血型血清学若干问题PPT课件.ppt

血型血清学若干问题,南方医科大学.南方医院兰炯采,.,一、标本,1、标本采集(1)采错被检者（换床、同名检测未错,输血错)(2)护士送检途中“掉包”(3)大量输液处采样(4)抗凝管未混匀,只采干管凝块血红细胞有凝集,.,2、被检者特殊情况(1)新生儿(Ag不成熟,ABO抗体来自母亲/IgG);老年(Ag）；输异型血/成份血/血浆置换；疾病：白血病，淋巴病：Ag感染多/全凝集；类B真红，多发性骨髓瘤：串钱状AIHA（自身免疫性溶血性贫血）干扰正/反定型冷凝集血浆蛋白紊乱,低丙球血症；造血干细胞移植后罕见先天性无ABO抗体ABO亚型ABO外抗体,.,二、定型试剂,失效;使用不当（AHG最适稀释度）;效价（抗A128，抗B64），亲合力（3min1mm2），特异性（A2B不漏检，抗体筛选，冷凝集素）;染色（抗A，B红，抗-A兰，抗-B蓝），未染色者标签脱落；试剂红细胞3-5%；溶血洗3-5个混合；阴/阳对照（酶，聚凝胺）。,.,三、操作,1、血清1-2滴（50-100u），滴管450倾斜；2、先加血清，后加细胞！3、室温/血清（血浆）4、离心条件/玻片清洁抗-A（256）0.01ml+NS0.49ml取0.1ml+(3-5%)RBC0.1ml1000rpm秒101520301+1+2+2+取离心时间为15秒5、结果观察（凝块大小，游离细胞mf，真、假凝集，镜下膜完整）,.,ABO定型,正定反定吸收分抗A抗A1抗B抗AB抗HA1A2BO放散泌A1+-+-+-AA,HAint+W+-+W+-+-AA,HA2+-+-/+1%-+-AA,HA3Mf-Mf+-/+20%-+-AA,HAbountuMf-Mf+-+-AHAbend-/+-W+-+-AHAel-+-+-AHAx-/w+-+-/+-AA,HAm-/w+-/W+-+-AA,HB-+-+-BB,HB5-MFMf+-BB,HBx-VW+W+-BHBm-VW+-BB,HO-+-HHOh-+?-,.,ABO定型考虑的问题,1、正反定型不以谁为准？-找出原因标本错误（细胞/血清不一个人）输液处采样输异型血新生儿/老年疾病移植ABO外抗体亚型（A2产生抗-A1）试剂2、抗-AB（W+而抗-A，亚型？）3、mf：亚型？输异型血？,.,4、OC（+）：买？ABO外抗体5、抗-A/抗-B：W+吸收放散证实6、唾液/分泌型唾液隔水煮沸15离心上清（倍比稀释）加量抗血清修正液（1：8？）室温静置1hr加对应红细胞离心结果（后留稀释管阳性）修正液：倍比稀释，4+最后一管稀释度7、抗-H参考价值必须同时作AB，A，B，O对照比较8、B2？中国报道B2，对应A2，产生抗-B1，抗BW+，H弱于O强于B，1961，Jacobowic：一个家系母及2均B，但B抗原弱，类似A1与A2，称BK,.,1976，Bryant:提出B2，未被公认：Mollison(Blood+ransfusioninclinicalmedicine),Mohn(Humanbloodgroups),Zmijawsk;CBloodbankingsciences),LawrenceCclinicalpracticesoftransfusionmedicine),肖星甫（输血技术手册），李昌林（免疫血液学）均未承认有B2。9、A2抗A1严重溶血性输血反应10、亚型与输血理论：29个血型系统，400多种血型抗原；（一个人）有什么Ag，不产生什么Ab，缺什么Ag，（接受该Ag）可能产生什么Ab。原则：供者Ag只能比受者少，不能比受者多。亚型病人：接受O型血亚型献血员：当A/B型血用,.,ABO定型与疾病,1、白血病血型变异血型终生不变；基因未变，抗原减弱；“阶段性”，可恢复；只变“少”，不变“多”（A/BO，ABA/B；不会反过来！）