流HNO2终点时：有过量有电流（使指针偏离零HNO2永停在某一位置）(2)外指示剂法用KI-淀粉指示剂指示终点的原理：2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,(二）非水溶液滴定法,基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链叔胺氮在滴定盐酸丁卡因时，因其在冰醋酸中碱性弱，加醋酐可增加其碱性。因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强，可增加碱性。,2(CH3CO)2O,(CH3CO)3O+CH3COO-,相当于,BHCl+Hg(Ac)2,BHAc+HgCl2,BHAc+HClO4,BHClO4+HAc,示例8-6盐酸布比卡因的含量测定：取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml与醋酐20ml溶解后，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于32.49mg的C18H28N2OHCl。,（三）紫外分光光度法,Chp2010采用紫外分光光度法测定注射用盐酸丁卡因的含量。含盐酸丁卡因为标示量的93.0%-107.0%,中性条件下的重氮化反应,（四）比色法,盐酸普鲁卡因+1,2-蒽醌-4-磺酸钠,pH4-9,棕红色化合物，max482nm处测定A,（五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定,ex400nm（激发波长）、em485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。,盐酸普鲁卡因胺+荧胺,pH7.5,荧光物,此法主要用于盐酸盐酸普鲁卡因注射液的测定。色谱条件：色谱柱为C18流动相为含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾（PH=3.0）-甲醇(68:32);UV检测器290nm.,（六）HPLC法,盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸(PABA)的检查：取本品，加乙醇制成2.5mg/mL溶液，作为供试液，另取PABA对照品，加乙醇制成60ug/mL的溶液，作为对照品液，取供试品液10ul，对照品液5ul，分别点于同一薄层板上，展开，显色，供试品所显杂质斑点颜色，不得比对照液所显斑点深。求PABA的限量是多少？,1亚硝酸钠滴定法