医学微生物学实验二-2011上半年.ppt

医学微生物学实验课件,南华大学病原学实验教学中心EtiologyExperimentalTeachingCenterofUniversityofSouthChina,一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响1、空气中微生物的检查（示教）2、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教）3、紫外线杀菌试验（自做，2人/组）4、抗生素敏感试验（示教）二、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应（示教）,实验内容：,实验名称：细菌的新陈代谢和消毒灭菌,一、微生物的分布,微生物分布非常广泛。通过对外界微生物的检查，了解微生物在自然界中的分布，从而树立“有菌观点”，认识“无菌操作”对于微生物学及医学实践的重要性。,实验操作步骤：,1取琼脂平板2个，一个启开皿盖，培养基面向上，放在实验桌上，30min后盖好皿盖。另1个平板，不启开盖作为对照。22个平板均置37培养1824h，观察结果。,空气中微生物的检查,1、消毒（disinfection）：杀灭物体上或环境中的病原微生物、并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。消毒剂（disinfectant）：用以消毒的药品,2、灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞、病毒和霉菌在内的全部病原微生物和非病原微生物。,（一）消毒灭菌的常用术语:,二、理化因素对微生物的影响,3、防腐（antisepsis）,防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。防腐剂（antiseptic）：用以防腐的药物。,4、无菌（asepsis）：不存在活菌的意思，多是灭菌的结果。,5、无菌操作(aseptictechnique)：防止细菌及其他微生物进入人体或其他物品的操作技术。,（二）消毒灭菌的方法,物理方法,化学方法,辐射杀菌法,滤过除菌法,干燥和低温抑菌法等,热力灭菌法,干热灭菌法,湿热灭菌法,紫外线,电离辐射,微波,常用的化学消毒剂：乙醇、含碘消毒剂、过氧乙酸、过氧化氢、高锰酸钾、新洁尔灭等。,1、高压蒸汽灭菌法,103.4kPa（1.05kg/cm2)（121.3，维持1520min）,灭菌效果最好，可杀灭包括细菌芽胞在内的所用微生物。常用于一般培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的灭菌。,高压蒸汽灭菌器,2、手指皮肤消毒前后微生物的检查络合碘对细菌的作用（示教）,（1）取琼脂平板1个，将底面分成两等份，注明A/B。（2）用无菌棉签蘸生理盐水，在左手食指头上涂擦。用该指头在平板A处琼脂表面涂抹，作为消毒前的对照。（3）用棉签蘸络合碘消毒左手食指。待络合碘干后，依上法在平板B处琼脂表面涂抹。（4）置平板于37培养1824h。,平板A处琼脂表面有细菌生长，B处不长细菌或出现极少的菌落。说明一定浓度的络合碘能杀灭细菌。,【结果】,3、抗生素敏感试验（示教）,一种抗生素只对一定种类的生物细胞有拮抗作用，这种作用范围称抗菌谱。抗生素的抗菌机制影响细胞壁的合成；损伤或破坏细胞膜的结构；干扰细胞碳水化合物的代谢；抑制核酸或蛋白质的合成，这些作用都有一定的选择性。,观察纸片周围有无抑菌圈，并量出抑菌圈直径大小，得出待测菌对所试抗生素的敏感性。,纸片琼脂扩散法试验程序,（a）挑取菌落（b）转种肉汤（c）比浊（d）涂布平板上（e）放置药敏纸片（f）量取抑菌圈大小,4、紫外线杀菌实验,（1）原理：,（2）特点,穿透力较弱；仅能杀死细菌的繁殖体，不能杀死细菌的芽胞。,（3）临床应用仅用于实验室、传染病房、手术室的空气或不耐热物品的表面消毒。注意事项：紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。,三、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应,细菌的新陈代谢,分解代谢,合成代谢,热原质,毒素与侵袭性酶,色素,抗生素,细菌素,维生素,合成代谢产物,细菌的分解代谢产物和生化反应（示教）,细菌对糖、蛋白质的分解能力的不同，因而代谢产物各异，利用生物化学方法鉴别不同细菌称为细菌的生化反应。,糖发酵试验：,葡萄糖发酵试验：,吲哚试验（Indoletest):,甲基红试验(Methyredtest):,VP试验：,枸橼酸盐利用试验（Citrateutilizatio)：,IMViC试验大肠杆菌：+-产气杆菌：-+,第1页：实验内容一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响1、空气中微生物的检查（示教）2、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教）3、紫