护理班常用免疫学检查.ppt

11/27/2019,临床常用免疫学检查,11/27/2019,临床常用免疫学检查包括,一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测,11/27/2019,教学目的与要求：,了解掌握临床免疫学检查的主要内容、检测原理以及临床实际应用的重要意义,11/27/2019,重点与难点,各种抗体的特点补体定义及CH50测定肿瘤标志物及其特异性，AFP与CEA的特点，各种类型的特异性自身抗体与自身免疫的关系及各类型自身抗体检测的方法及临床意义乙肝五项测定以及临床意义,11/27/2019,临床常用免疫学检查包括,一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测,11/27/2019,免疫球蛋白（Ig）,定义：是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白，存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。检测：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。,11/27/2019,血清免疫球蛋白分类,根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,11/27/2019,血清免疫球蛋白分类,11/27/2019,检测方法,酶联免疫法（ELISA)放射免疫（RIA)荧光标记免疫(IFA)化学发光法（CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊,11/27/2019,血清免疫球蛋白G检测,IgG人体内含量最多，占Ig的70-80再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性唯一可通过胎盘的Ig,11/27/2019,参考值,7.016.6g/L,11/27/2019,临床意义-IgG增高,多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病单克隆性增高仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤,11/27/2019,临床意义-IgG降低,见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和免疫抑制剂患者,11/27/2019,免疫球蛋白A检测,两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。,血清型IgA以单体形式存在,分泌型IgA（SIgA）由J链连接的二聚体和分泌片组成。,11/27/2019,参考值,血清IgA0.73.5g/L，IgA占10-15。SIgA唾液0.3g/L，泪液3080g/L，初乳5.06g/L，粪便1.3g/L,11/27/2019,临床意义,IgA增高见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹和肾脏疾病等IgA降低见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，重链病，轻链病，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病,11/27/2019,免疫球蛋白M检测,IgM是五聚体，分子量最大的Ig不能通过血管壁，不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体,11/27/2019,11/27/2019,参考值,参考值0.52.6g/L,11/27/2019,临床意义,IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时，IgM呈单克隆性明显增高IgM降低见于IgG型重链病，IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症。,11/27/2019,免疫球蛋白E的检测,IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体，介导型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。,11/27/2019,参考值,ELISA法为0.10.9mg/L,11/27/2019,临床意义,IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。,11/27/2019,血清M蛋白,M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。,11/27/2019,【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。,图14号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱,11/27/2019,【临床意义】检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。,11/27/2019,多发性骨髓瘤（multiplemyeloma）是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（plasnocytoma），因其引起骨破坏而得名。患者常伴有贫血、肾功损害和免疫功能障碍。男性多发，男女比约为2:1，平均发病年龄是46.5岁。,11/27/2019,多发性骨髓瘤患者骨破坏所致头颅肿物及眼球突出,11/27/2019,巨球蛋白血症(macroglobulinemia)：该病血液中存在大量单克隆IgM。重链病：出现Ig重链轻链病：出现单克隆游离轻链。半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。良性M蛋白血症：,11/27/2019,临床常用免疫学检查包括,一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测,11/27/2019,补体（Complement）,补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组成参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应,11/27/2019,补体的三条激活途径,11/27/2019,总补体溶血活性检测(CH50),原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。主要反应补体经典途径的综合水平。