水利尿实验报告

1 / 14 水利尿实验报告 呋塞米对大鼠的利尿作用 目的：利尿药是一种直接作用于肾脏，增加电解质和水的排出从而使尿量增加的药。其中呋塞米是这种药代表，也是一种强效的利尿药。在学习了利尿药的利尿机制之后，以本实验来验证性的观察呋塞米对麻醉大鼠以及清醒大鼠的利尿作用，从而加深对利尿药及其机制的理解，并掌握麻醉和清醒动物的利尿方法。 原理：呋塞米是一种高效的利尿药，其作用机制为：与肾小管髓袢升支粗短上皮上的 Na+ K+ 2Cl-同向转运体选择性的结合，从而抑制了其转运能力，因此， Na 和 Cl 在肾小管处 的重吸收就受到抑制，因此尿浓缩功能受到影响，从而排出大量几乎等渗的尿液。 同时，预先用 1%NaCl 对实验大鼠进行水负荷可以使实验现象更加明显。对清醒大鼠的利尿实验应采取代谢笼法。 一呋塞米对麻醉小鼠的利尿作用 1 材料与方法 实验动物：雄性大鼠 实验药品：乌拉坦麻醉药， 1%呋塞米，生理盐水 实验器材：手术剪，止血钳，眼科剪，烧杯，刻度试管，导尿管，丝线，缝针，试验台，灌胃针。 2 实验方法： 2 / 14 1） 取一只正 常大白鼠，称重，然后用生理盐水按照 20ml/kg 的比例进行灌胃处理。 2） 腹腔注射乌拉坦 /kg 进行麻醉。麻醉好后将大鼠固定在大白鼠台上，取仰卧位，然后从颈部作一纵切口，分离出一侧颈外静脉，并做好静脉插管。 3） 做腹部切口，暴露膀胱，并以荷包蛋缝合的方式对膀胱进行插管，并排空膀胱。 4） 于颈静脉插管处注射生理盐水 1ml/kg，并收集20 分钟尿液流出量作为正常值。 5） 同样方法注射呋塞米 1ml/kg，并收集 20 分钟尿液。比较尿量的变化。 3 实验结果：如下。 分别注射生理盐水和呋塞米 20 分钟收集到的尿量 组号 1 2 3 4 5 均数 标准差 3 / 14 p 值 生理盐水 0 0 0 1 呋塞米 1 3 4 结果分析： 1） 从上表可以看出，每组实验注射生理盐水后收集的尿量明显比注射呋塞米后的小，说明了呋塞米确有利尿作用。 2） 每组所得实验结果偏差较大，以致标准差很 大。这与实验动物的生理状态，实验操作过程有关，是由于个体原因造成的。 3） 可以看到， p，这说明统计结果具有统计意义，即呋塞米具有高效的利尿作用。 5 注意事项 1）分离颈总静脉和插管时，应尽量小心，不可大力撕扯，因为经脉璧薄易被撕裂或者误伤。 2）膀胱插管不宜过深。在做腹部手术时应注意不可损伤输尿管。 3）所有插管内的空气均应排干净。 二 呋塞米对清醒大鼠的利尿作用 1 材料与方法 实验动物：大白鼠 实验药品： 1%呋塞米，生理盐水。 实验器材：称，注射器，灌胃针，烧杯，代谢笼。 4 / 14 2 实验方法： 1） 每组取大鼠 2 只，称重，并给大鼠灌胃，灌胃比列为：生理盐水 30ml/kg。 2） 将两只大鼠分开，其中一只放入代谢笼内做对照组。另一只肌内注射呋塞米： 1ml/kg。放入另一代谢笼。 3） 观察。没 30 分钟收集尿液一次，连续观察 90分钟。 3 实验结果：如下表。 组号 1 2 3 4 均数 标准差 p 值 30min 对照 30min 试验组 组 0 0 0 60min 对照 0 0 3 2 60min 实验组 4 结果讨论： 1）每组注射呋塞米的大鼠尿量明显多于注射生理盐水的大鼠，说明呋塞米能使大鼠尿量增多，即具有利尿效果。 