抗生素类药物的分析.ppt

第十一章,抗生素类药物的分析AnalysisofAntibioticsDrug,第一节概述,抗生素的定义,抗生素是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。,抗生素的来源,1.生物合成（发酵）,2.化学合成或半合成,特点：1.化学纯度较低2.活性组分易发生变异3.稳定性差,发酵液中杂质,无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、毒性物质,增加异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌,检查,含量测定方法,（一）生物学方法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力,（二）化学及物理化学方法,以理化方法测定主药含量,抗生素活性表示方法效价单位即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少。用或g表示例如1mg青霉素钠为16701mg庆大霉素为590,抗生素的分类（按结构与性质）：内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类林可霉素类、其他抗生素类,第二节内酰胺类抗生素,青霉素类,头孢菌素类,酸性,结构与性质,一、,与碱金属(Na+、K+)成盐,（一）羧基,易溶于水,与有机碱(普鲁卡因)成盐,难溶于水,普鲁卡因青霉素,（二）手性C,(5%头孢唑啉钠溶液1824),头孢菌素类C6C7,青霉素类C3C5C6,旋光性,（三）共轭体系,青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基,UV,青霉素钠UV7-20,（四）内酰胺环,水溶液不稳定,干燥纯净稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,二、,鉴别,（二）呈色反应,1.羟肟酸铁反应,-内酰胺类,NaOH,呈色,头孢菌素类,3.茚三酮反应,-氨基,（三）沉淀反应,1.遇酸,在过量HCl或有机溶剂中溶解,2.有机胺盐反应,（1）重氮化-偶合反应,重氮化-偶合反应,芳伯氨基,-内酰胺环,酰胺,（水解）,水解产物,定量过量,剩余,-内酰胺类,ChP,反应分两步进行：1.水解反应(按化学计算量进行)2.氧化-还原反应(无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定),（水解）,青霉素族,ChP,（钠盐）,-内酰胺类,ChP,（水解）,可见-紫外分光光度法,（三）,（1）原理,稳定剂,JP,青霉素族,USPJP,红色,-内酰胺类,NaOH,ChP头孢菌素类,特点快速、高效、灵敏专属性强、重现性好一法多用（鉴别、检查、含测）,第三节氨基糖苷类抗生素,链霉素双氢链霉素新霉素卡那霉素庆大霉素巴龙霉素,链霉胍+链霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺,绛红糖胺+脱氧链霉胺+加洛糖胺,庆大霉素C复合物庆大霉素C1R=HR1、R2=CH3庆大霉素C2R=R2=HR1=CH3庆大霉素C1aR、R1、R2=H庆大霉素C2aR=CH3R1=R2=H庆大霉素C2bR=R1=HR2=CH3,碱性水溶性抗生素多与硫酸成盐,溶解度与碱性,（一）,链霉素pH57.5庆大霉素pH212,链霉素在230nm有吸收庆大霉素、奈替米星无吸收,羟基胺结构,（二）Molisch试验糖的性质氨基糖苷类,（羟甲基糠醛）,（Elson-Morgan反应）,链霉糖特有反应,链霉胍特有反应,H+,庆大霉素无UV吸收,链霉素B（甘露糖链霉素）,方法TLC中的对照品法（BP）,1.来源反应中间体,（二）硫酸奈替米星检查有关物质ChP采用TLC法对照品法对照品：1.奈替米星标准品1.5mg/ml2.奈替米星标准品3mg/ml3.西梭米星标准品1.44mg/ml结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与标准品溶液（3）所显主斑点相比较，不得更深（1%），其他杂质与标准品溶液（1）所显主斑点相比较，均不得更深（1%），如有一点超过，应不深于标准品溶液（2）的主斑点（2%）,发酵菌种不同工艺差别,规定控制各组分的相对百分含量,ChPUSPBPJP,链霉素、庆大霉素,微生物检定法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。,四、血清中庆大霉素的HPLC法,血浆样品的预处理离子对色谱法的目的：除去氨基酸、肽、胺的干扰选用OPA为荧光衍生化试剂采用柱后衍生化法,第四节四环素类抗生素,A,B,C,D,临床上常用其盐酸盐具有吸湿性,pH37.5荧光,1.,差向异构化,淡黄黑,蓝色荧光,（1）酸性下降解,（2）碱性下降解,（荧光）,1mol/L盐酸-甲醇（1100）0.01mg/ml,UV,正相分配薄层色谱,EDTA克服痕量金属造成的拖尾现象,4-差向四环素（ETC）脱水四环素（ATC）差向脱水四环素（EATC）盐酸金霉素（CTC）,TLC法（1995版）,HPLC法（2000版）,标准品对照法,盐酸四环素,四环素有关物质TLC图,4,0.5,0.5,2,杂质吸收度,ChP、USP,HPLC法（外标法）,系统适用性试验1.防护柱2.有关物质的混合溶液（ETC、EATC、TC、CTC、ATC）之间的分离度符合要求,JP比色法（标准曲线法）,原理,1.熟悉抗生素类药物分析的特点及其常规检验项目。了解抗生素类药物的分析现状，熟悉生物学法与物理化学法测定效价的原理及优缺点。2.