从进境冻带鱼中检出弗劳地枸橼酸杆菌

动植物检疫 1 9 9 9年第 4期 总 第 3 2期 W丑 t e r T姗s B f M y c o 1 S o c 6 6： 1 8 3 1 8 5 3 、 B u dl C B a nd W est o n W H 1 9 4 7 Ap p l i c a t i o n O t he mi ne r a l m e t ho d t o ma i n锄 n i r 幢 o o n Ue c t i om of f u n g u s c u l t u r e s Am J Bo t 3 4： 5 5 55 6 1 4 、 He e k l y D J 1 9 7 8 P r e s e r v a ti o n O f mi c r o o r g a n i s ms Ad vM c r o b i o 1 2 4： 1 5 3 5 、 Hwa n g SW 1 9 6 6 l o n g t e r m p r e s e r v a t i o n o f f u n g u s c u l t u r e s wi t h H q 1 1 i d n i t r o g e n r e f r i ge r a t i o n Ap p l M i c r o b i D l 1 4： 7 8 47 8 8 6 、 Ra y c h a u d h u r i S P e t a l 1 9 9 0 Re ne w O f t r o p i c a l 囝 7 一 p h mt p a t h o l o g y Vo 1 6 To d a y an d t o mmr r o w 3 p rin t e r s a n d p u b l i s h e 巧 7、 S mi t h D n a l Cr y o p r o t e c t a n t a an d c r y o p t e e r v a t io n o ff un g1 Tr a as Br M y e o 1 Se e 8 0： 36 0 3 63 8 、 S mi t h D an d0n i 0 砌 A H S 1 9 8 3A c mp a r i s o n 0 s o m e p r ese r v a rio n t e c h n i q u e s f o r f u n g y Tr a c t s Br M y c o 1 S o c 8 1： 5 3 5 5 4 0 9 、 S n e l l J J S 1 9 8 4 Ge n e r a l i n t r o d uc fi o n t o ma i n t e n8 2 1 C e I n“ M a i n t e n a n c e o f M i c r o o r g a n i s m ” L o n d o n ： Ae a d e n fi c Pr e s s 从进境冻带鱼中检 出弗劳地枸橼酸杆菌 j r 盎 g g s ； 4 5 ( 汕头 动植物 检 疫局汕 头 5 1 5 0 4 1 ) 摘要1 9 9 9年 4月， 从进境 冻带鱼中检 出一株 弗劳地枘糠 酸杆 茵。该 菌株 的 培养特性、 菌落特征及 生化反 应与沙门氏 菌属相似， 并能 与沙 门氏菌 AF群 多价 0 血 清 发 生 凝 集 反 应 。 关 键词 冻 坚 弗 劳 地 地 鉴 熊 盘鱼 激萄 搀 孵 丑 二 ， 业 孵性 f “ r 枸橼 酸杆菌又 称柠檬酸 杆菌( C l t r o b a c r ) ， 在 自然 界 分 布 很 广 ， 存 在 于 污 水 、 食 物 、 人畜的粪和 尿 中， 是 人类肠 道 正 常的寄 居菌 ， 当机体 抵抗力下降 时， 可引起腹 泻、 尿 道感 染 、 胆囊 炎 、 脑膜 炎 、 呼吸道 感 染、 剖 面 感染 及败血症 等。本菌属有 3个 种， 代表 菌 为弗劳地枸橼酸杆 菌( C f r e u n d i i ) ， 其余两 种为异型 枸橼 酸 杆 菌 ( C d i v e r s u s ) 和 丙二 酸 阴 性 拘 橼 酸 杆 菌 (C a ma l o n a t i c u s ) 。 1 9 9 9年 4月， 某公 司从 印 度进 口冻 带 鱼一 批， 我们按规定 抽样送 实验 室 检验 ， 分 离到 一 株 细菌 ， 经生化试验确定为 弗劳地枸橼酸 杆菌 ， 现将清况报告如下 。 1 材料 1 1冻 带 鱼 样 品按 检 疫抽 样 方 法 随机 抽 取 。 1 2培养 基和 试 剂 缓 冲 蛋 白胨 水 ( B P ) 预增 菌液 ， 亚硒酸盐 胱氨酸 ( s o) 增菌液 ， 四 硫磺酸 钠 ( TTB) 增 菌 液 ， DHL琼 脂 ， S S琼 脂， 三 糖 链 ( T S I ) 琼脂 ， 微 量生 化培 养基 及 试 剂均购 自浙江 省军 区后勤 部卫 生 防疫检 验所 ； 沙门 氏菌 AF群 多价 O血清购 自卫 生部 上 海生 物制 品研 究所 ； 5 9种沙 门 氏菌 属 因子血 清 由卫生部 兰 州生 物制 品研 究所 生产 。 