2）由表可知， 30 分钟和 60 分钟均可得 p，即所得结果具有高度统计学意义，说明了呋塞米具有显著的利尿作用。 5 / 14 3）各组实验数据差异与大鼠个体差异和 操作人员的操作以及 实验时间等因素的不同有关，但是不影实验的整体结果。 5 注意事项： 在对对照大鼠处理时，可以肌内注射生理盐水：1ml/kg，以保证两只老鼠所受刺激等因素的影响一致。并且在实验过程中，应尽量保证两只老鼠所处环境相同，避免影响实验结果。 三 总结 1）在实验过程中，第二个实验比较简单，都能很好的得出结果，只是对灌胃技术掌握的不是很好，缺少练习，导致灌胃困难。 2）第一个实验相对困难，两处手术对大鼠造成了很大伤害，在做插管时，主要是对颈 静脉插管不熟悉，以及初次接触荷包缝合方式故使实验时间延长。 3）这两个实验一起做，但没有证明呋塞米对清醒和麻醉大鼠的利尿作用有什么不同之处。可以另作研究。 4）固定大鼠时用力过大，麻醉药物使用过多，麻醉药浓度过高，静脉推注呋塞米过快，实验时间过长等原因均可造成实验大鼠死亡而使实验失败。为了保证实验成功，应尽量避免以上现象出现。 5）实验需要所有实验成员密切配合才能快速而成功6 / 14 的完成实验。 6）呋塞米利尿作用具有高效，迅速，强大和短暂的特点，故在临床上可用于严重水 肿，急性肺水肿和脑水肿以及肾功衰等 某些因素对家兔尿液生成的影响 一、实验目的 1. 掌握膀胱插管技术，神经分离技术，学习尿量的记录和测量方法。 2. 观察神经体液因素 和电刺激对尿生成的影响，并分析其作用机制。 四、实验结果： 【实验讨论】：尿生成过程包括肾小球的滤过作用及肾小管与集合管的重吸收和分泌作用。肾小球滤过作用的动力是有效滤过压，而有效滤过压的高低主要取决于以下三个因素：肾小球毛细血管血压、血浆胶体渗透压和囊内压。 1、 注射生理盐水后，血液被稀释，血浆胶体渗透压下降，肾小球有效滤过压增加，有效滤过率增加，所以尿量增加。 1.生理盐水中的 Na、 Cl 离子被肾小管和集合管完全重吸收了，同时有一些水分也被重吸收， 所以尿液生成量增大，但增大幅度不是太大。 静脉快速注射生理盐水后，尿量增加。 7 / 14 机制：静脉快速注入大量生理盐水，血浆蛋白被稀释，血浆胶体渗透压下降，肾小球有效滤过压增加，加之肾小球血浆流量也增加，滤过率增加，尿液生成增加。 2.注射的葡萄糖溶液直接进入血液循环， 增大了肾血管的血流量，而肾小管和集合管在机体不缺水时又只重吸收葡萄糖，所以葡萄糖溶液的水分全部渗过肾小管，形成尿液。 静脉注射葡萄糖，尿量增加。 机制：近球小管对葡萄糖的重吸收有一定限度，称为肾糖阈。实验中葡萄糖的注射量已经超过肾小管的吸收极限，小管液中就会有葡萄糖，进而小管液的溶质浓度增加，渗透压增加，妨碍了肾小管特别是近球小管对水的重吸收，小管液中的 Na+浓度被稀释而降低，故 Na+的重吸收也减少，氯化钠及水的排出均增加，尿量增加。 2、 静脉注射葡萄糖，使血浆中葡萄糖浓度升高，超过了肾糖阈，以致肾小管液中葡萄糖浓度升高，渗透压升高，对抗肾小管对水的重吸收，从而使尿量增加。 静脉注射去甲肾上腺素，尿量减少。 机制：去甲肾上腺素能使肾血管收缩，肾血流量减少，从而使肾小球毛细血管血压降低，有效滤过压降低，肾小球滤过率减小，尿的生成减少，尿量减少。 