,11/27/2019,+,+,C,一、溶细胞作用：,靶细胞,抗体,抗原抗体复合物,C1-C9,靶细胞溶解,11/27/2019,C4,细胞膜,识别阶段,11/27/2019,C3转化酶的形成,C4b,Mg+,C4a,C2,活化阶段,11/27/2019,C5转化酶的形成,C4b,Mg+,C4a,C2a,C3,C4b2b3b是C5转化酶;它导致膜攻击复合体(MAC)的形成,活化阶段,11/27/2019,C5,11/27/2019,C6,膜攻击阶段,11/27/2019,MAC形成并插入到细胞内,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,11/27/2019,CH50,在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感，因而该试验被称为补体50%溶血试验（complementhemolysis50%），即CH50试验。,11/27/2019,CH50测定的临床意义,增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性肿瘤。减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等,11/27/2019,补体C3检测,是一种由肝脏合成的2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。【参考值】成人血清C3：O815gL。,11/27/2019,【临床意义】(1)增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。(2)减低：见于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。,11/27/2019,临床常用免疫学检查包括,一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测,11/27/2019,肿瘤标志物,肿瘤标志物（tumormarker、TM）：在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中。,11/27/2019,2008年我国卫生事业发展统计公报卫生部统计信息中心,11/27/2019,肿瘤的发展与诊断,10-100g,榛子大小,针头大小,免疫学方法,早期,亚临床阶段,晚期,1mg,1g,1kg,1g,高灵敏度的肿瘤标志物的测定对肿瘤的早期诊断和治疗方案设计是十分重要的手段,世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%95%的肿瘤是可以治愈的。,临床可检测的肿瘤,肿瘤标记物(无形的肿瘤),11/27/2019,一般肿瘤细胞在癌前病变时，会产生表达肿瘤异常蛋白质，多数肿瘤从癌前病变发展到0.5cm以上的占位性病变需要5y10y的时间。如果能够在这段时间内运用肿瘤标志物检测技术，早期检测到患者血液中肿瘤所表达的异常蛋白质，就可以早期发现、早期诊断，并获得早期治疗的良好效果。,11/27/2019,恶性肿瘤增长的检测,Tumormass,1g,10,1mg,106,1g,109,10-100g,1010-11,1kg,1012,肿瘤标记物(无形的肿瘤),临床可检测的肿瘤,肿瘤增长,Tumorcells,Leadtime,世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%95%的肿瘤是可以治愈的。,11/27/2019,肿瘤标志物免疫分析,现实的肿瘤标志物灵敏度有限；特异性有限；存在正常异常交错；存在不稳定性与临床表现存在差异,理想的肿瘤标志物肿瘤患者血液中含量明显增高；与肿瘤组织的定位有关；肿瘤标志物的含量与肿瘤的大小分期有关；肿瘤标志物的含量与肿瘤的生长、消退或转移、复发有关；假阴性率与假阳性率低。,11/27/2019,TM分类,蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。糖脂类，如CA19-9和CA-50等酶类，如PAP、NSE和AFU等。激素，如HCG、雌激素受体等其它肿瘤标志物，如核酸、多胺等。,11/27/2019,肿瘤标志物检测方法,11/27/2019,化学发光免疫分析系统,11/27/2019,临床常用肿瘤标志物,11/27/2019,1.蛋白质类肿瘤标志物检测,11/27/2019,甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP）,在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成，出生后一年内降至正常水平。细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。,11/27/2019,参考值,血清300g/L。病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高，但常300g/L。生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。妊娠时AFP可升高，峰值低于400g/L，若异常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。,11/27/2019,癌胚抗原（carcinoembryonicantigen、CEA）,早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力胎儿出生后血清CEA的含量极低,11/27/2019,参考值,血清100kU/L时，肯定有转移，敏感性高于CEA、TPA。,11/27/2019,80的胰腺癌、71的肺癌、68的乳腺癌、64的卵巢癌、63的直肠癌、28的肝癌中也可见到CA15-3的升高5.5的正常人、一些良性肝病和良性乳腺病（16）也可见有CA15-3的升高,11/27/2019,其它重要的肿瘤标志物,名称生化特性相关肿瘤CA15-3糖蛋白乳腺癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、结肠癌CA125糖蛋白卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肺癌CA72-4糖蛋白胃癌、结肠癌、胰腺癌、非小细胞性肺癌SCC糖蛋白子宫颈癌、肺鳞癌、头颈部鳞癌TPA蛋白质膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌,11/27/2019,肿瘤标志物的合理选用,同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤。选择特异标志物或最佳组合有利于提高肿瘤诊断的阳性率。动态检测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别，也有利于复发、转移和预后判断。