拟南芥培育方法.doc

拟南芥培育方法通用指南一、原理拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。二、步骤1. 准备种植用土我们使用Miracle-Gro混合土（2立方英尺一袋）与Miracle-Gro珍珠岩（8夸脱一袋）来培养拟南芥，在一个可以放下2袋混合土的大容器中和土，1袋混合土（2立方英尺）混入半袋珍珠岩（4夸脱）。注意：Sze实验室在装土之前经常将土灭菌！（方法如下）（1）将干土放入灭菌容器中，直至与顶部相差一英寸，将土拍实。（2）用铝箔纸将容器封住，在每一个容器上放一张灭菌用胶带，缠好。确保容器外没有土，放入灭菌锅。（3）用常规/秒速/快速模式灭菌3050 min，灭菌模式及时间取决于灭菌的容器数量。（4）当温度降至室温，将土放入花盆，轻轻压实。记住将灭菌土保存好，避免种子或菌类污染。灭过菌的土至少可以使用两星期，如无需要请不要多次灭菌。（5）将花盆用去离子水浸没（不要超过土表面）用humidomes覆盖，使其吸水3-6小时或过夜。吸水后应该还保存约1英寸高的水，如果没有请添水。（6）此时的土可以用于种植拟南芥。2. 种子消毒方法A（1）取适量种子（野生型、突变体或互补株系）置于一个EP管中，加1 ml 消毒溶液。消毒溶液：20%Chlorox消毒液0.05%Tween-20用新灭过菌的无菌水配制。（2）用振荡器以最大速度震荡20-30秒。（3）放置7-10 min，偶尔震荡一下。（4）8 000 rpm 离心5秒。（5）仔细将水倒出。（6）加1 ml 无菌水，震荡重旋种子。（7）8 000 rpm 离心5秒，倒去上清。（8）重复步骤6-7，重复四次。（9）将灭菌的种子移到底部铺有无菌滤纸的小Fisher盘（10015 mm）中。（10）将种子用镊子移到琼脂培养基或土中，镊子在70%乙醇中浸泡30 min。方法B（1）将适量种子放入1.5 ml EP管中。加入1 ml 70%乙醇。（2）将水倒出，加入5 ml 70%乙醇，放置5分钟。（3）用无菌去离子水漂洗四次。（4）加入0.1%TritonX-100（或30%漂白液+0.1%TritonX-100），放置10分钟。（5）用无菌去离子水彻底漂洗（至少5次）。（6）将灭菌的种子移到底部铺有无菌滤纸的小Fisher盘（10015mm）中。3. 种植常规注意事项请注意你的种子可能在从亲本结出的过程中携带真菌和细菌，所有的植物种子都需要灭菌，对来自其他实验室的植物或种子这一步也是必要的。在我们实验室脏东西基本来自于种子（因为我们使用灭菌土），花非常容易吸引昆虫，请注意一下花。种植健康的拟南芥在开始前，托盘必须干净，没有旧种子及真菌。（1）将花盆装满土。（2）在托盘中加入无菌水，水位大约在花盆的1/3-1/2高。土壤吸水时间至少3小时。在土表面喷撒无菌水，保证种子可以置于一个潮湿的环境。（3）将种子转移到花盆中（每个花盆8-10粒种子，种子间均匀隔开）（4）种植后在托盘上覆盖一个humidome，将其缠绕好，以起到保湿作用。（5）将托盘放在4C冷室3-5天黑暗处理（5天为佳）（6）将其移到植物生长箱（humidome依然覆盖）（7）在3-4天长日照下植物会萌发。大约5-7天将humidome半开，直至两对子叶全部长出。（8）将humidome移除，一星期浇两次去离子水（例如周二和周五）注意（1）拟南芥对所有逆境都很敏感，所以请只在托盘里没有水时浇水。（2）当植物要进入开花期，每两星期浇一次加入1/4浓度霍格兰溶液的水，两次足够。霍格兰是富氮培养基，促进生殖生长。（3）Miracle-Gro盆栽土具有Micracle-Gro植物生长养分（慢速释放肥），可以支持植物生长至3个月。所以请不要过量施肥。（4）注意植物开始开花的阶段。此时尽量控制害虫。（5）蚜虫是一个普遍问题。喷洒1:100乙酰甲胺磷在染病植株上，重复喷洒三天。注意不要过量喷洒，否则会杀死植物。（6）当植物停止开花，将它们移到通风的环境使种子干燥。当角果变黄或棕色时尽可能快收种，尽量少施压力。（7）注意：首先，你要清除别的物种的种子，用手指摩擦角果，使