3、去甲肾上腺素对受体具有强大激动作用，使肾小球入球动脉收缩，是肾小球毛细血管中血流量降低，滤过8 / 14 率减少，尿量减少，尿速变慢。但实验结果与理论不符，可能是操作失误或存在误差，没有统计学意义。 3.去甲肾上腺素可使入球小动脉和出球小动脉收缩，但前者收缩比后者更明显，使肾小球 毛细血管血浆流量减少，肾小球毛细血管血压下降，肾小球的有效滤过压下降，尿生成减少。 静脉注射速尿，尿量增加。 机制：速尿可与髓袢升支粗段的 Na+-2CL K+同向转运体结合，；由于氯化钠的重吸收被抑制，降低了肾髓质的高渗梯度，从而使肾脏浓缩尿液的能力下降，导致水重吸收减少，尿量增加，产生利尿效果。 3、 。注射呋塞米，一方面使肾血流量增加，肾小球滤过作用增强从而使尿量增加。另一方面通过调 节载体转运功能，抑制髓袢升支粗段 Na+-K+-2Cl-同向 转运，使 NaCl 重吸收量减少，肾小管渗透压下降，尿液浓缩功能减弱，导致肾小管对水的重吸收功能下降，尿量增加。 5.速尿可与髓袢升支粗段的 Na+-K+-2Cl-共同转运系统可逆性结合，抑制其转运能力，使 NaCl 重吸收减少，降低了肾脏的稀释功能，同时使髓质间隙渗透压降低，也降低了肾脏的浓缩功能，从而产生迅速而强大的利尿作用，排出大量等渗尿。 9 / 14 4、 注射垂体后叶素，增加了远曲小管和集合管上皮细胞对水的通透 性，促进了肾小管和集合管对水的重吸收，使尿量减少。 6.垂体后叶素包括催产素和 ADH， ADH 可与远曲小管和集合管上皮细胞管周膜上的 V2 受 体结合，通过兴奋性 G 蛋白激活腺苷酸环化酶，使胞内 cAMP 生成增多，最终增加管腔膜上的水通道，从而提高远曲小管和集合管上皮对水的通透性，增加水的重吸收而使尿量减少。 【讨论思考题答案】 静脉注射抗利尿激素，尿量减少。 机制：抗利尿激素的主要作用是提高远曲小管和集合管上皮细胞对水的通透性，从而增加对水的 重吸收，使尿液浓缩，尿量减少。此外，抗利尿激素也能增加髓袢升支粗段对氯化钠的主动重吸收和内髓部集合管对尿素的通透性，从而增加髓质组织间液的溶质浓度，提高髓质组织间液的渗透浓度，有利于尿液浓缩。 静脉注射乙酰胆碱，尿量减少。 机制：乙酰胆碱能使动脉血压降低，从而使肾小球毛细血管血压降低，有效滤过压降低，肾小球滤过率减小，尿的生成减少，尿量减少。 5、 10 / 14 【结论】注射生理盐水后尿滴数增多；注射葡萄糖使尿量增加。去甲肾上腺素是抗利尿激素，使尿量减少，但实验结果与理论不符，可能 实验误差引起。刺激迷走神经理论上使尿量减少，但实验结果无统计学意义。呋塞米抑制了髓襻升支粗段对钠离子、氯离子个重吸收而产生强大的利尿效应。垂体后叶素含抗利尿激素，使尿量减少。 1、本组实验结果： 实验项目 生理盐水 20ml 20%葡萄糖 5ml 去甲肾上腺素 电刺激右侧迷 走神经 呋塞米 5mg/kg 垂体后叶素对照 0 1 2 1 1 1min 1 3 1 1 5 2min 1 2 2 1 14 实验组 3min 3 2 1 1 26 4min 6 1 2 1 36 5min 4 2 2 2 29 2、班级实验结果 : 组别 对照 第一分钟第二分钟 第三分钟第四分钟 第五分钟 生理盐水 ? 3? ? ? 