2、血浆蛋白紊乱凝集肝脏病，传染病（TB，黑热病），多发性骨髓病球蛋白心肌梗塞，感染，外伤，肿瘤纤维蛋白办法：加盐水散开洗涤红细胞至散开定型例：顾，正定型时而B，时而AB，反定型抗-A分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均小凝块，加盐水减弱，镜下串钱状，红细胞洗涤后正定型为B，血球蛋白紊乱引起B型。例：薛，TB，正定似AB，但抗-A50%凝集，镜下串钱状，加盐水串钱状不完全消失。分析：洗涤3次红细胞抗-A（-），抗-B（+），B型。,.,3、类BG-杆菌感染，A“AB”O“B”感染控制，“B”消失血清中抗-B唾液无B物质可吸收抗-B，吸收后抗-B效价不降低，放散出抗B（比正常B细胞）多（类B与抗B结合疏）加AB血清不凝集（与全/多凝集正别）例：韩，52y，胆道手术，正定型B，但血清合抗-B，与A型血血主/次侧均凝集，与O配血次侧凝集。分析：抗-AB（+），抗-B（+，离细胞多），抗-A（-）。血清中抗-B效价8，抗-A效价512，唾液中H，红细胞上H似O型。，吸收抗-B效价只降1高度，放散点抗B64。O型，产生类B,.,4、多/全凝集细菌污染RBCT活化，出生6个月后产生抗-T多凝集：与部份（？/10）AB型血清凝集全凝集：与“全部”（10份）AB型血清凝集真凝集，洗涤细胞不能去除（血清中抗T已被自己RBC吸收）无自身凝集感染史/血污染控制感染后消失mf凝集4强，37弱全/多凝集,.,正定型吸收/放散，“全/多凝集RBC”吸收抗-A/抗-BRBC吸/放：ABO抗体+抗-T试剂（ABORBCCT未溶化）避开抗T干扰，测定ABO抗体吸收情况判定全/多凝集RBCABO血型，对照：反定型，唾液血型物质制定ABO血型。例：苏，女，8M，肺炎，正定型AB，但配血血清凝集AB红细胞。分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均凝集，游离C50%；10份AB型血清（+），室温强，37消失；RBC不吸收抗-A，抗-B；反定型AC（+），BC（+），自身（-）。O型，全凝集，输ORBC，或ORBC+代血浆（无抗体）,.,5、冷凝集素AIHA，肺炎冷凝集素，甚至30凝集自身/他人RBC。递增温度（37-45）盐水洗RBC例：赵，贫血，正定型“AB”，洗涤RBC后定“O”；与O型配血全侧轻凝集。分析：37盐水洗2次，正定型O型；血清中冷凝集寿效价64，宜37配血，并作自身对照。,.,6、AIHA，LERBC粘自身抗体干扰正定型（蛋白介质ABO抗血清中非特异凝集）；血清中自身抗体干扰反定型。递增温度盐水（223745），反复洗涤RBC正定型氯喹放散法正定型：（兰炯采，中华血液学杂志1988；9（10）：624：二磷酸氯喹以NS配20%，加20%AB血清，PH6.0；压积RBC0.2ml+20%氯喹液0.8ml37震荡5分钟洗3次定型），自身吸收（氯喹放散）反定型，O.C吸收反定型（同种抗体漏检？）,.,例：兰炯采，中华医学检验杂志1990；13（5）311：6/21AIHAABO正反定型不合直抗间抗放散前放散后正反正反+4ABBBB+4ABBBB+16ABBBB+4AB？BB+16ABOOO+-ABOOO,.,例：韩，1y，Hb2g%，正定型：RBC盐水洗涤A；反定型：OC（+），AC（+），BC（+），37(试管)法：OC(-)，AC(-)，BC（+）朱，34y，LE,正定型：A，反定型：6，20凝集AC，37减弱，37（试管）法：AC（-）张，伊文氏综合症正定型：抗-A（+），抗-B（+），自身（+），盐水洗涤不消失。反定型：OC（+），AC（+），BC（+），45盐水洗3次，定O型；与O型血主侧凝集，选择凝集不强于自身对照者输血，无反应。,.,ABO亚型,常规用抗-AB！