抗原抗体反应医学PPT.ppt

抗原可诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体（免疫原性）并与抗原反应（反应性）。抗原免疫动物，获得的血清称为抗血清。,抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激一个B淋巴细胞，使它成为能分泌特定抗体的浆细胞，浆细胞克隆，产生的单一抗体称之为单克隆抗体。,多个抗原决定簇刺激不同B细胞克隆产生的抗体，称为多克隆抗体。,抗体的制备与应用,1,一、抗血清的制备,1、免疫动物：选择合适的动物进行免疫极为重要。选择时应考虑以下几个因素：抗原与免疫动物的种属差异越远越好；亲缘关系太近不易产生抗体应答（如兔大鼠之间，鸡鸭之间）。抗血清量的需要：大动物如马、骡等可获得大量血清（一头成年马反复采血可获得10000ml以上的抗血清）；但有时抗体需要不多，选用家兔或豚鼠即可。,2,初次应答再次应答注意时间间隔，2到4周比较适合大多数动物。,2、抗血清的纯化与保存,免疫动物的抗原可用病毒、细菌和其它微生物。半抗原与载体蛋白发生偶连,纯化的目的是尽量去除抗血清中与目的抗体不相关的成分，防止与特定抗原反应时起干扰作用。常用饱和硫酸铵盐析法，不同分子量蛋白质能在不同盐浓度沉淀。,3,3、抗血清的鉴定和保存抗血清的鉴定动物血采集后，立即分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。（一）双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性按双向免疫扩散技术打两排孔，上排放抗原粗提物（如抗原来自动物血清则放相应的混合血清）和纯化抗原，下排加抗血清，进行双扩散1824h后，仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融合，则证明该动物已产生单价特异性抗体（方法验证的意义）。,4,双向免疫扩散法测定抗血清效价测定抗血清效价有两种稀释方法：一是稀释抗血清，如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释，分别与一个浓度的纯抗原反应；另一是稀释抗原，即把抗原作对倍稀释或按浓度（如mg/ml）进行稀释，分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验（称为棋盘滴定）。,5,抗血清的保存抗血清保存有三种方法。第一种是4保存，将抗血清清除菌后，液体状态保存于普通冰箱，可以存放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如若加入甘油则保存期可延长。第二种方法是低温保存，放在2040度，一般保存5年效价不会有明显下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。,6,二、单克隆抗体McAb)的制备,单克隆抗体的理化性状高度均一，生物活性单一，与抗原结合的特异性强，便于人为处理和质量控制，并且来源容易，所以一问世便受到欢迎和重视。在医学领域中，McAb在诊断疾病、防治疾病以及疾病机制研究等方面起着巨大的促进作用。,7,1、杂交瘤技术的基本原理杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的脾淋巴细胞，小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。,8,2、制备单克隆抗体的基本技术,制备单克隆抗体是复杂而费时的工作，整个技术流程如图7-2。,9,3、人工克隆抗体的制备,用人肿瘤细胞株与人的外周血B淋巴细胞融合获得人源单克隆抗体。EBC（疱疹病毒颗粒）感染人体B细胞，部分基因插入人体B细胞，形成新的B细胞比较稳定，抗体分泌能力也较强。,抗体工程是指利用重组DNA和蛋白质工程技术，对抗体基因进行加工改造和重新装配，表达抗体分子，或用细胞融合、化学修饰等方法改造抗体分子的工程。这些经抗体工程手段改造的抗体分子是按人类设计所重新组装的新型抗体分子，可保留（或增加）天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除（或减少或替代）无关结构，因此比天然抗体更具有潜在的应用前景。,三、抗体工程,四、催化性抗体有催化活性的抗体称为催化性抗体,10,五、抗体在抗肿瘤治疗中的作用,淋巴瘤是一组起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤,可分为霍奇金病（简称HD）和非霍奇金淋巴瘤（简称NHL）两大类,霍奇金病多见于青年,儿童少见,首见症状常是无痛性的颈部或锁骨上的淋巴结肿大（占6080）,左多于右,其次为腋下淋巴结肿大,肿大的淋巴结可以活动,也可互相粘连,融合成块,触诊有软骨样感觉,如果淋巴结压迫神经,可引起疼痛,少数患者仅有深部而无前浅表淋巴结肿大,深部淋巴结肿大可压迫邻近器官,表现的压迫症状,例如纵隔淋巴结肿大可致咳嗽,胸闷,气促,肺不张及上腔静脉压迫症等;腹膜后淋巴结肿大可压迫输尿管,引起肾盂积水;硬膜外肿块导致脊髓压迫症等.