2? P 值 * * * 20%葡萄糖 P 值 * * * * 去甲肾上腺素 ? 2? 2? ? P 值 * * 刺激迷走神经 ? 2? 4? ? P 值 呋塞米5mg/kg ? ? ? ? ? P 值 * * 垂体后叶素 ? ? ? ? ? 备注： P*，无统计学意义。 11 / 14 五、小组讨论 六、实验结论 由我组实验数据看出，静脉注射生理盐水可使尿量增多。静脉注射葡萄糖、去甲肾上腺素和间断电刺激右迷走神经后，尿量无明显变化。静脉注射呋塞米可使尿量逐渐增加。静脉注射垂体后叶素可使尿量显著减少。 由班级实验数据可以看出，静脉注射生理盐水、葡萄糖可使尿量增多。间断电刺激右迷走神经可使尿量显著增加。静脉注射呋塞米可使尿量显著减少。静脉注射去甲肾上腺素和垂体后叶素的数据无统计学意义。 【讨论思考】 分析尿生成调节实验中，分别静脉注射生理盐水、抗利尿激素、速尿、去甲肾上腺素和葡萄糖后尿量变化的作用机制。 家兔尿生成的调节 2016 级生命科学勷勤创新班 王晋宁 学号：20160006006 1.实验目的 学习用输尿管插管记录尿量的方法。 观察几种因素对尿生成的影响。 2.实验原理 尿生成的过程包括：肾小球的滤过作用，肾小管与12 / 14 集合管的重吸收作用，肾小管与集合管的分泌作用。凡是影响这些过程的因素， 都会因影响尿生成而引起尿量变化。 3.实验对象与实验材料 家兔常规手术器械、止血钳、剪毛剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针、棉花、滴管、纱布、棉线、温热生理盐水、烧杯、污物缸、兔手术台、塑料绳、棉签、动脉夹、注射器、照明灯、保护刺激电极、支架、 PowerLab 生理实验系统、生物电输入线、受滴器、输尿管插管、接尿器皿、麻醉剂、肝素溶液 、 20%葡萄糖溶液、 10%Na2SO4 溶液、肾上腺素、垂体后叶素、 20%甘露醇。 4.实验方法与步骤 家兔称重，麻醉、固定、剪毛、剪颈 部皮肤 67cm，钝性分离颈部肌肉等组织。暴露气管、穿线、手术刀手术剪T 形切口，事先准备好的棉签将气管中的血块弄出，插好气管插管并结扎。分离右侧迷走神经穿线备用。 输尿管和膀胱血管丰富，在插管之前先注射肝素抗凝。 膀胱插管。先用棉线从输尿管下方穿线绕到膀胱底部将膀胱与尿道连接处结扎紧，防止尿液从尿道排出，如果膀胱未充盈，可先用注射器注射生理盐水进入膀胱，让膀胱壁变薄后用大注射针头刺破膀胱壁，然后从穿孔处将充满生理盐水的细塑料管或插管插入膀胱内，确保尿液可进入插13 / 14 管，然后将膀胱壁和插管一 起结扎并固定好，排出气泡，确保导尿管道充满“尿液”。 安装调节好受滴装置，先打开 Powerlab，后打开Chart 软件，设置 3 个通道，调节通道 3 和刺激器的参数。 记录一段“正常”尿生成：观察有滴尿即可，并在通道 3 曲线可显示出尿滴的标记波动变化。耳缘静脉注射温热生理盐水 30ml，观察尿滴和通道 3 的标记。 待尿量平稳后，同法注射肾上腺素溶液 ，观察尿滴标记。 同上，注射 15ml 葡萄糖溶液观察。观察尿滴标记。 注射垂体后叶素 2 单位观察。观察尿滴标记。 注射 10%Na2SO4 溶液 4ml。观察尿滴标记。 刺激右侧迷走神经 200 或 300 脉冲，观察家兔反