例：张，胆囊炎，初定O，配血次侧（与O型献血员血清）凝集，主侧（与O型RBC）不凝集。复查：抗-A，B（+），抗-A（-），抗-B（-）（初定血型未用抗-AB而误定O），RBC吸收放散抗-A，唾液有H，无A物质，血清有抗-B，不凝集A2AX例：王，抗-A（-），抗-B（-）初定O，作O型献血，配血凝集。7份O型人血清+EC，3份15份凝，4份30分凝；王清+AC（+），BC（-）。唾液有H，无A，B物质，王C吸收抗-B，排除（血袋）污染。BX（？）,.,新生/婴儿ABO定型,胡利亚、兰炯采，中华医学检验杂志，1992；15（4）：23127例1/20,可靠性1/20,可信度1/2颗粒粗，镜下制定W+2VW+-0无凝集mf少数大块，大量游离细胞,.,AHGRBC+IgMAb凝集RBC+IgGAb不凝集+AHG（搭桥）凝集多价与单价AHG的应用酶RBC被“消化”IgGAb凝集（破坏M，N，S，Fya,Fyb）+/-;现用现配/冰冻保存一期法：RBC+抗血清+酶3715分二期法：RBC+酶3715分洗涤加抗血清3715分,.,聚凝胺假凝集+拘椽酸三纳散开RBC+聚凝胺真凝集+拘椽酸三纳不散开配血卡低离子，牛白蛋白,.,AHG直抗：RBC“充分”洗涤+AHG前滞现象抗查“Ig”（无“特异性”）抗IgG抗C3d交价IgGIgM药物Ab药物Ab间抗：RBC“充分”洗涤+血清3730-60分“充分”洗涤控干水分+AHGRBC（体内）已粘Ig（无论是否血型Ab）间抗均“+”；被检RBC定血型，血清定Ab,.,血型物质：ABH抗原存在于体液中游离的ABH抗原意义/用途：分析ABO血型，中和（ABO）天然抗体（混合血浆中）中和ABO抗体。抗体：,.,天然免疫性产生原因？妊娠，输血IgIgMIgG通过胎盘不能能血型物质中和（一定效价）不中和2-ME裂解19SIgM为7S无影响最适反应温度0-2537,.,凝集反应操作,RBC洗涤2-5%悬液磁砖法试管法：矫正离心条件。抗-A（效价256）0.1ml+NS0.49ml1000转/分离心秒10152030凝块1+1+2+2+以15秒（1000转计时），转速矫正效价-倍比稀释，相差2个高度有意义，相差1个高度不排除操作误差（10242048）术语：A型血清抗B血清，抗-A，抗A血清/抗体,.,吸收放散试验,RBC+（抗）血清Ab吸附到RBC上；血清中对应Ab效价；RBC上Ab采用物理/化学方法离释（放散）下来。用途：1、用已知AbRBC检定放散液（离释下来的Ab）特异性。2、提纯Ab，如抗-A+抗-D，用O.D+RBC吸收放散就抗-D；用A，D+并以抗-D“完全”被RBC吸收抗-A，留下抗-D。注意：吸收抗-A/抗-B以效价32为宜；弱Ab（ABO亚型），吸收/放散不弱；只有56热放散3-5分钟，放散保留RBC定血型,.,放散方法,1、热放散：1RBC：1NS5615分。2、酒精法：RBC-20/37交替3次溶解；10分酒精（-6，40%）+1份RBC稀释液-20至-4，30-60分钟离心取沉淀+4蒸馏水混匀离心重复洗沉淀3次加原1/2红细胞体积盐水3730分钟离心取上清液。3、乙醚法：压积RBC+等量盐水+2体积乙醚加塞1分钟取塞挥发离心，弃上层乙醚5610分钟去残余乙醚离心取底层水溶液。,.,4、冰冻复融法：0.5ml压积RBC+0.15mlNS加塞，旋转试管，RBC布于试管内表面平放-20-7010分钟热水冲试管取上清液。5、超声波法：2份RBC+1份6%牛白蛋白；超声波水溶液中放蒸馏水插入试管1分钟，溶血离心取上清液。6、洋地黄皂苷：1份RBC+9份NS+0.5分洋地黄皂苷溶血离心弃上清液沉淀沉淀洗5次+2ml甘氨酸混匀1分钟离心，取上清液+1/5体积PBC离心取上清液加1/3体积牛白蛋白。,.,7、冷酸法：1ml压积RBC+1ml冷盐酸+2ml0.1M甘氨酸混匀，冰浴1分钟离心，取上清，每ml加0