另有一些HD病人（3050）以原因不明的特许或周期性发热为主要起病症状.这类患者一般年龄稍大,男性较多,病变较为弥散,常已有腹膜后淋巴结累及.发热后部分患者有盗汗,疲乏及消瘦等全身症状.周期性发热约见于1/6患者.部分患者可有局部及全身皮肤搔痒,多为年轻患者,特别是女性.全身搔痒可为HD的唯一全身症状.非霍奇金淋巴瘤可见于各种年龄组,但随年龄增长而发病增多.男较女为多.大多也以无痛性颈和锁骨上淋巴结肿大为首见表现,但较HD为少.分化不良性淋巴细胞易侵犯纵隔.肿大的淋巴结也可引起相应压迫症状.发热,消瘦,盗汗等全身症状仅见于24患者.大多为晚期或病变较弥散者.全身搔痒很少见。除淋巴细胞分化良好型外,NHL一般发展迅速,易发生远处扩散。,抗CD20单克隆抗体能特意去除B淋巴细胞，达到治疗B淋巴瘤的目的,11,第二节：抗原抗体的反应原理,1、抗原抗体的结合：两者是非共价键结合，可通过范德华力、静电引力、氢键和疏水作用结合，结合是可逆的，游离态与结合态在一定比例达到动态平衡。平衡常数K和温度、PH值有关。,2、多价抗原：一个大分子抗原有多个抗原决定簇称为多价抗原。,两个决定簇相距较远，互相不影响各自与抗体的结合，称为不重叠决定簇，有的抗原决定簇相距较近，互相影响与抗体结合，称为重叠决定簇。,12,第三节抗原抗体反应的应用,沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反应。早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应。可用于抗原或抗体的定性或定量分析。,沉淀反应分两个阶段，第一阶段发生抗原抗体特异性结合，第二阶段形成可见的免疫复合物。经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而快速免疫浊度法则在第一阶段测定免疫复合物形成的速率，称为速率法。现代免疫技术多是在沉淀反应的基础上建立起来的，因此沉淀反应是免疫学方法的核心技术。,13,凝集反应：细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集小块。早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。至1900年在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型。,14,1、常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。,凝集反应应用,新生儿溶血症是指因母、婴血型不合而引起的同族免疫性溶血。在我国以ABO血型不合者占多数，Rh血型不合者较少，其他如MN、Kell血型系统等少见。,ABO溶血症可发生在第一胎，与母体曾受自然界中类似A、B物质的抗原刺激，已具有抗A或抗B抗体有关。,母亲为O型血，父亲为A型、B型或者AB型，而胎儿为A型或者B型时，为母子血型不合。如妈妈是O型血，孩子是A型血，妈妈体内有O型红细胞，血浆中带有抗“A”型红细胞的抗体，通过胎盘，妈妈的抗“A”抗体进入宝宝的体内，与宝宝A型血的红细胞中的A抗原发生反应，所以就发生溶血。母子血型不合不一定会导致溶血症的发生，ABO血型不合的发生率为20左右，但真正发生新生儿溶血的仅为5以下。,15,本病症状之轻重差异很大，一般ABO血型不合者症状较Rh血型不合者轻。病儿常于生后24小时以内或第二天出现黄疸，并迅速加重。随黄疸加深可出现贫血、肝脾肿大，严重者发生胆红素脑病。,16,A型血A凝结源抗B凝结素B型血B凝结源抗a凝结素O型血ab凝结源都无抗AB凝结素AB型血AB凝结源无ab凝结素,血红蛋白表面（抗原）,血浆中（抗体）,2、血型鉴定,正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原,17,补体结合试验,利用抗原抗体复合物同补体结合，把含有已知浓度的补体反应液中的补体消耗掉使浓度减低的现象，以检出抗原或抗体的试验，为高敏度检出方法之一，特别是根据抗原物质的特性，抗原抗体反应不能用沉淀反应或凝集反应观察时也可以利用此法。,免疫粘附补体激活催化,18,补体结合试验是一种传统的免疫学技术，能够沿用至今说明它本身有一定的优点：灵敏度高。补体活化过程有放大作用，比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定极低浓度抗体。特异性强。各种反应