产品管理--NEB产品知识和市场培训（PPT 51页）(1).ppt

NEB产品知识和市场培训,2001年8月市场与技术支持部,第一部分NEB厂家背景回顾,美国总部：Beverly,MA,19752001,二十五年的生产历史,国际化的生产和营销网络在全世界35个国家和地区有分销商美国、英国、德国、加拿大四个生产基地,专业水准的厂商发酵中心生产部酶制备和DNA重组技术中心研发部分子生物学和寄生虫学研究中心基础研究院,第二部分NEB产品讲解,DNA限制性内切酶DNA聚合酶、逆转录酶Vent系列的PCR聚合酶DNA/RNA修饰酶,单位的定义在50l反应体系中，1小时内，完全消化1g的DNA所需要的酶量为1Unit包装与规格常用酶大多数为10U/l缓冲液4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液稀释液分为A、B、C三种，依表询储藏条件在不被稀释的情况下，可长期存放在零下20度长达20之久,严格的质量检验：非特异性的内切酶活性检测核酸酶污染检测外切酶污染检测蓝白斑筛选检测,针对于常用在克隆实验中的酶检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏,NEB自主克隆的酶基因从重组菌株中提纯的酶随酶另附一管BSA酶识别位点被dam或dcm甲基化后不能被切动酶是否耐热经过蓝白斑法检测,目录书中出现的标志符号的含义,最佳的工具酶反应温度,酶所对应的缓冲液编号,Homing核酸内切酶识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶同裂酶的概念识别同一酶切位点的一组内切酶BSA的作用酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性,小常识：,NEB限制性内切酶的卖点：,种类非常齐全，（丰富的稀有酶）稳定性好，存放时间长价格在进口酶类里适中质量可靠,DNA或RNA的探针标记3末端和5末端的补平3末端的碱基置换DNA测序反应、定点突变和转录3末端突出的切平,特性：以单链DNA或RNA为模板，从5端向3端合成新链,应用,性能指标：5端向3端的外切活性3端向5端的外切活性聚合速度错配率耐热性延伸能力,常用的种类：E.coliDNAPolymeraseIKlenowFragment（35exo-）T4DNAPolymeraseTerminalTransferaseM-MuLVReverseTranscriptase*M-MuLVReverseTranscriptase（RNaseH-）T7/Sp6RNAPolymerase,VentDNAPolymerase,主要应用：常规PCR扩增双脱氧法测序,VentDNAPolymerase,与常规Taq酶的错配率比较,卖点：高保真耐热性非常好,DNA/RNAModifyingEnzyme,连接酶Ligase激酶Kinase碱性磷酸酶PhosphataseBeta琼脂糖酶Agarase甲基化酶Methylase核酸酶Nuclease外切酶Exonulease内切酶EndonuleaserecA重组蛋白酶recAProtein,重点产品：T4DNALigase单位定义：20000NEBUnit=300WeissUnit4000NEBUnit=60WeissUnitT4PolynucleotideKinase（T4PNK）对DNA5末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆AlkalinePhosphatase,CalfIntesinal（CIP）去除DNA5和3的磷酸基团，用于制备5的置换标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。,常用类型：整数分子量的Marker,1kbDNALadder,2-logDNALadder,100bpDNALadder,NEW,噬菌体DNA和质粒DNA酶消化型的DNA分子量标准非整数型的,PGF分子量标准DNA被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装用于几十kb至上千kb的DNA分离时的Marker脉冲电泳分离,分子量种类：LowRangeMidRangeLambdaLadderYeastChromosome,RNA分子量标准,适用于普通凝胶或变性胶条带为整数的分子量,蛋白分子量标准普通型2-212kDa（精确）预染型6-175kDa（估计）HRP蛋白Marker检测包6.5-165kDa（Biotin标记，BiotinAb）,蛋白酶内切糖苷酶外切糖苷酶蛋白激酶和抑制剂蛋白磷酸化酶和抑制剂,FactorXaProtease,NEBlotKit,随机引物法探针标记试剂盒,下游应用：文库筛选Southern/Northern原位杂交,卖点：标记的dNTP参入率高模板用量在25ng到2ug半小时即可完成标记反应可用于多种类型的标记dNTP（同位素或非同位素标记）,NEBlotPhototopeKit,随机引物法生物素探针标记试剂盒,用于化学发光检测与Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit配合使用生物素标记的探针稳定，可长时间存放杂交后可洗脱下来，进行反复杂交,Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit,卖点：灵敏度同位素检测法相当曝光时间短，只需10-70分钟信号稳定，可通过改变曝光时间来摸索最佳的信号强度,第三部分NEB蛋白表达产品介绍,pMAL蛋白融合表达与纯化系统,卖点：生产级别的应用高水平表达量1升培养上清可达到100mg的蛋白产量与MBP融合表达可以增加蛋白的溶解性,IMPACT蛋白表达与纯化系统,卖点：应用了蛋白内含肽自我剪切技术无需蛋白酶去除标签，只需一次过柱纯化过程Intein可接在蛋白的C端或N端,IMPACT-CNSystem,IMPACT-TWINSystem,卖点：应用了蛋白内含肽自我剪切技术，将两个Intein接在目的蛋白的两端。无需蛋白酶去除标签，只需一次过柱纯化过程Intein行使剪切功能后，可在目的蛋白两端产生带S的氨基和羧基，可环化，可标记,第三部分NEB英文目录附录的内容介绍,NEBcutterV1.0,内容一分子生物学数据库索引,REBASE限制性内切酶数据库3100种限制性酶的相关信息酶的基因序列、甲基化敏感位点、结构5600篇参考文献InBase内含肽数据库分子生物学数据库网址总汇224个网址可按功能领域分类查找,内容二工具酶常用查询表,以酶识别序列分类的索引同裂酶索引限制性内切酶的发展历史和知识背景NEBuffer的酶活性对照表双酶切缓冲液选择表酶稀释液对照查询表限制性酶在引物延伸反应中的活性表,限制性核酸内切酶的热失活对照表酶切反应酶用量查询表补平反应新酶识别位点查询表相同粘端酶查询表限制性酶识别位点中甲基化位点查询表,内容三分子生物学常用工具表,常用E.coli菌株表型及基因型查询表常用遗传标记NEB菌株描述遗传密码表氨基酸化学结构常用单位换算常用载体上的酶识别位点出现频率常用载体的酶切图谱,内容四分子生物学实验Protocol,琼脂