胃癌：CEA+CA199乳腺癌：CA153+CEA+CA199卵巢癌：CA125+CA724+TPS+AFP,11/27/2019,临床常用免疫学检查包括,一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、肿瘤标志物检测四、自身抗体检测五、感染免疫检测,11/27/2019,自身免疫病检测,正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞,并导致组织损伤而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断.,11/27/2019,类风湿因子(rehumatoidfactor,RF),RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，是一种以变性IgG的作为靶抗原的自身抗体。RF主要为IgM型抗体,但也有IgG,IgAIgD、IgE型抗体。存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。,11/27/2019,检测方法与参考值,乳胶致敏凝集实验：1:10为阴性。酶连免疫吸附实验（ELISA）：阴性。速率散射比浊法：女性，我国携带者约6%，这种人虽然没有临床症状,体检肝功能正常或有轻微损害，有时ALT升高，血中抗-HBS（-），具有一定的传染性,不应作为供血者。可持续数周、数年这种人将来可能发生慢性活动性肝炎、迁延性肝炎、肝硬化和肝癌值得注意。,11/27/2019,抗-HBs阳性表示：既往曾感染过HBV，现已恢复；接种乙肝疫苗后；被动性获得抗-HBs抗体HBeAg：HBeAg阳性表明:患有乙型肝炎，是病毒复制活跃，传染性强的指标，且HBeAg持续阳性的乙型肝炎，易转变为慢性肝炎,肝硬化。HBeAg(+),HBsAg(+)的孕妇所生的新生儿，母婴垂直传播的机会很高，达90%值得重视。抗-HBe阳性意味着HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低.但慢性肝炎,肝硬化阳性率高e抗体和e抗原一般不同时存在，e抗原消失，e抗体产生。e抗体（+）说明患者曾出现过HBeAg，但对e抗体（+）者不可视为HBV复制平息。,11/27/2019,抗-HBcIgM：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人血液有强传染性。抗-HBcIgM阳性也可见于慢性活动性肝炎。抗-HBcIgG：高滴度表明机体正感染HBV；而低滴度抗-HBcIgG则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。(非保护性抗体),11/27/2019,HBVDNA：是HBV感染最直接，最灵敏和最特异的检测指标，且血清中HBVDNA的水平可作为治疗方案与疗效观察的指标。,HBVDNA定量检测,11/27/2019,循环数.扩增子数(靶序列拷贝数)122438416532664201,048,576301,073,741,824(10亿),目的基因扩增,11/27/2019,乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价,(1)(2)(3)(4)(5)急性或慢性乙型肝炎，高传染性急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性急性HBV感染康复期或有既往感染史，有免疫力乙肝恢复期，弱传染性急性HBV感染“窗口期”，或既往曾感染过乙肝接种HBV疫苗或HBV感染后康复急性乙肝康复期，开始产生免疫力无HBV感染,11/27/2019,HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc+-,11/27/2019,丙型肝炎病毒标志物,丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）由核心和包膜组成。核心含有单链正股RNA，包膜由结构蛋白和非结构蛋白区域组成。血液为其主要传播途径。病情虽较乙型肝炎轻，但更易转为慢性。,11/27/2019,检测方法与参考值,标志物检测方法参考值抗-HCVELISA阴性抗-HCVIgMELISA阴性抗-HCVIgGELISA阴性HCV-RNART-PCR阴性,11/27/2019,临床意义（1）,名称临床意义抗-HCV：一种非保护性抗体，阳性是诊断HCV感染的重要依据。抗-HCVIgM：是丙型肝炎活动和具有传染性的指标，常见于急性HCV感染。抗-HCVIgG：阳性表明体内有HCV感染。,11/27/2019,临床意义（2）,HCV-RNA：阳性提示HCV复制活跃,传染性强，而且血清中HCV-RNA水平可作为治疗的选择以及疗效观察的指标。,11/27/2019,城市牛皮藓,3.性传播性疾病的免疫学检验,11/27/2019,3.性传播性疾病的免疫学检验,性传播性疾病（sexuallytransmitteddisease,STD）：是指通过各种性接触而传播的疾病，简称性病（venerealdisease）,11/27/2019,正规医疗机构是性病患者的正确选择,11/27/2019,衣原体,11/27/2019,淋球菌,11/27/2019,11/27/2019,梅毒螺旋体抗体的检测,梅毒（syphilis）是由梅毒螺旋体(treponemapallidum，TP)引起的一种危害性严重的性传播性疾病,早期主要侵犯皮肤与黏膜，晚期可侵犯全身各组织器官，特别易侵犯心脏与神经系统。机体感染梅毒螺旋体，可产生梅毒螺旋体的特异性抗体与非特异性抗体（抗类脂质抗原的抗体）,11/27/2019,过筛实验非特异性抗体的检测,不加热血清反应素（unheatedserumreagin,USR）试验快速血浆反应素（rapidplasmareagin,RPR）试验,11/27/2019,11/27/2019,确诊实验特异性抗体的检测,梅毒螺旋体抗体血凝试验（treponemapallidumhemagglutinationassay,TPHA）荧光密螺旋体抗体吸附（fluorescenttreponemalantibodyabsorption,FTA-ABS）试验梅毒螺旋体制动（treponemapallidumimmobilizing,TPI）试验,11/27/2019,11/27/2019,过筛实验的临床意义,梅毒的筛选及流行病学调查。梅毒患者的阳性率约为70-95%，特别是二期梅毒，阳性率可高达100%。其它疾病，如麻风，SLE，硬皮病，结核，雅司病等也有一定的阳性率。梅毒疗效的检测：患者经过有效治疗后，抗体血清滴度下降。,11/27/2019,确诊实验的临床意义,对梅毒进行确诊。,11/27/2019,人免疫缺陷病毒（HIV）抗体检测,人免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）是艾滋病（acquiredimmunodeficiencysyndrome