2方法 2 I 预增 菌和增菌无 菌取样 品冻鱼 的内 脏、 肌 肉、 鳃等 2 5 g和 2 2 5 ml B P培养液 于灭 菌捣碎器 内捣碎 ， 装入 5 0 0 ml 广 口瓶 ，3 7 预增 菌 1 8小 时， 取 前 增 菌液 按 1 ： 1 0接 种 S C增 菌 液 和 T TB增 菌 液 ， S C增 菌 液 于 3 7 培养 2 4小 时， T TB增菌液于 4 2 培养 2 4小 时 。 2 2 细菌分离 培养和镜 检用无 菌接 种环 挑取增 菌液划 线接 种 D HL琼 脂 平板 ， 3 7 培养 2 4小 时后 ， 挑 取 可 疑 菌 落 穿 刺 接 种 TS I 琼脂高 层斜 面作纯培养 ， 再 将纯苗 接种 S S琼脂平板 ， 观察菌落 生长情 况 ， 同时涂 片 作革兰 氏染色镜检 。 2 3生化试验和相关 血清学试验按 常规 方法进行 生化 试验 。用纯 菌分 别 与 沙 门 氏 菌 AF群 多价 O血清及 5 9种沙 门氏菌属 27 维普资讯 动植 物捡疫 1 9 9 9年第 4期 总第 3 2期 因子血 清作 玻片凝集试验， 并用 生理盐水 作 对 照试 验 。 3 结 果 3 1生长特性 ： 3 1 1在 D HL琼脂 平板 上该 菌生长为 圆 整 、 光滑、 湿润 、 无色半透 明、 中心带黑色 ， 直 径 约 0 8 1 5 ram 的菌落 。 3 1 2在 S S琼 脂 平板 上为湿 润 、 隆起 、 边 缘整齐 、 半透 明的细小 菌落， 2 4小时 内中心 无黑色 ， 3 6小时后部分 中心变黑色 。 3 1 3 在 T S I琼 脂 中斜 面 产 碱， 高 层产 酸 ， 微 产气， 产 S 。 3 2 形 态染色 特性 ： 涂片镜检 为革 兰 氏阴 性短 小杆菌， 无 芽胞 。 3 3生化特性 ： 生化试验结果见下表。 西 摩霉 蒡 酸 爱一+一+一+ 丙0 二N 明 酸P 胜 钠G 薯 霸 3 4 血清学试验 ： 该菌可与沙 门氏菌 AF 群多价 O 血清 明显凝集 ， 与 5 9种沙 门氏 菌 属 因 子 血 清 中 Ol 、 O 4 、 O1 ” O 2 7 、 HK 、 H 、 1 5 发 生部分凝集 ， 与生理盐水 不发生凝集。 4 小结与讨论 4 1 根据生 长特性 、 形态染 色特性 、 生化试 验结果 ， 确 定该 菌株为弗劳地枸橼酸杆菌 。 4 2据 有关文 献记 载， 枸橼 檬酸 杆菌 属为 符台 肠杆菌科 和 沙 门氏苗族定 义并 有 动力 的细菌组成 能在抑制和延迟大肠杆菌生 长 的培 养基 上 生 长， 如 T TB培 养 液 和 S C培 养液 中均能生长 ， 而在大多数分离用平板 培 养基 上， 菌 落 特 征 与 沙 门 氏菌 属 相 似 ， 在 T s I 琼脂上 的反 应也与沙 门氏菌相 似 ， 而且 许 多枸橼酸杆菌 属 的血 清型 与沙 门 氏菌 属 28 等可发 生交叉凝集 常常与抄 门氏菌 混淆 而 易造成 误判 ， 这次 我们按规 程进行沙 门氏菌 分离鉴定 时就 碰到这 种情 况 。 目前 对 鉴定 枸橼 酸杆菌属 主 要靠生 化反 应 ， 因此 可利 用对 枸橼 酸杆 菌属有 鉴定 意 义 的生 化试验 与沙 门氏菌属相 区别 ， 例 如枸橼酸杆菌不能 使赖 氨 酸 脱 羧 基 可 在 KC N 培 养 基 上 生 长。 大 部分 菌 株不 具 有 鸟 氨酸 脱 羧 酶。 另 外 ， 再结台其 可利 用 枸橼 酸 盐， 发 酵葡 萄糖 产气， 产 生 S以及 丙 二酸 盐 阴性 等 特 征 加 于鉴 定 。 4 3 本次分离到 的弗劳地枸橼酸杆 菌可 与 沙 门氏菌 AF群 O 多价 血清 发 生 明显凝 集 也 能 与 5 9种 沙 门 氏 菌 属 因 子 血 清 中 、O4 、 Ol 9 、 O 2 ”HK 、 H 、 l 5 发生反 应， 由于 本实验室设有现成 的枸橼 酸杆 菌血清， 因而 未能鉴定 出其血 清型 。该 菌株 的 O抗原和 H抗 原是 否 与本实验 中沙 门氏菌 园 子血清 的 O抗原和 H 抗 原都 有交 互关 系 ， 还 有待 进一步探索 。 4 4 尽 管 少 见 枸橼 酸 杆 菌 引 致 病 害 的 报 道 ， 但该 菌为 条件 性致病 菌， 当机 体抵 抗 力 下降时 可弓 l 起腹泻、 尿道感染、 中耳炎、 瞄 膜 炎、 呼 吸道 感 染 、 创面 感 染 及 败血 症 等。 为此 ， 我们提请 有关部 门加强对 枸橼酸杆菌 的检查， 对 污 染 的 产 品 作严 格 的无 害化 处 理， 以防止 其扩散危 害人畜 的健康 。 致谢 ： 汕 头局杨 燕 忠高级 兽 医师提 供 有关 资 料 和 帮助 ， 表示 感谢 ! 参 考 文 献 1 R E布坎 南 ， N E 吉 本 斯 编 ， 1 9 8 4 ， ( 伯 杰 细 菌 鉴 定 手册) ， 科学 出版 社 ： 3 9 03 9 2 。 2朱 自忠主 编 ( 实 用 医学检 验学 ) ， 人 民军 医 出版 社 ， 1 9 9 2 1 1 ， 第 一 版 ： 6 2 6 6 2 7 。 3 P R，爱 德 华 ， w H 爱 文 编 ， ( 肠 杆 苗 科 的 鉴 定) ， 卫 生部 药 品生 物 制 品 检 验 所 ， 1 9 7 8 ： 3 1 0 3 2 3。